人乳頭狀瘤病毒L 1殼蛋白對宮頸癌前病變及宮頸癌的診斷價值分析

陸 萍 祖木熱來提·艾尼瓦爾 焦 楨 瑪依努爾·尼牙孜

新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院婦科，新疆烏魯木齊 830001

宮頸癌是威脅女性生命健康的第2大惡性腫瘤，發(fā)病率僅次于乳腺癌[1]，每年我國宮頸癌的新發(fā)病例和病死數(shù)分別為13.5萬人和5萬人[2]。近些年來宮頸癌的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升。HPV病毒感染的患者患子宮頸癌的相對危險性比沒有感染HPV病毒的婦女相比增加250倍[3]。宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）病變程度反映了宮頸癌發(fā)生發(fā)展的連續(xù)過程，因此探索一種準(zhǔn)確的篩查指標(biāo)與方法對宮頸癌的早期防治有重要意義，L1蛋白是近年來研究HPV感染狀態(tài)的有效指標(biāo)[4]，本研究試圖通過免疫組化法檢測HPV L1蛋白在不同宮頸病變過程的表達情況，旨在探討HPV L1蛋白對各級CZN和宮頸癌的檢出價值及與宮頸癌發(fā)展的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年1月～2013年1月新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院 （以下簡稱 “我院”）婦科就診的高危型HPV陽性的宮頸病變患者171例作為研究對象，患者年齡 22～65 歲，平均（37.9±4.3）歲，維吾爾族 72 例，哈薩克族8例，漢族78例，回族13例。其中慢性宮頸炎 23例，CIN1 21例（CINⅠ48例、CINⅡ34例、CINⅢ39例），宮頸癌患者27例。所有患者均經(jīng)病理學(xué)診斷，且均無宮頸錐切、子宮切除、放化療史。

1.2 實驗方法

運用免疫組織化學(xué)的方法在石蠟包埋組織切片上檢測HPV病毒DNA中的Ll殼蛋白；HPV L1殼蛋白檢測試劑盒采用美國愛迪旺斯醫(yī)療科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)的賽泰-細(xì)胞/組織人乳頭瘤病毒檢測試劑盒[5]，嚴(yán)格按照其說明書進行操作；HPV Ll殼蛋白表達陽性以顯微鏡下閱片有1個被紅染的細(xì)胞核即可診斷[6]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 人乳頭狀瘤病毒Ll殼蛋白在不同宮頸病變組織中的表達情況

171例患者中，HPV L1陽性表達63例，陽性表達率為36.8%；HPV L1蛋白陽性表達率在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和 SCC五組患者間整體比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜ 0.05）；炎癥組與 CINⅠ組、CINⅢ組、SCC組比較差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；CINⅠ組與 CINⅡ組、ClNⅢ組、SCC 組比較差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其余各組間兩兩比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均 P ＞ 0.05），見表 1；相關(guān)性分析顯示，HPV L1陽性表達與病理組織分期呈負(fù)相關(guān)（r=-0.447，P ＜ 0.05），即隨著病變程度加重，HPV L1殼蛋白陽性表達率呈下降趨勢。

表1 HPV Ll殼蛋白在不同宮頸病變組織中的表達情況[n（%）]

2.2 人乳頭狀瘤病毒L1殼蛋白在不同宮頸病變中的預(yù)測能力的ROC曲線分析

以病理檢查結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，繪制ROC曲線，可得曲線下面積為 0.799， 標(biāo)準(zhǔn)誤為 0.062，95%CI為0.677～0.921，靈敏度為 0.769，特異度為 0.750，診斷價值中等。見圖1。

圖1 HPV L1殼蛋白在不同宮頸病變中的預(yù)測能力的ROC曲線

3 討論

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤，宮頸癌發(fā)生、發(fā)展一般經(jīng)過鱗狀上皮增生-不典型增生-原位癌-浸潤癌的緩慢過程[7]，HPV是宮頸癌發(fā)生的主要危險因素，因此加強女性高危型HPV的篩查，有利于早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌并及時采取積極有效的治療措施，進而降低宮頸癌的病死率。L1殼蛋白具有較強的免疫原性，可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生HPV的中和抗體[8]。HPV感染可以分為病毒的復(fù)制和病毒轉(zhuǎn)化兩個階段，HPV首先侵入上皮基底細(xì)胞，裸露的病毒DNA在宿主細(xì)胞核內(nèi)呈游離狀態(tài)。基底細(xì)胞分化時病毒DNA開始復(fù)制，利用該細(xì)胞的胞質(zhì)合成病毒的L1殼蛋白。病毒的復(fù)制期和L1殼蛋白的表達是HPV感染的早期階段，主要在細(xì)胞核表達，此階段可檢測出HPV L1蛋白的表達。

HPV L1殼蛋白檢測最初是用來檢測HPV感染，篩查宮頸癌。有研究通過對20例低度鱗狀上皮內(nèi)病變 （LSIL）、40例高度鱗狀上皮內(nèi)病變 （HSIL）、3例SCC高危型HPV L1蛋白檢測，其陽性表達率分別為30%、12%和0，結(jié)果顯示隨著宮頸病變程度的增高，HPV L1蛋白陽性表達率下降[9]。Negri等[6]通過對66例標(biāo)本中HPV L1表達檢測，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測HPV Ll蛋白和 p16 因子能預(yù)測 CIN 的進展，L1（-）／p16（+）提示子宮鱗狀上皮內(nèi)瘤變具有較高的向惡性進展的危險性。Rauber等[10]通過分析279例高危型HPV感染患者HPV L1衣殼蛋白表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HPV L1蛋白陽性在預(yù)測宮頸鱗狀細(xì)胞病變的進展中有著重大的意義，尤其是年齡低于30歲的女性。宋曉霞[11]通過對559例HPV陽性患者運用免疫組化的方法檢測HPV L1殼蛋白，結(jié)果顯示L1殼蛋白陽性表達率隨著宮頸組織病理學(xué)級別的升高，HPV L1殼蛋白陽性表達率呈現(xiàn)下降趨勢（χ2=147.527，P<0.001） 。 Griesser等[12]通過采用免疫組化方法對84例高危型HPV標(biāo)本中的HPV L1衣殼蛋白進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HPV L1衣殼蛋白有預(yù)測早期非典型病變預(yù)后的意義。本研究結(jié)果顯示，在171例患者中，HPV L1陽性表達63例，陽性表達率為36.8%；其中在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC組患者的HPV L1蛋白陽性表達率分別為 73.9%、66.7%、35.3%、5.1%和 0.0%；HPV L1蛋白陽性表達率在五組患者間整體比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P<0.05）；隨著病變程度加重，HPV Ll殼蛋白陽性表達率呈下降趨勢，這與郭曉東等[13]的研究結(jié)果一致。

HPV L1殼蛋白檢測作為新近發(fā)現(xiàn)的一種可以預(yù)測宮頸HPV感染預(yù)后的生物分子標(biāo)志物，可以作為子宮頸病變診斷及進一步評估進展風(fēng)險的有效指標(biāo)，值得臨床推廣應(yīng)用。

[1]趙金娟.高危型HPV檢測聯(lián)合肉眼醋酸試驗在宮頸癌前病變篩查中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，9（1）：88-89.

[2]楊娟.高危型HPV負(fù)載量與宮頸癌前病變發(fā)展的相關(guān)性[J].實用癌癥雜志，2012，27（6）：117-119.

[3]張宏珍.宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為意義不明確的非典型鱗狀細(xì)胞患者的分流處理探討[J].重慶醫(yī)學(xué)，2012，41（6）：14-16.

[4]Griesser H，Sander H，Hilfrich R，et al.Correlation of immunochemical detection of HPV L1 capsid protein in pap smears with regression of high-risk HPV positive mild/moderate dysplasia [J].Anal Quant Cytol Histol，2009，26 （5）：241-245.

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[10]Rauber D，Mehlhorn G，F(xiàn)asching PA，et al.Prognostic significance of the detection of human papilloma virus L1 protein in smears of mild to moderate cervical intraepithelial lesions[J].Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2008，140（2）：258-262.

[11]宋曉霞.HPV L1殼蛋白與hTERC基因檢測在子宮頸病變診斷中的應(yīng)用[D].鄭州：鄭州大學(xué)，2012.

[12]Griesser H，Sander H，Hilfrich R，et al.Correlation of immunochemical detection of HPV L1 capsid protein in pap smears with regression of high risk HPV positive mild/moderate dysplasia [J].Anal Quant Cytol Histol，2009，26（9）：241-245.

[13]郭曉東，牛柯，趙景民，等.HPV主要衣殼蛋白在宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查異常涂片中的表達及臨床意義[J].河北醫(yī)學(xué)，2011，17（11）：1421-1423.