聯合應用免疫法與化學法潛血試驗對胃出血的診斷價值探討

路愛麗，齊振普，張 敏

(新鄉市第一人民醫院檢驗科，河南 新鄉 453000)

目前潛血試驗多針對檢測標本內由于少量出血而存在紅細胞破壞釋放的血紅蛋白(hemoglobin，Hb)。潛血檢測方法有免疫法(膠體金免疫層析法等)和化學法(匹拉米洞定量法等)[1-2]，2種方法相比，免疫法敏感性、特異性都有很大提高，不受飲食或相關藥物影響，已被廣泛應用于臨床和批量人群的查體。實際應用中，常發現胃出血者免疫法與化學法結果不一致，免疫法出現陰性結果。我們為驗證方法的可靠性，對膠體金免疫層析法(免疫法)和匹拉米洞定量法(化學法)進行比較。

材料和方法

一、研究對象

胃出血組為胃鏡檢查確診為胃出血患者30例，對照組為隨機抽取胃鏡檢查確診為無胃出血的消化科門診患者45例。空腹12h，在胃鏡檢查過程中收集胃液約50 mL。胃鏡檢查和胃液檢驗均征得患者同意，本研究也得到醫院倫理委員會的認可。

二、試劑

免疫法潛血試帶由上海凱創生物技術有限公司提供。化學法試帶由珠海貝索生物技術有限公司提供。

三、方法

1.免疫法 采用膠體金免疫層析原理，Hb與膠體金標記的單克隆抗體結合后，再與固相抗體結合，形成抗體-抗原-膠體金標記抗體復合物(雙抗體夾心法)，在檢測區出現紅色條帶，同時出現紅色質控條帶為陽性。單獨出現質控條帶為陰性，不出現質控條帶為試劑失效。操作與結果判斷均嚴格按照說明書進行。

2.化學法 在酸及H2O2作用下，匹拉米洞與Hb反應，產生紫藍-紫紅的顏色。操作與結果判斷按照說明書進行。

四、統計學方法

采用SPSS16.0統計學軟件進行分析，2種方法分別檢測對照組與胃出血組的胃液標本，結果用Pearson χ2檢驗進行比較，P ＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

一、敏感性與檢測范圍

將已知Hb濃度的人抗凝全血用生理鹽水稀釋成濃度為 5000、2500、2000、1000、500、100、10、1.0、0.05、0.01 μg/mL 的 Hb 溶液，混勻，用 2種方法進行檢測，結果見表1。可見Hb含量在0.05 ～2000 μg/mL 之間免疫法均可檢出。但Hb＞2000 μg/mL時，可能出現競爭抑制而呈假陰性。化學法只能檢出Hb含量在10 μg/mL以上的標本。

二、特異性與方法比對試驗

胃出血組30例與對照組45例胃液標本分別用2種方法檢測，結果見表2。2種方法結果差異有統計學意義(χ2=114.466，P=0.000)。

有文獻報道，胃液中消化酶可消化Hb，使其失去免疫原性，從而使免疫法出現假陰性[3-6]。為了驗證免疫法陰性、化學法陽性的結果是否由胃液消化作用引起，做了以下試驗。在2 mL胃液中加入患者本人全血(Hb 142 g/L)100 μL，放入37℃水浴箱中，觀察不同時間免疫法和化學法的反應結果。見表3。結果顯示，胃液消化作用的確可使免疫法出現假陰性。在2 mL胃液中加入患者本人全血100 μL，37℃反應1 h，免疫法即為陰性。化學法反應至 8 h，結果仍呈強陽性(++++)。

表1 免疫法和化學法的檢測范圍

表2 2種方法胃出血組和對照組同時檢測胃液潛血結果比較

表3 免疫法與化學法胃液潛血比對試驗(37℃)

討 論

2種方法潛血試驗的敏感性、線性范圍和特異性比較，免疫法可檢出最低0.05 μg/mL的 Hb，化學法只能檢出10 μg/mL以上的Hb，二者敏感性相差200倍。Hb 量在0.05 ～2000 μg/mL范圍內免疫法均可檢出。標本中Hb＞2000μg/mL時，可因雙抗體夾心法競爭抑制現象而呈假陰性。化學法只能檢出Hb含量在10 μg/mL以上樣本。免疫法只與人Hb起反應，不與動物血和其他氧化劑發生假陽性反應。化學法易受氧化劑影響，要求試驗前3 d禁食動物血、肝，富含葉綠素食物，鐵劑和中藥，避免假陽性[7]。

由表2可見，免疫法對照組出現1例、化學法出現7例假陽性，經隨訪得知，6例陽性者在檢測前均食入了動物肉類和菠菜。2種方法同時陽性1例是鼻出血者部分血液咽下入胃所致。胃出血組化學法均陽性，免疫法出現2例假陰性，對該2例樣本第1次稀釋液再稀釋1次重新檢測，結果陽性，原因是胃液中Hb過高出現雙抗體夾心法的“競爭抑制”現象導致假陰性。因此取標本時量宜少不宜多，以避免假陰性。

胃液可消化Hb，使其失去免疫原性，導致免疫法出現假陰性結果。由表3可見，當胃液中出血量 ＜50 μL/mL(相當于 Hb 7000 μg/mL)時，免疫法可出現假陰性結果。化學法是Hb中Fe3+具有類過氧化物酶作用，催化H2O2與色原而顯色，不受胃液消化影響，不易出現假陰性。免疫法反應結果還與血液在胃液中停留時間有關[3-4，6-7]。由表3 可見，在2 mL 胃液中加入100 μL患者本人的血液，37℃反應1 h，免疫法為陰性。化學法反應至8 h，結果仍呈強陽性(++++)。免疫法與化學法聯合應用，可起到優勢互補作用。在分析免疫法和化學法結果時，要結合臨床癥狀綜合考慮。

目前，免疫膠體金層析法只是定性試驗，僅給出陽性或陰性結果，不能對胃出血患者進行療效觀察[8-9]，很難確定定量反應關系，因此不能指導臨床判斷出血量。而化學法可根據反應時間和顏色深淺大致估計出血量多少(半定量)，適合對臨床的正確引導。

免疫法的高敏感性、特異性和檢測范圍，但又存在Hb過高出現鉤狀效應和胃液消化Hb導致假陰性的現象。雖然化學法敏感性、特異性較差，但可彌補免疫法的缺陷。聯合應用免疫法與化學法進行胃液潛血試驗，對檢測胃出血結果更可靠，可起到優勢互補的作用。

總之，聯合應用免疫法與化學法進行胃液潛血試驗會出現2個結果不一致的情況。如何解釋檢驗結果，需要結合臨床體征和其他檢查(胃鏡、腸鏡等)結果綜合考慮。如果臨床癥狀高度懷疑出血，但胃液潛血試驗結果免疫法陰性、化學法陽性，應考慮免疫法的競爭抑制現象或胃液消化作用所致的假陰性。如果胃鏡或其他檢查不支持胃出血，化學法陽性時，應考慮其他氧化劑導致的假陽性。出現免疫法與化學法結果不一致時，應及時與臨床溝通，指導臨床正確解讀檢驗結果，避免臨床醫師對檢驗結果的誤會，從而對患者做出正確的診斷。

[1]葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].第3版.南京:東南大學出版社，2006:310-311.

[2]吳 鵬，李 艷，陳 進，等.聯合免疫法和化學法檢測糞便隱血的臨床應用評價[J].檢驗醫學，2010，25(3):176-178.

[3]張國祥，許文龍，楚 旭.免疫法糞便潛血試驗用于上消化道出血性疾病診斷的評價[J].江西醫學檢驗，2007，25(4):381-382.

[4]邵維杰，曹丹如，陳 悅，等.一種檢測糞便隱血的改良化學法[J].檢驗醫學，2009，24(4):286-288.

[5]畢紅琳，林 玲.3種大便隱血檢測方法的比較[J].檢驗醫學與臨床，2010，7(22):2495-2497.

[6]蔡鋼強，陳化禹，李 冬，等.胃液對免疫膠體金隱血試驗影響的實驗分析[J].檢驗醫學，2008，23(1):113.

[7]韋常麗.糞便潛血單克隆抗體法臨床應用的探討[J].廣西中醫學院學報，2003，6(4):56-57.

[8]Kabir S.Review article:clinic-based testing for Helicobacter pylori infection by enzyme immunoassay offaeces，urine and saliva[J].Aliment Pharmacol Ther，2003，17(11):1345-1354.

[9]唐 衡，桂滿元.兩種方法檢測糞便隱血比較與評價[J].國際檢驗醫學雜志，2008，29(9):840.