高膽固醇血癥對兔胰島細胞結構的影響

董澤波，鹿育薩

糖尿病是冠心病的等危癥［1］，且在糖尿病前期，冠心病的發病風險已明顯增高。我國冠心病患者中合并糖代謝異常者占80%［2］。因此早期發現血糖異常，早期干預顯得極為重要。本實驗以幼年期高膽固醇（TC）飲食的新西蘭大白兔為實驗對象，通過免疫組化觀察胰島B細胞的形態學變化，旨在闡明早期高膽固醇飲食對B細胞結構的影響，為冠心病患者進行糖耐量異常的早期預防和治療提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 24只健康2月齡雄性新西蘭白兔，體重（2.0±0.2）kg，采用單籠飼養，自由飲水，購自山西省農業科學院畜牧獸醫研究所。

1.2 造模與分組 新西蘭大白兔，采用隨機數字法將實驗動物分為3組：空白組8只，普通飼料喂養；模型組8只；他汀組8只。空白組給予普通顆粒兔飼料100g／d；模型組給予普通顆粒兔飼料＋1.0%膽固醇［3］；他汀組給予2.5mg／（kg·d）［4］；共喂養8周。

1.3 測定方法 免疫組化檢測，顯示棕褐色顆粒者為陽性，顯微鏡觀察。計算機圖像分析系統胰島素染色陽性細胞的陽性程度及胰島素染色陽性細胞面積。

1.4 統計學處理 采用SPSS 13.0軟件處理，計量資料以均數±標準差（x±s）表示。以單因素方差分析（one way ANOVA）求F值。

2 結 果

2.1 高膽固醇飼養后血脂情況 各組兔喂養膽固醇之前血清總TC濃度均正常，空白組（1.15±0.08）mmol／L，模型組（1.13±0.06）mmol／L，他汀組（1.17±0.02）mmol／L。8周后模型組血清總TC濃度升高，模型組為（13.74±1.73）mmol／L，空白組為（1.75±0.16）mmol／L，他汀組為（1.78±0.21）mmol／L。模型組與空白組、他汀組比較有統計學意義（P＜0.05），空白組與他汀組比較無統計學意義（P＞0.05）。

2.2 高膽固醇血癥對兔胰島B細胞免疫組化的影響 胰島B細胞免疫組化染色后鏡下觀察，空白組HistostainTM-SP法染色后胰島B細胞為棕褐色的免疫反應陽性細胞，多位于胰島中央，占據胰島的絕大部分，排列緊密，細胞界限清楚，多數呈圓形或橢圓形，免疫反應陽性物質分布于細胞質內，呈顆粒狀即胰島素分泌顆粒，細胞質內分泌顆粒豐富，界限較清楚，著色深。模型組胰島內免疫反應陽性細胞數量明顯減少，個別胰島內B細胞所剩無幾，僅能辨認其輪廓，細胞質內分泌顆粒明顯減少甚至缺失，顆粒著色淺，界限模糊，分布不均勻。他汀組與模型組相比，B細胞數量較多，界限較清楚，胞質內免疫反應陽性顆粒明顯增多，著色較深，比模型組明顯改善。

計算機圖像分析系統的定量指標監測，兔胰島內染色陽細胞漿著棕色顆粒者即為B細胞。染色陽性區域面積大小代表胰島素表達量。圖像分析采用Image-pro plus6.0系統。測量指標采用統計面積（Area）、平均光密度（Density）、累計光密度IOD（sum）等形態學量化指標。模型組中陽性染色表達最低，各項指標與空白組及他汀組比較有統計學意義（P＜0.05）；他汀組各項指標與空白組比較無統計學意義。詳見表1。

表1 高膽固醇血癥對兔免疫組化相關指標的影響（x±s）

3 討 論

血脂異常是冠心病的重要易患因素。阿托伐他汀是肝細胞膽固醇合成中HMG-CoA還原酶抑制劑，能有效降低血低密度脂蛋白膽固醇和升高血高密度脂蛋白膽固醇水平，同時對中間密度脂蛋白膽固醇和極低密度脂蛋白膽固醇也有降低作用，能有效治療因各種原因導致的高低密度脂蛋白血癥和高三酰甘油血癥。在冠心病一級和二級預防中能有效降低冠心病的發病率和病死、病殘率。除此以外，他汀類藥物還能抑制炎癥和氧化，如降低炎癥指標高敏C反應蛋白的水平。

糖耐量異常（IGT）是糖尿病的前奏，也稱為“糖尿病前期狀態”。正常糖耐量是由胰島素分泌和胰島素作用二者相互平衡的結果。如果胰島素作用減弱或者產生胰島素抵抗，但胰島素分泌功能未降低，糖尿量仍可維持正常水平，糖尿病也不會產生，因此胰島B細胞功能和胰島B細胞數量之間有著很緊密的關系。當B細胞的數量不足以產生足夠的胰島素去對抗血糖時，即可出現糖耐量異常，進而發展為糖尿病。

本研究顯示高膽固醇飲食組胰島B細胞凋亡數量明顯增加，經阿托伐他汀干預后，胰島內胰島B細胞凋亡數量減少，較正常組無明顯變化。提示高膽固醇對胰腺組織造成了直接損傷。Stern［5］曾在1995年提出“共同土壤”，即冠心病和糖尿病或血糖增高之間存在著共同的發病土壤，且目前的研究也已經證實，冠心病患者普遍存在糖耐量異常現象［6］。因此，心血管科醫師應密切關注冠心病患者的血糖情況，必要時行OGTT［7］，以減少冠心病患者早期合并糖耐量異常的發生，提高患者生存質量。同時，在早期應用阿托伐他汀穩定斑塊的同時［8］，改善糖耐量異常。

［1］ Expert panel on detection.Eveluation，and treatment of highblood cholesterol in adults.Executive summary of the third report of the National Cholesterol Education Program（NCEP）expert panel on detection，eveluation.and treatment of high blood cholesterol in adults（adult treatment paned Ⅱ）［J］.JAMA，2001，285（19）：2486-2497.

［2］ 中國心臟調查組.中國住院冠心病患者糖代謝異常研究——中國心臟調查［J］.中華內分泌代謝雜志，2006，22（1）：7-10.

［3］ Austin MA.Epidemiology of hypertriglgceridemia and cardiovascular disease［J］.Am J Cardiol，1999，83（9）：166.

［4］ Mital S，Zhang X，Zhao G，et al.Simvastin upregulates coronary vascular endothelial nitric oxide production in conscious dogs［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2000，279（6）：H2649.

［5］ Stern MP.Diabetes and cardiovascular disease.The“common soil”hypothesis［J］.Diabetes，1995，44（4）：369-374.

［6］ 孟祥云，呂建莊，趙清波，等.冠心病和高血壓住院患者糖代謝異常分析［J］.臨床心血管雜志，2008，24（6）：470-471.

［7］ Bartnik M，Ryden L，Malmberg KO，et al.On behalf of the Euro Heart Survey Investigators.Oral glucose tolerance test is needed for appropriate classification of glucose regulation in patients with coronary artery disease：A report from the Euro Heart Survey on Diabetes and the Heart［J］.Heart，2007，93（1）：72-77.

［8］ 李學文，趙季紅，姜鐵民，等.應用64排螺旋CT評價阿托伐他汀對冠狀動脈斑塊的影響［J］.醫療衛生裝備，2011，32（4）：44.