左氧氟沙星聚乙烯醇微粒的制備及其特性研究

黃偉鋒，曾 斌，郭 彬

(廣州中醫藥大學附屬深圳市中醫院藥學部，廣東 深圳 518033)

左氧氟沙星是第3代氟喹諾酮類藥物，臨床應用極為廣泛，近年發現其不良反應越來越多[1－2]。由于其口服吸收快且完全，生物利用度幾乎接近100%，單劑口服100 mg，1 h后血藥濃度峰值達1.35 mg/L，血漿半衰期(t1/2)為4～6 h，24 h內 80% ～85%以原形經腎排出[3]。專家圓桌會議推薦優化抗菌藥物給藥方案，左氧氟沙星應當每天1次給藥治療為好[4]。為此，筆者參考文獻[5－6]采用噴霧干燥法，制備左氧氟沙星聚乙烯醇微粒(Levofloxacin polyvinyl Alcohol micro－particles，LFX －PVA －MP)，并考察其載藥微粒粒徑、形態、載藥量、包封率及體外溶出度，以評價其制劑特性，現報道如下。

1 儀器與試藥

OPDT－8型噴霧干燥機(上海干燥設備有限公司);Waters 510型高效液相色譜儀(SEPU 3000工作站，WatersTM486 Tunable Absorbance Detector);Mettler AE 240型電子天平和PHS－3TC數顯PH儀(上海天達儀器有限公司);KQ－100DB型數控超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司);CIS100粒形分析儀(荷蘭Ankersmid儀器有限公司);S－2150型掃描電鏡(日本Hitachi公司);RCZ－6B1型藥物溶出度試驗儀(上海黃海藥檢儀器有限公司)。鹽酸左氧氟沙星(浙江新昌制藥廠，批號為20110908，含量98%以上);鹽酸左氧氟沙星對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為 130455－2011049，含量 99%);聚乙烯醇(PVA，Mr 13 000～23 000，醇解度 87% ～89%;Mr 31 000～50 000，醇解度87% ～89%;Mr 85 000～124 000，醇解度87% ～89%)購自美國Aldrich公司，己烷磺酸鈉(山東禹王實業有限公司化工分公司)，磷酸二氫鉀(廣州光華化工廠)，磷酸(廣州化學試劑廠)，以上均為分析純試藥;甲醇、乙醇(廣東汕頭精細化工有限公司)為色譜純;水為超純水;0.45 μm微孔濾膜;左氧氟沙星片(市場購買)。

2 方法與結果

2.1 微粒制備

處方:左氧氟沙星 50.0 g，聚乙烯醇(PVA)100.0 g，加入88%乙醇液1 000 mL水浴加熱使全溶，20%乙醇液加至2 000 mL，即為含 PVA 為 0.05%(W/V)、含 LFX 為 0.025%(W/V)的含藥料液。

制備工藝:將含藥PVA料液攪拌均勻，通過OPDT－8噴霧干燥機，采用進風溫度185℃、出風溫度90℃，旋風分離器壓力為0.70 kPa，以噴霧干燥法制備LFX－PVA－MP。試驗采用PVA分子量 13 000～23 000(A 組)，31 000～50 000(B 組)，85 000～124 000(C組)分別制作3批。制成的LFX－PVA－MP微粒均為微黃松散微粒，置水中先漂浮水面，逐漸吸水沉降溶解，加熱可加快其溶解速度。

2.2 含量分析方法[7]

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:大連依利特 Kromasil ODS2柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:己烷磺酸鈉溶液[取己烷磺酸鈉0.98 g，加磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀6.8 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，加0.05 mol/L 磷酸約 500 mL，調節 pH 至 2.4)1 000 mL，使溶解、搖勻]－甲醇(2∶2);檢測波長:293 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:40℃。取左氧氟沙星對照品水溶液(1～1 000)10 mL置試管中，用日光燈(3 500 lx)照射3 h，取該液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果相對于主峰保留時間約為1.2倍處可檢測到雜質峰;另取左氧氟沙星對照品溶液連續進樣4次，RSD約為0.9%;理論板數按左氧氟沙星峰計算高于1 600。

2.2.2 溶液制備

取左氧氟沙星對照品(干燥品)約10mg，精密稱定，置20 mL容量瓶中，加80%乙醇溶液約15 mL，使溶解再加0.03 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度、搖勻、濾過，精密量取續濾液10 mL置25 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度、搖勻、濾過，作為對照品溶液。另稱取相當于左氧氟沙星50 mg的樣品，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加80%乙醇溶液約35 mL，超聲使溶解，再加0.03 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度、搖勻、過濾、精密量取續濾液10 mL置50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度、搖勻、濾過，作為供試品溶液。

2.2.3 含量測定

分別取上述對照品溶液及供試品溶液各20 μL進樣，記錄峰面積，以外標法計算含量。

2.3 微粒體外溶出度考察

對所制備的3種 LFX－PVA－MP微粒(A，B，C)，各稱取約相當LFX 100 mg的微粒裝于膠囊中，放入沉降吊籃中，照2010年版《中國藥典(二部)》[8]溶出度測定方法測定，分別于 0，10，15，20，30，40，60，80 min 時各取 5 mL，并向溶出杯內補加溶出介質 5 mL，使之平衡。采用擬訂色譜條件測定，并計算累積溶出百分率(n=3)，結果見圖1。A，B，C 3條曲線走勢基本相同;并與市售左氧氟沙星片劑同劑量進行對照試驗，可見比市售片劑的體外溶出度明顯滯后，緩釋趨勢明顯。圖1表明，LFX－PVA－MP在20 min時溶出40%左右，50 min溶出達88%，70 min時達98%以上，其釋藥規律符合Weibull方程:對照品左氧氟沙星片，在5 min時已溶出50%，10 min已溶出80%，到15 min已溶出大于98%，可見LFXPVA－MP緩釋趨勢明顯。

圖1 LFX－PVA－MP與LFX片體外溶出曲線(n=3)

2.4 微粒特性檢測[6]

粒徑:取LFX－PVA－MP適量，加入約5 mL輕質液體石蠟油，超聲波分散10 min，采用粒度粒形分析儀(日本產S－2150型掃描電鏡)測定微粒平均粒徑(D10，D50，D90)，跨度=(D90－D10)/D50。結果見表1。

微粒形態:取LFX－PVA－MP適量，分散于導電膠表面，噴金后，采用掃描電鏡觀測其形態。根據顆粒的圓整度，表面凹陷程度，粘連程度對各自微粒評分。評分標準，球形+++(3)，近球形++(2)，不規則形(O)，無凹陷 +++(4)，略有凹陷 +++(3)，凹陷較多++(2)，不規則形(O);顆粒無粘連+++(3)，顆粒輕微粘連++(2)，顆粒粘連較多(I)，顆粒呈條絲紋狀(O)。

微粒載藥量與包封率測定:取LFX－PVA－MP微粒適量，精密稱定，置燒杯中，加入溶劑(流動相)約50 mL，在60℃水浴鍋隔水加熱5 min，完全溶解后放冷，轉移至100 mL容量瓶中，用流動相溶劑稀釋至刻度，搖勻。0.45 μm濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液;同時配制LFX對照液，按上述色譜條件，分別取供試品溶液及對照品溶液各20 μL進樣，記錄峰面積，外標法計算含量。按微粒中LFX的百分含量(%，W/W)計算載藥量。根據實際藥物含量與理論藥物含量比值的百分率計算其包封率(%)。結果見表1。可見，3種PVA所制微粒，LFX－PVA－MP均為近橢圓球形，表面有孔，略有凹陷不平;高濃度時易粘連，稀液則易吸水逐步溶解。其中微粒B所選用聚乙烯醇Mr 31 000～50 000，其平均粒徑適中，載藥量和包封率最理想。

表1 3種PVA微粒各項指標測定結果

3 討論

微球(微球囊或微囊)是近年發展較快的新劑型[9]，微球給藥系統的制備方法主要有溶劑揮發法[10]、乳化交聯法[11]及噴霧干燥法[12]，其質量控制包括形態、粒徑分布、載藥量及包封率、微球釋放速率及穩定性等[9]。

LFX－PVA－MP微粒采用噴霧干燥法制備時，其PVA的Mr大小對微粒大小和形態的影響較大，同樣配比的含藥料液，Mr越大，其含藥料液的黏度越大，操作過程不易噴霧，且易產生絲狀條狀物;PVA濃度越大，噴霧形成的微粒越大，PVA濃度不大于0.05(W/V)才易于操作。若 PVA 料液濃度大于 0.06(W/V)，噴霧困難，且所得微粒易產生粘連，表面凹陷變形嚴重[6]。試驗顯示，隨著PVA的Mr不同所制成的微粒載藥量，包封率略有差異;當Mr為85 000～124 000的噴霧微粒，其體外緩釋最明顯，但從制備工藝難度與微粒各方面指標考察結果看，還是選擇Mr為31 000～50 000的 PVA為好，采用 PVA濃度為0.05(W/V)、藥料比為1∶2(即500g LFX和1 000 g PVA)按方配制還是可以按照噴霧干燥法制備較理想的LFX－PVA－MP微粒。

本研究LFX－PVA－MP中的LFX含量測定采用許曉文等[7]報道的新方法，操作時將甲醇在流動相中增量，可使保留時間大大縮短，其對雜質的分離能力與中國藥典方法相當。本研究測定數據的 RSD≤0.9%，但當微粒樣品置超聲波浴中溶解時，其溶液應改為80%的乙醇液，才能快速完全溶出。

[1]黃道秋，熊德巧.左氧氟沙星致不良反應1998～2008年國內文獻分析[J].中國藥房，2010，21(6):536 －538.

[2]Bernhardt S，Stefan R，Rainer B，et al.Fluoroquinolone－ Associated anaphylaxis in spontaneous adverse drug reaction reports in germany[J].Drug safety，2006，29(11):1 087 － 1 100.

[3]伍 彬.左氧氟沙星臨床應用研究進展[J].中國藥業，2010，19(3):61－62.

[4]段 寧，張石革.細菌耐藥的現狀與臨床應對策略——呼吸系統合理用藥專家圓桌會議紀要[J].中國醫院用藥評價與分析，2009，9(8):561－562.

[5]Ozmen L，Langrish TAG，Gipps EM.Spray drying pharmaceutical Products for nasal delivery:The effect of feed solution properties and operating conditions on particle size and density－Heat and Mass Transfer Australasia proceedings of sixth AustraLasian:Heat and Mass Transfer conference[M].New York:Begell House，1998:427.

[6]吳俊珠，金 拓.賴諾普利聚乙烯醇微粒的制備及其質量評價[J].中國藥房，2010，21(9):825 －828.

[7]許曉文，袁 林.鹽酸左氧氟沙星含量測定方法研究[J].中國藥業，2010，19(6):28.

[8]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010附錄:IVA XD.

[9]蔣紅艷，楊元娟，楊宗發.微球給藥系統及其質量評價[J].中國藥業，2012，21(13):1 －2.

[10]石淑先，韓文卿，渠 艷，等.聚(D.L－乳酸)微球的制備與釋藥性能研究[J].北京化工大學學報:自然科學版，2010，37(6):60－63.

[11]程國華，趙 鑫，黃榮林.漢防區甲素殼聚糖微球的制備和質量研究[J].中國現代應用藥學，2008，25(1):47 －50.

[12]郭建鵬，薛 紅.噴霧干燥法制備月見草油微球的工藝研究[J].中國中藥雜志，2008，33(7):763 －765.