核酸檢測在篩查獻血者乙型肝炎中的應用

夏琳靜

核酸檢測(NAT)屬于新型血液病毒篩查檢測方法, 能夠直接檢測到血液中病原體的核酸［1］。核酸檢測在篩查獻血者乙型肝炎中具有重要作用, 本文選取無償獻血標本92432份進行分析, 現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2009年1月～2012年12月無償獻血標本92432份, 其中應用核酸檢測標本34440份。確保采集血液標本后每個獻血者均及時留取4管標本；在對酶免4項、ALT予以檢測時可選用分離膠促凝真空采血管；核酸測定時則選擇帶分離膠EDTA-K2抗凝真空采血管；對血型進行測定時選取EDTA-K2抗凝真空采血管, 將具體的采集日期、樣品編碼等基礎信息進行準確記錄。得到的標本需標準均在2 h內進行離心處理存至2～8℃冰箱內。2～3 h內送至檢測中心離心保存, 24 h內血清學篩查并實施NAT檢測。

1.2 方法 ELISA檢測：所得到的每份獻血標本在完成HBsAg檢測過程中均需予以2種ELISA試劑, 每批實驗需具有室內質控品組、空白對照組、陰性對照組和陽性對照組。對結果進行判斷的標準為:S/CO≥1屬于陽性(此狀態的血液檢測結果不符合標準), 0.5

核酸檢測：以混樣方法對核酸予以檢測。每級混樣池均有6個標本, 且均設定內對照。將混合所測定陰性定作陰性,將混合測定呈現陽性者予以拆分檢測, 當拆分檢測呈現陰性時屬于NAT陰性, 當拆分測定呈現陽性時則屬于NAT陽性。

在所有核酸篩查時, 當標本呈現陽性時, 核酸為陽性但經“二對半”測定屬陰性, 且核酸出現陰性獻血者予以追蹤隨訪, 持續2個月后重新采樣, 分別予以HBV-DNA和“兩對半”檢測。

2 結果

在本文所選取的92432份血液標本中, 進行血清學測定,標本屬于HBsAg陰性者有92082份, 標本屬于單試劑陽性者有30份, 標本屬于雙試劑陽性者有320份。

予以核酸測定標本共有34440份, 其中包括34430標本予以HBsAg酶免檢測呈現陰性, 10份標本予以單試劑測定呈現陽性。在34440份標本中, 核酸篩查呈現陽性者52份,通過核酸測定呈現陽性者38份, HBsAg測定呈現陽性者2份,如表1所示, 陽性檢出率與陽性確認率有15.1/萬(52/34440)、11.6/萬(40/34440)。在所認定的呈現陽性40份標本內, 只有10份標本經HBsAg測定呈現單陽, 予以核酸篩查呈現陽性,對HBVELISA漏檢率進行計算得到8.7/萬(30/34440)。另14份標本通過核酸篩查發現其均呈現陽性, 經HBsAg篩查及乙肝“兩對半”測定屬于陰性。

表1 獻血者HBV核酸檢測與ELISA檢測結果對比

核酸篩查呈現陽性的52份標本, 將其中符合條件的26份實施追蹤檢測, 其中12份通過核酸篩查顯示屬于陽性, 經乙肝“兩對半”測定則呈現陰性, 14份標本經核酸檢測呈現陰性。經追蹤檢測發現, 12份乙肝“兩對半”起始檢測呈現陰性標本, 經隨訪HBV-DNA(+)、HBsAg(+)8例,NAT對HBV酶免窗口期標本檢出率2.32/萬(8/34440), 隨訪HBsAg(－)4例, 為隱匿性HBV感染(OBI)；14份核酸測定屬于陰性, 隨訪過程中發現6例病毒載量低于20 IU/ml, 4例HBsAg一直呈現陰性, 屬于OBI。經計算發現8例OBI, NAT對OBI檢出率2.32/萬(8/34440)。

3 討論

輸血是否具有安全性主要風險在于被篩查病毒所處在的“窗口期”。有研究資料發現, 經NAT檢測, 能夠減少HBV、HCV、HIV的EIA“窗口期”, 減少率達到40%～75%, 使得病毒經輸血傳播風險幾率大范圍降低。在本文研究中, 追蹤隨訪ELISA法檢測呈現陰性但核酸陽性者, 有8例標本HBsAg ELISA測定陰性轉化成陽性, 由此可知此血樣于ELISA窗口期予以NAT檢測時被發現的, 而且NAT測定表明有4例屬于隱匿性HBV感染患者, 說明NAT檢測對血液篩查具有重要意義［2］。

NAT檢測在應用中, 所使用的試劑必須具有較高的靈敏性、特異性, 且實驗環境具有較高要求, 和EIA檢測相對比更具有嚴格性, 在檢查中應用所需設備、試劑往往會提高血液檢測成本。而且核酸篩查存在局限性, 在病毒載量較低情況下, 通常NAT難以檢測出, 在本文研究中, 6標本予以核酸篩查呈現陽性, 但是應用核酸測定則屬于陰性, 追蹤檢測過程中發現病毒載量低于20 IU/ml［3］。

總之, NAT可以縮減“窗口期”, 減少病毒通過輸血途徑傳播風險性, 但是也會有漏檢標本出現。NAT檢測時所關注的是病毒核酸, 而ELISA檢測則為抗原或抗體, 兩者所應用的檢測原理和檢測方法均有差異性, 所以兩個方法在檢測血液標本過程中并不存在重復性, 卻有一定的互補性, 屬于血液篩查檢測重要方法。

［1］何亞琴, 徐立, 楊愛龍.核酸檢測在篩查獻血者乙型肝炎病毒中的應用.中國輸血雜志, 2013, 26(3):147-148.

［2］王東, 于原, 臧亮, 等.單人份核酸檢測在血液乙型肝炎病毒篩查中的應用.國際檢驗醫學雜志, 2012, 33(7):780-781.

［3］季陽, 鄭忠偉, 蔡輝, 等.病毒血清學檢測與核酸檢測技術在輸血傳染病篩檢中的應用.中國輸血雜志, 2010, 23(6):413-414.