血管緊張素原基因M235T多態性和房顫傳統危險因素的交互作用

王 成 (新鄉市中心醫院心血管內一科，河南 新鄉 453100)

研究表明遺傳因素參與房顫的發生及發展〔1，2〕。腎素-血管緊張素系統(RAS)是體內重要的神經內分泌系統，其過度激活可以引起心房重構，最終導致房顫的發生。血管緊張素原(AGT)是RAS系統重要的組成部分，AGT基因M235T多態性是房顫發生的獨立危險因素〔3，4〕。近來國外有研究表明，M235T多態性與高血壓、高脂血癥共同導致了冠心病的發生〔5，6〕，但目前還沒有關于M235T多態性與房顫傳統危險因素是否協同導致房顫發生的相關研究。本研究針對中國漢族人群，探討M235T多態性是否與房顫傳統危險因素協同導致房顫的發生。

1 資料與方法

1.1 研究對象 慢性房顫組250例，男146例，女104例，年齡(54.53±6.58)歲，均為2010年5月至2012年5月在本院心內科住院的患者。納入標準:①靜息心電圖、24 h動態心電圖均提示永久性房顫，并且不伴有其他心律失常;②體表心電圖、胸片、超聲心動圖、生化功能、心肌酶譜及冠狀動脈造影等排除冠心病〔7〕、擴張型心肌病、肥厚型心肌病、致心律失常型右室心肌病及心臟瓣膜病等器質性心臟病〔8〕;③排除病態竇房結綜合征、長R-R間期、Ⅱ度或高度房室傳導阻滯等心律失常;④排除電解質紊亂和代謝性疾病，如風濕性關節炎、糖尿病等。對照組200例，男122例，女78例，年齡(52.04±5.64)歲，為同期在我院體檢的健康體檢者，經詢問病史、心電圖、血生化、心臟彩色多普勒超聲及心臟ECT等檢查排除房顫及其他心律失常，并且均符合上述排除標準。

1.2 AGT基因M235T多態性檢測 本實驗經過醫院倫理委員會批準。病例組和對照組均空腹12 h后采集靜脈血4 ml，抽血前均簽署知情同意書。采用PCR-RFLP法檢測M235T多態性。PCR引物序列如下，引物1:5'-CGTTTGTGCAGGGCCTGGCTCTC-3';引物 2:5'-AGGGTGCTGTCCACACTGGACCC-3'。擴增條件如下:首先于90℃預變性3 min，然后94℃ 1 min，68℃1 min，72℃ 1 min，共35個循環，最后于 72℃延伸10 min。在20 μl反應體系中分別加入 PCR 產物 7 μl和 ThtⅢ酶(10 U/μl，于65℃水浴消化4～6 h。PCR產物及酶切產物均使用瓊脂糖凝膠電泳檢測。AGT基因PCR產物為163 bp，該產物經ThtⅢ酶切后產生不同的特異性片段，形成3種基因型:MM基因型(野生型)，因不含酶切位點不被切開，顯示l條163 bp的擴增片段;MT基因型(雜合子)，同時具有140 bp和163 bp兩條條帶;TT基因型(突變型)為1條新的140 bp的酶切片段。

1.3 統計學分析 計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗;用基因計數法計算病例組和對照組的基因型頻率，是否符合哈迪-溫伯格(H-W)平衡定律采用χ2檢驗;AGT基因M235T多態性與房顫關系采用非條件Logistic回歸分析，關聯程度用優勢比(OR)及95%可信區間(CI)表示，采用SPSS13.0軟件進行統計學處理;AGT基因多態性與房顫傳統風險因子的關系采用叉生分析表法〔9〕分析。

2 結果

2.1 病例組及對照組臨床和生化特征比較 兩組年齡及性別分布無統計學差異(P＞0.05)。兩組BMI、高血壓、糖尿病及腦梗死病史比例、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇 (LDLC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 AGT基因多態性分析 對照組M235T基因型分布均符合H-W平衡定律(P＞0.05)。M235T病例組、對照組主要基因型均為TT，兩組差別無統計學意義(P＞0.05)，主要等位基因均為T，亦無明顯統計學意義(P＞0.05)。見表2。

2.3 Logistic回歸分析 以房顫為應變量，年齡、性別、BMI、TG、TC、HDL-C、LDL-C、TG、吸煙史、高血壓史、糖尿病史、腦梗死史為自變量。結果表明TG、高血壓、糖尿病及腦梗死史以及M235T多態性TT型為房顫發生的獨立危險因素。攜帶AGT基因M235T多態性的TT型患房顫的風險增加(OR=2.02，95%CI=1.14～2.56)。

2.4 AGT基因多態性與傳統風險因素的交互研究 將M235T多態性TT型攜帶者與傳統房顫風險因素(TG、TC、HDL-C、LDL-C、TG、高血壓、糖尿病及腦梗死等)納入叉生分析軟件，結果表明M235T多態性TT型與患腦梗死或高血壓協同增加了患房顫的風險。見表3。

表1 房顫組及對照組特征(s)

表1 房顫組及對照組特征(s)

指標 房顫組(n=250)對照組(n=200)P值54.53±6.58 52.04±5.64 0.34 BMI(kg/m2)23.08±4.53 19.87±3.56 0.56 TG(mmol/L)1.75±0.68 1.18±0.24 0.00 TC(mmol/L)4.95±1.22 3.98±1.58 0.00 HDL-C(mmol/L)1.16±0.36 1.76±0.32 0.00 LDL-C(mmol/L)2.87±0.68 2.31±0.52 0.05男性〔n(%)〕 120(48.0)108(54.0)0.52高血壓〔n(%)〕 58(23.2)20(10.0)0.00糖尿病〔n(%)〕 45(18.0)17(8.5)0.001)腦卒中〔n(%)〕 29(11.6)5(2.5)年齡(歲)0.38

表2 兩組M235T SNPS基因型及等位基因的分布〔n(%)〕

表3 M235T基因多態性與傳統風險因素的交互作用

3 討論

房顫是最常見的持續性心律失常，國內總發病率為0.4%，隨著年齡增長房顫的發生率逐漸增加，＞75歲發病率可達10%左右。其發生與近期心衰史、高血壓病史、≥75歲、糖尿病、腦卒中等危險因素相關。M235T多態性是AGT基因第二個外顯子的第704位的胸腺嘧啶核苷酸(T)變成了胞嘧啶核苷酸(C)，導致第235個密碼子編碼的甲硫氨酸(Met)變成了蘇氨酸(Thr)，因為第235個密碼子編碼的氨基酸不一致，形成了兩個等位基因:235M(野生型)和235T(變異型)，對人類而言構成了3種基因型:純合子235MM、235TT和雜合子235MT。M235T多態性增加房顫風險的機制未明，研究表明TT基因型攜帶者血清AGT水平升高，而AGT水平的升高又相應引起血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)濃度的增加。AngⅡ通過成纖維細胞的AngⅡ受體Ⅰ(ATⅠ)介導，主要經絲裂原活化蛋白激酶家族的細胞外信號調節激酶途徑刺激成纖維細胞的增殖，從而誘導其Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達及Ⅰ、Ⅲ型膠原合成及分泌增加，最終導致心房纖維化〔9，10〕。同時，AngⅡ水平增高，通過與AT1受體結合可激活MAPK系統，從而激活 MAPK家族的信號分子ERK，而ERK激活可使縫隙蛋白 S255，S279，S282多位點磷酸化，導致心肌縫隙連接蛋白(Cx)合成增加;升高的AngⅡ與AT1受體結合，經與G蛋白耦聯，導致細胞內Ca2+內流增加，從而激活Ca2+依賴的蛋白酶Cal2 pains并破壞細胞亞微結構，導致溶酶體釋放，最后使Cx降解增加及含量降低〔11〕。這種合成-降解的失衡可能會引起Cx重構，而心房纖維化和Cx重構對房顫的發生及發展具有重要影響〔4〕。

近年來，基因-環境間交互作用對心血管疾病的影響逐漸成為研究熱點。波蘭的Niemiec等〔4〕研究納入255名高加索人(包括158名冠心病患者和97名無冠心病患者)，分析結果表明冠心病患者M235T的T等位基因與血膽固醇過多(TC≥5 mmol/L或LDL-C≥3 mmol/L)協同增加了患冠心病的危險。而M235T多態性與房顫危險因素的交互作用研究目前還未見相關報道。本文發現M235T與腦梗死、高血壓協同增加了患房顫的風險，其機制可能是ATⅡ不僅能使小動脈平滑肌收縮及外周血管阻力增加，還能興奮交感神經系統，使去甲腎上腺素分泌增加及血管收縮，最終促進高血壓及腦梗死的發生與發展，其機制還有待進一步研究。

1 Topal NP，Ozben B，Hancer VS，et al.Polymorphisms of the angiotensinconverting enzyme and angiotensinogen gene in patients with atrial fibrillation〔J〕.J Renin Angiotensin Aldosterone Syst，2011;12(4):549-56.

2 Tsai CT，Lai LP，Lin JL，et al.Renin-Angiotensin system gene polymorphisms and atrial fibrillation〔J〕.Circulation，2004;109(13):1640-6.

3 Freitas AI，Mendonca I，Brión M，et al.RAS gene polymorphisms，classical risk factors and the advent of coronary artery disease in the Portuguese population〔J〕.BMC Cardiovascular Disorders，2008;8(15):1471-2261.

4 Niemiec P，Zak I，Wita K.The M235T polymorphism of the AGT gene modifies the risk of coronary artery disease associated with the presence of hypercholesterolemia〔J〕.Eur J Epidemiol，2008;23(5):349-54.

5 Zhou GY.On the Estimation of additive interaction by use of the four-by-two table and beyond〔J〕.Am J Epidemiol，2008;168:212-24.

6 吳志勤，陳慶偉，吳 慶，等.血清脂蛋白a與冠心病的研究〔J〕.重慶醫科大學學報，2011;36(11):1356-60.

7 李 虹，楊 軍，蘇 銳.DDAH2基因多態性與冠心病的相關性研究〔J〕.重慶醫科大學學報，2010;35(10):1490-3.

8 杜艷蕾，聶玉強，李瑜元，等.PEMT基因V175M多態性與非酒精性脂肪肝易感性的關系〔J〕.現代生物醫學進展，2008;8(11):2021-3.

9 高 霞，薛 鵬，李 濤，等.叉生分析在交互作用研究中的應用〔J〕. 臨床薈萃，2009;24(17):1478.

10 Ruch RJ，Trosko JE，Madhukar BV.Inhibition of connex in43 gap junctional intercellular communication by TPA requires ERK activation〔J〕.J Cell Biochem，2001;83(1):163-9.

11 Velden HM，Ausma J，Rook MB，et al.Gap-junctional remodeling in relation to stabilization of atrial fibrillation in the goat〔J〕.Cardiovasc Res，2000;46(3):476-86.