PENTRA MS60血液分析儀檢測不典型淋巴細胞結(jié)果分析

徐 鵬， 薛冰蓉，吳 延，楊渝偉，薛 莉，葉 平

(1.綿陽市中心醫(yī)院檢驗科，四川 綿陽 621000;2.堀場(中國)貿(mào)易有限公司醫(yī)療事業(yè)部，上海 200335)

血常規(guī)是最基本的血液學分析項目，及時出具患者血常規(guī)診斷報告，縮短門診患者等候血細胞分析報告時間是本科室亟待解決的問題。近期本科室增設了用血量少、檢測時間更短的PENTRA MS60血液分析儀(簡稱PMS60)。PMS60和SYSMEX XS800i血液分析儀(簡稱XS800i)同時使用必然會導致結(jié)果差異，那么能否實現(xiàn)結(jié)果互認并滿足臨床診治需求，是目前必須解決的問題。如PMS60儀器的不典型淋巴細胞(atypical lymphocyte，ALY)是在散點圖中位于淋巴細胞和單核細胞之間的一群細胞，包括小原始細胞、大淋巴細胞、反應性淋巴樣細胞、刺激性淋巴細胞、漿細胞等[1]，而XS800i與ALY相應的警示標志應為原始細胞、異型淋巴細胞、異常淋巴細胞等。為了驗證PMS60測定ALY結(jié)果的可靠性，我們以顯微鏡分類鏡檢為標準，同時用PMS60、XS800i檢測相同樣本，對其ALY的測定結(jié)果進行比對與分析。

材料和方法

一、樣本來源

408例樣本均來自綿陽市中心醫(yī)院門診患者，經(jīng)PMS60檢測出現(xiàn)含ALY報警的樣本193例(男92例、女101例，年齡27 d～56歲，兒童158例，成人35例)，無ALY報警的樣本215例(男108例、女97例，年齡1個月 ～80歲，兒童162例，成人53例)。

二、方法

1.儀器與試劑 PMS60為法國ABX公司產(chǎn)品，XS800i為日本Sysmex公司產(chǎn)品。2臺儀器均使用原裝配套試劑和質(zhì)控品。OLYMPUS CX21顯微鏡由日本奧林巴斯公司生產(chǎn)。瑞氏染液按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》(第3版)要求配制。

2.樣本采集 采用BD公司提供的含乙二胺四乙酸二鉀的尖底采血管采集末梢血0.5 mL后用混勻器充分混勻，采用BD公司提供的乙二胺四乙酸二鉀真空采血管采集靜脈血3 mL輕輕顛倒混勻，上機檢測，制備符合要求的血涂片并編號染色，均在2 h內(nèi)完成。

3.檢測方法 PMS60和XS800i測定均嚴格按照血液分析儀操作規(guī)程進行操作。每張血涂片由有經(jīng)驗的檢驗工作人員在顯微鏡下采用雙盲法分類200個白細胞。

三、ALY陽性判斷標準

以顯微鏡檢查結(jié)果作為“金標準”。將儀器測定結(jié)果與鏡檢結(jié)果進行對比，有該項報警信號者，若鏡檢陽性，則為真陽性，否則為假陽性;如果鏡檢陰性同時也沒有該項報警信號，則為真陰性，如果鏡檢陽性而沒有該項報警信號，則為假陰性。

1.PMS60 以儀器廠商提供標準為依據(jù)，即出現(xiàn)ALY提示信息且比例＞2.5%和/或絕對值＞0.25×109/L為儀器報警陽性。

2.XS800i 出現(xiàn)原始細胞、異常淋巴細胞和異型淋巴細胞任何1項或1項以上為儀器報警陽性。

3.血涂片 (1)非淋系異常細胞≥1%;(2)異型淋巴細胞≥2%;(3)異常淋巴細胞(原始或幼稚淋巴細胞)≥1%;(4)漿細胞≥1%。只要滿足上述任何一項指標者即為陽性。

四、統(tǒng)計學方法

運用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件，對儀器顯示的ALY計算Kappa值，判斷警示標志與相應細胞檢出的一致性。Kappa值≥0.75，兩者達到滿意的一致性;0.4≤Kappa值＜0.75，兩者一致性尚可;Kappa 值 ＜0.4，兩者一致性不夠理想[2]。

結(jié) 果

一、2臺血液分析儀出現(xiàn)ALY報警陽性樣本比對分析

PMS60與XS800i出現(xiàn)ALY報警一致率為89.7%，Kappa值為0.793，提示信息的一致性滿意。見表1。

表1 PMS60與XS800i出現(xiàn)ALY報警的比對分析(例)

二、2臺血液分析儀出現(xiàn) ALY報警與顯微鏡分類結(jié)果比對分析

與顯微鏡分類相比，PMS60出現(xiàn)ALY報警的Kappa值為0.792，一致性評價為滿意，血涂片復檢率(復檢率=真陽性率+假陽性率)為47.3%、漏檢率(假陰性率)為1.5%、總符合率(準確度)為89.7%、約登指數(shù)為0.82;XS800i出現(xiàn)ALY報警的Kappa值為0.779，一致性評價為滿意，血涂片復檢率為43.9%、漏檢率(假陰性率)為3.4%、總符合率(準確度)為89.2%、約登指數(shù)為0.79。見表2、表3。

表2 2臺血液分析儀出現(xiàn)ALY報警與顯微鏡分類結(jié)果比對分析 (例)

表3 2臺血液分析儀出現(xiàn)ALY報警的敏感性及特異性分析 (%)

三、PMS60驗證試驗

隨機選擇112例樣本在該儀器上檢測，并與顯微鏡分類結(jié)果對比分析，結(jié)果顯示20例ALY陽性樣本中有5例假陽性，92例陰性樣本中有1例假陰性，準確度為94.6%。

討 論

PMS60采用的雙鞘流通道技術(shù)是白細胞五分類、幼稚細胞定量測定的核心原理。在LMNE散點圖中同時得到嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞、嗜堿性粒細胞、ALY和巨大未成熟細胞的結(jié)果。PMS60出現(xiàn)ALY報警信息的原因是樣本中可能存在漿細胞、ALY和大淋巴細胞[1]。XS800i采用半導體激光流式細胞結(jié)合細胞染色技術(shù)，在DIFF和BASO通道中同時得到嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞和嗜堿性粒細胞的結(jié)果，同時還得到幼稚粒細胞和OTHER(相當于PMS60的ALY)2個研究性參數(shù)結(jié)果，在白細胞提示信息欄中可得到原始細胞、核左移、異型淋巴細胞、異常淋巴細胞等提示信息。XS800i中的OTHER參數(shù)僅對原始細胞、異型淋巴細胞及異常淋巴細胞等進行大概分析[3]，而對于PMS60測定的ALY結(jié)果雖然是定量的，但畢竟是多類細胞的綜合體。因此，PMS60的ALY警示標志只能與XS800i的OTHER警示標志做定性比較。本研究顯示，2臺儀器間出現(xiàn)ALY報警信息一致率高(89.7%)，Kappa 值為0.793，一致性滿意，該項可實現(xiàn)檢驗結(jié)果互認。

以顯微鏡分類為標準，PMS60對ALY報警提示的Kappa值為0.792，顯示一致性為滿意。顯微鏡分類陽性的163例樣本中，出現(xiàn)異型淋巴細胞141例、原幼淋巴細胞5例、異常細胞6例、幼稚粒細胞8例、漿細胞2例、幼紅細胞1例。可見PMS60檢測的ALY主要是異型淋巴細胞，而健康人血液中偶見異型淋巴細胞一般不超過2%[4]。另外，PMS60提示ALY的準確度、敏感性及特異性都比較高(依次為 89.7%、96.3%、85.3%)。因此，PMS60對ALY的比例和絕對值設定的陽性閾值分別為2%和0.2×109/L，而且需在ALY比例 ＞2.5%和/或 ALY 絕對值 ＞0.25×109/L時儀器才會出現(xiàn)ALY報警信息，此方案是可行的，此時進行顯微鏡分類也是必要的。

儀器的設計原理保證了儀器檢測結(jié)果的敏感性和穩(wěn)定性[5]，用血液分析儀進行全血細胞分析，總希望有較高的定量檢測敏感性以避免漏檢，但這勢必會帶入假陽性。血液分析儀對全血細胞進行分析，不是由細胞核、細胞漿、細胞膜結(jié)構(gòu)的整體差異來鑒別細胞，因此不可避免存在干擾因素而產(chǎn)生一定的誤差。雖然血液分析儀可以大大提高工作效率，可信度也較高，但是如果完全依靠儀器檢測結(jié)果，不加以分析和復查直接發(fā)出報告，會向臨床發(fā)出一定數(shù)量的錯誤報告，造成誤診或?qū)е虏缓侠碇委焄6]。因此，根據(jù)國際血液學復審協(xié)作組制定41條規(guī)則和國際血液學復審協(xié)作組認為5%是保證患者檢測結(jié)果安全的最大可接受的假陰性率和儀器識別能力及參數(shù)[7]，對PMS60制訂合適的復檢標準是必要的。本研究顯示，當PMS60提示ALY陽性標準制訂為ALY比例＞2.5%和/或 ALY 絕對值 ＞0.25×109/L 時，其陽性預測值和陰性預測值都比較高(分別為81.3%、97.2%)，約登指數(shù)為 0.82(理想值為1)，準確度為89.7%(理想值為100%)。因此，PMS60的ALY陽性判斷標準是可信的。

綜上所述，PMS60對ALY具有較高的敏感性及較強的識別能力。在保證儀器正常使用情況下，當有ALY比例＞2.5%和/或ALY絕對值＞0.25×109/L時，必須進行顯微鏡分類。

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