胞磷膽堿注射液對(duì)大鼠腦缺血組織氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)的影響

胡春榮,馬利峰,李鳳君,金藝華

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003)

腦卒中是神經(jīng)科醫(yī)生臨床工作中的常見(jiàn)病種,診斷簡(jiǎn)單,治療方法明確 ,但治療效果均不理想,臨床治愈率低,致殘率高。目前,腦卒中治療方法多,藥物治療、手術(shù)和介入治療,但臨床效果參差不齊,無(wú)論是缺血性還是出血性腦卒中,都會(huì)導(dǎo)致腦功能障礙,腦組織缺血及缺氧,腦水腫及臨床一系列并發(fā)癥狀的發(fā)生,一些基礎(chǔ)研究可能會(huì)對(duì)臨床醫(yī)生的治療提供幫助。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型的建立

大鼠喂養(yǎng) 3d后 ,參考牛國(guó)忠及 Deinsberger W[1]等的方法改進(jìn)的立體定向自體血腦內(nèi)注入法,Wistar大鼠均經(jīng)10%水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉,俯臥固定于立體定位儀上,頭頂部剃毛消毒后正中矢狀切開(kāi),切口約 1.5cm,鈍性分離出前囟,在前囟后1mm,左旁3mm處用牙科鉆鉆一直徑約 1mm小孔。距鼠尾末端約 2cm處剪斷,取尾血50 μL,將微量注射器推進(jìn)至已鉆孔內(nèi) ,進(jìn)針5mm(相當(dāng)于尾狀核部)先注入10L,停針2min后緩慢注入剩余 40μL,2min后退針1.5mm停留7min后緩慢將針完全退出。縫合皮膚,回籠飼養(yǎng)。腦出血加 FDPM干預(yù)組與上述操作相同 ,但在注血后10min尾靜脈注射 FDPM400mg/kg。腦出血前組只進(jìn)針不注血。大鼠清醒后無(wú)偏癱體征,或血腫沿針道反流,或進(jìn)入腦室者棄用。本實(shí)驗(yàn)選擇腦出血后周圍缺血組織作為檢測(cè)部位。

1.2 動(dòng)物分組及給藥

造模成功的大鼠隨機(jī)分為 3組。假手術(shù)組 4只,腦缺血模型組48只,對(duì)照組為腦缺血+胞磷膽堿注射液治療組48只。對(duì)照組給予尾靜脈注射依胞磷膽堿注射液10mg/kg,模型組大鼠給予尾靜脈注射等量生理鹽水。對(duì)照組及模型組動(dòng)物即時(shí)給藥一次,超過(guò)24h后給藥 2次。兩組分別實(shí)驗(yàn)前后 (4h、6h、 12h、24h、72h、7d)每時(shí)間點(diǎn)各 8只。

1.3 檢測(cè)方法

谷氨酸和γ-氨基丁酸測(cè)定參照試劑盒說(shuō)明。應(yīng)用 HITACHI83550型氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定 Clu、GABA含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 腦出血后4h起,Glu含量增高 ,6h、12h、24h、72h明顯高于出血前組,持續(xù)至7d仍高于腦出血前水平。胞磷膽堿注射液治療組 Glu水平4h、6h、12h、24h、72h明顯高于出血前,至7d與腦出血前比較差異無(wú)顯著性意義。治療組4h、6h、12h、24h、72h谷氨酸水平明顯低于相同時(shí)間點(diǎn)腦出血組(P ＜ 0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同時(shí)間點(diǎn) Glu含量的變化(umol/g;±s;n=8)

表1 不同時(shí)間點(diǎn) Glu含量的變化(umol/g;±s;n=8)

與腦缺血前相比;▲差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)。治療組與缺血組相比;*差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P ＜0.05)。

組別 腦缺血組 治療組腦缺血前 3.04±0.16 3.20±1.23腦缺血 4h 5.82±0.95 5.32±1.98腦缺血 6h 16.23±2.98▲ 14.20±2.16腦缺血 12h 26.54±7.36▲ 21.32±5.32*腦缺血 24h 42.13±8.95▲ 30.26±6.93*腦缺血 72h 13.26±5.36▲ 9.76±2.59*腦缺血 7d 6.21±3.21▲ 5.12±1.63*

2.2 腦出血后4h,γ-氨基丁酸含量明顯降低,6h、12h、24h、72h、7d γ- 氨基丁酸含量明顯低于出血前。6h、12h、24h、72h、7d胞磷膽堿治療組 γ-氨基丁酸水平低于腦出血前。治療組 6h、 12h、24h、 72h、 7d GABA水平明顯高于相同時(shí)間點(diǎn)腦出血組。見(jiàn)表2。

表2 腦缺血后不同時(shí)間點(diǎn)γ-氨基丁酸含量的變化(umol/g;±s;n=8)

表2 腦缺血后不同時(shí)間點(diǎn)γ-氨基丁酸含量的變化(umol/g;±s;n=8)

與腦缺血前相比;▲差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)。治療組與缺血組相比;*差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。

組別 腦出血組 治療組腦缺血前 3.86±0.69 3.16±0.57腦缺血 4h 3.01±0.56 2.89±0.64腦缺血 6h 2.36±0.32▲ 2.16±0.24腦缺血 12h 1.68±0.31▲ 1.58±0.27腦缺血 24h 1.52±0.25▲ 1.48±0.16*腦缺血 72h 2.16±0.27▲ 1.81±0.32*腦缺血 7d 2.53±0.28▲ 2.21±0.35*

3 討論

通過(guò)臨床觀察發(fā)現(xiàn),腦缺血后72h患者仍可以出現(xiàn)病情反復(fù)變化,病情逐漸惡化進(jìn)展,甚至昏迷死亡,提示腦血管病變后逐漸演變的一個(gè)病理過(guò)程,缺血周邊組織的繼發(fā)性損害,在本實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)給予得到間接證實(shí)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證實(shí)腦出血周邊可有缺血半暗帶存在。局部腦血流(rCBF)是描述腦組織缺血的重要指標(biāo)。Kakim[2]等認(rèn)為 rCBF低于20mL/(100g·min),腦組織就處于缺血半暗帶期 ,即出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞之間信號(hào)傳遞停止,細(xì)胞有氧代謝降低,泵功能抑制,神經(jīng)細(xì)胞去極化,無(wú)氧酵解產(chǎn)物如乳酸增多。郭富強(qiáng)等[3]對(duì)108例急性腦出血患者也進(jìn)行了動(dòng)態(tài) CT、SPECT研究,發(fā)現(xiàn)入院時(shí)腦 CT顯示的血腫體積明顯小于 SPECT顯示的原發(fā)灶缺血體積,證明血腫周邊確實(shí)存在類似缺血半暗帶的 rCBF下降。

在正常人中,興奮性和抑制性神經(jīng)遞質(zhì)間保持著動(dòng)態(tài)平衡,體內(nèi)任何一種神經(jīng)遞質(zhì)的含量變化都會(huì)改變?nèi)梭w的正常生理功能。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果:實(shí)驗(yàn)后出血4h起,Glu增高,隨時(shí)間增長(zhǎng),含量也逐漸增加,并且進(jìn)一步通過(guò)胞磷膽堿注射液(CDPC)干預(yù)腦出血周邊缺血組織發(fā)現(xiàn) Glu含量顯著下降。并且胞磷膽堿可以抑制谷氨酸的表達(dá)數(shù)量,抑制周邊組織神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。研究證實(shí),GABA能夠拮抗 Glu所致的細(xì)胞去極化,GABA的去極化拮抗作用能夠明顯抑制興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的毒性作用,保護(hù)顱腦的功能[4]。

胞磷膽堿注射液價(jià)格便宜,是臨床的常用藥物,對(duì)于外傷的腦保護(hù)臨床應(yīng)用較多。臨床發(fā)現(xiàn)對(duì)腦中風(fēng)所致的偏癱可逐漸恢復(fù)四肢的功能,亦可用于其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)急性損傷引起的功能和意識(shí)障礙,具有保護(hù)作用[5]。本研究還發(fā)現(xiàn) ,胞磷膽堿注射液可以平衡腦內(nèi) Glu GABA,促進(jìn)腦功能的恢復(fù),使腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)處于動(dòng)態(tài)平衡之中。

[1]Deinsberger W,ogel J,uschinsky W,et al.Experimental intracerebral hematoma reduces the volume of ischemic brain in rats[J].Neurol Res,1999,21(5):517-523

[2]Kakim AM.Chronic cerebral hypoperfusion disrupts discriminativ e behaviorin acquired learning rats[J].J Neurosci Methods,2008,84(1-2):63-68

[3]郭富強(qiáng),楊友松,宋文忠,等.尼莫地平對(duì)腦出血患者局部腦血流、腦水腫及不同時(shí)用藥臨床變化的影響 [J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志,2001,1(1):6-9

[4]Fujimura M,M otita- Fujimura Y,Narasimhan P,et al.Copper-zinc super-oxide dismutase prevents the early decrease of apurinic/apyridinic endonuclease and subsequent DNA fragmentation after transient focal cerebral is chemia in mice[J].Stroke,2009,30(11):2408-2415

[5]Qi X,Okuma Y,Hosoi T,et al.Edaravone protects against htpoxia/ischemia induced endplasmic reticulum dysfunction[J].J Pharmacol Exp Ther,2009,311(1):388-93