麩炒前后蒼術中3種成分的HPLC測定

劉玉強， 才 謙， 賈天柱

(遼寧中醫藥大學，遼寧大連116600)

中藥蒼術為菊科植物茅蒼術Atractylodes lancea(Thunb．)DC．或北蒼術Atractylodes chinensis(DC．)Koidz．的干燥根莖［1］。始載于《神農本草經》，具有燥濕健脾，祛風散寒，明目的功效［2］。蒼術中含有5%～9%的揮發油，由一系列的倍半萜、聚乙烯炔類及少量的酚類、有機酸類成分組成。非揮發性成分主要有氨基酸、多炔類化合物、倍半萜糖苷等水溶性成分以及少量糠醛［3-5］。因蒼術炮制后燥性降低，且健脾作用增強，故目前臨床應用的蒼術多為麩炒蒼術［6-7］。有文獻報道，蒼術麩炒后包括揮發油在內的化學成分會發生變化［8-10］，本實驗為考察蒼術麩炒后倍半萜類成分蒼術烯內酯丙和聚乙烯炔類成分蒼術素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的變化，收集了全國17個地區的蒼術藥材或生蒼術片，并自行炮制得麩炒蒼術片，采用高效液相色譜法測定這些地區生熟蒼術片中以上成分，初步闡明麩炒對蒼術中倍半萜類成分和聚乙烯炔類成分的影響。

1 儀器、試劑與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100 Series高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);Tigerkin C18(5μm，4.6×250 mm)色譜柱 (大連思普精工有限公司)。KH-300P型超聲波清洗器 (昆山禾創超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑 乙腈 (色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司);純凈水 (杭州娃哈哈集團有限公司)。

1.3 試藥與藥材 對照品蒼術烯內酯丙、蒼術素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯，均為自制，經液相色譜用歸一化法測定，純度均大于98%。蒼術藥材從不同地區購買，經遼寧中醫藥大學植物教研室王冰教授鑒定為菊科植物茅蒼術Atractylodes lancea(Thunb．)DC．或北蒼術 Atractylodes chinensis(DC．)Koidz．的根莖。麩炒品按照《中國藥典》2010年版麩炒方法自行炮制。

2 方法與結果

2.1 蒼術烯內酯丙的測定

2.1.1 色譜條件 Tigerkin C18色譜柱 (5μm，4.6 mm×250 mm);流動相為乙腈－水(54∶46);柱溫25℃;體積流量1.0 mL/min;檢測波長220 nm;進樣量10μL。

2.1.2 對照品溶液制備 精密稱取蒼術烯內酯丙對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液制備 取本品粉末 (過60目篩)約0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液5 mL，稱定質量，放置一夜。次日超聲處理(功率250W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，定容至10 mL棕色量瓶中，過0.45μm微孔濾膜即得。色譜圖見圖1和圖2。

圖1 蒼術烯內酯丙對照品HPLC圖譜Fig.1 HPLC chromatogram of atractylenolideⅢ

圖2 供試品HPLC圖Fig.2 HPLC chromatogram of sam p le

2.1.4 線性關系考察 精密吸取蒼術烯內酯丙對照品溶液 (質量濃度為 0.008 8 mg/mL)2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μL注入高效液相色譜儀中，測定色譜峰面積，以進樣量 (μg)為橫坐標 (X)，峰面積為縱坐標 (Y)，進行線性回歸，得回歸方程為:Y=1 737.7X－0.451 2，r=0.999 7，提示蒼術烯內酯丙進樣量在0.017 6μg～0.176μg范圍內具有良好的線性關系。

2.1.5 精密度試驗 取同一供試品溶液 (產地:湖北英山)，連續進樣6次，每次10μL，測得蒼術烯內酯丙峰面積的RSD為2.7%，表明該方法精密度良好。

2.1.6 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、24、48 h進樣10μL，測得蒼術烯內酯丙色譜峰面積的RSD為2.2%，表明該方法的精密度良好。

2.1.7 重復性試驗 取本品0.5 g(產地:湖北英山)，精密稱定，共6份。按前述方法測定蒼術烯內酯丙，結果蒼術烯內酯丙的平均含有量為0.020%，RSD為2.0%，重復性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗 精密稱取本品 (產地湖北英山，蒼術烯內酯丙含有量為0.020%)0.25 g，共6份，加入質量濃度為0.11 mg/mL的蒼術烯內酯丙對照品溶液0.5 mL，按前述方法制備和測定。測定結果提示:本方法回收率在96.8% ～104.7%之間，RSD為2.9%，符合有關規定。

2.1.9 樣品測定結果 分別測定了17個地區生蒼術片及自制的麩炒蒼術片中蒼術烯內酯丙，結果見表1。

表1 生蒼術和麩炒蒼術中蒼術烯內酯丙、蒼術素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的測定結果Tab.1 Contents of atractylenolideⅢ，atractylodin and(4E，6E，12E)-tetradecatriene-8，10-diyne-1，3-diyl diacetate in crude slices and processed ones of Atractylodis Rhizoma

2.2 蒼術素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的測定

2.2.1 色譜條件 Tigerkin C18色譜柱 (5μm，4.6×250 mm);流動相為乙腈－水 (72∶28);柱溫25℃;體積流量1 mL/min;檢測波長340 nm;進樣量10μL。

2.2.2 對照品溶液制備 分別精密稱取蒼術素及(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯對照品適量，置棕色瓶中，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg、0.1 mg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液制備 同2.1.3。色譜圖見圖3，圖4和圖5。

圖3 蒼術素對照品HPLC圖Fig.3 HPLC chromatogram of atractylodin

圖4 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯對照品HPLC圖Fig.4 HPLC chromatogram of(4E，6E，12E)-tetradecatriene-8，10-diyne-1，3-diyl diacetate

圖5 供試品HPLC圖Fig.5 HPLC chromatogram of sam ple

2.2.4 線性范圍考察 精密吸取蒼術素對照品溶液 (質量濃度為0.204 4 mg/mL)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0μL注入高效液相色譜儀中，測定色譜峰面積，以進樣量 (μg)為橫坐標 (X)，峰面積為縱坐標 (Y)，進行線性回歸，得回歸方程為:Y=6 393.2X－48.889，r=0.999 8，提示蒼術素進樣量在0.244μg～2.684μg范圍內具有良好的線性關系。

精密吸取 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯對照品溶液 (質量濃度為0.128 mg/mL)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0 μL注入高效液相色譜儀中，測定色譜峰面積，以進樣量 (μg)為橫坐標 (X)，峰面積為縱坐標(Y)，進行線性回歸，得回歸方程為:Y=3 270.3X－49.167，r=0.999 6。提示 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯進樣量在0.128μg～1.408μg范圍內具有良好的線性關系。

2.2.5 精密度試驗 取同一供試品溶液 (產地:湖北英山)，連續進樣6次，每次10μL，測得蒼術素峰面積的RSD為1.8%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰面積的RSD為2.1%，表明該方法精密度良好。

2.2.6 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、24、48 h進樣10μL，測得蒼術素峰面積的RSD為1.4%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰面積的RSD為1.2%，表明該方法的精密度良好。

2.2.7 重復性試驗 取本品0.5 g(產地:湖北英山)，精密稱定，共6份。按前述方法測定，結果蒼術素的平均含有量為0.237 8%，RSD為2.6%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯平均含有量為0.310 4%、RSD為2.6%，表明該方法重復性良好。

2.2.8 回收率試驗 取本品 ［產地湖北英山，蒼術素含有量為0.237 8%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的含有量為0.310 4%］6份，每份0.25 g，精密稱定。置錐形瓶中，分別加入對照品蒼術素溶液0.5 mL(質量濃度為1.19 mg/mL)，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯溶液 0.5 mL(質量濃度為1.55 mg/mL)，按前述方法制備和測定，測定結果提示蒼術素的回收率在95.9%～104.0%之間，RSD為2.8%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的回收率在97.6% ～103.8%之間，RSD為2.2%，符合有關規定。

2.2.9 樣品測定結果 分別測定了17個地區生蒼術片及自制的麩炒蒼術片中蒼術素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的含量，結果見表1。可以看出，蒼術麩炒后蒼術烯內酯丙、蒼術素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的量以下降為主。

3 討論

3.1 通過測定17個不同地區收集的生蒼術片和自行炮制的麩炒蒼術片中倍半萜類成分和聚乙烯炔類成分可以看出，除個別樣品外，蒼術麩炒后這兩類成分的量有所下降，這可能與這些成分主要存在于蒼術揮發油中，而在麩炒的過程中蒼術揮發油的量減少，導致這些成分的量下降。

3.2 由于蒼術素和 (4E、6E、12E)-十四癸三烯-8、10-二炔-1、3-二乙酸酯對光不穩定，試驗時采取避光操作。

［1］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］．北京:中國醫藥科技出版社，2010:150-151.

［2］江蘇新醫學院．中藥大辭典:上冊［M］．上海:上海科學技術出版社，1986:1066.

［3］關穎麗．蒼術化學成分的現代研究進展［J］．人參研究，2007，(1):28-33．

［4］歐陽臻，江濤濤，繆亞東，等．蒼術的化學成分、道地性和藥理活性研究進展［J］．時珍國醫國藥，2006，10(17):1936-1938．

［5］李 霞，王金輝，李 銑，等．北蒼術化學成分的研究［J］．沈陽藥科大學學報，2002，9(3):178．

［6］樸盛樹，樸鐘旭，原思通．中藥蒼術炮制歷史沿革研究［J］．中國藥學雜志，2000，35:87．

［7］劉艷菊，許臘英，李水清．麩炒蒼術炮制工藝研究［J］．中國醫院藥學雜志，2009，29(15):1267-1268．

［8］李水清，許 康，劉艷菊，等．蒼術及麩炒蒼術高效液相圖譜對比分析［J］．湖北中醫藥大學學報，2011，13(4):28-30.

［9］許臘英，陳紹文，毛 翼，等．蒼術炮制品及其輔料麥麩的薄層鑒別研究［J］．湖北中醫學院學報，2006，8(3):17-18.

［10］王愛武，田景奎，耿 暉，等．蒼術炒制前后揮發油成分的研究［J］．華西藥學雜志，2004，19(6):417-418.