Ang-2、VEGF在進展期胃癌中的表達及與淋巴管生成的相關性分析

施 怡 李勇 陳石偉

到目前為止手術仍是唯一的胃癌治愈手段，但即使獲得根治性切除的患者也會有50%～90%的患者術后復發或者死亡，患者5年生存率僅30%［1-2］，而淋巴結轉移是影響進展期胃癌患者預后的重要因素。本組研究就促血管生成素(angiopoietin，Ang-2)和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在進展期胃癌中的表達及其與淋巴管生成的相關性進行探討，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2008年1月至2011年1月收入的進展期胃癌患者共66例，其中男性51例，女性15例，年齡57～73歲，平均年齡(62.1±7.8)歲;低分化腺癌 31例、中分化腺癌19例、高分化腺癌16例。另外選取同批中18例患者的癌旁2～3 cm處胃黏膜組織以及正常的胃組織作為對照，所有患者標本均經病理組織學的診斷所證實。患者術前均未經任何的抗腫瘤治療，經10%的甲醛固定，并行常規石蠟包埋制作成4 mm厚的切片。

1.2 免疫組織化學染色

采用免疫組化SP法進行染色，Ang-2、VEGF免疫組化試劑盒均購自武漢博士德公司，標本經常規二甲苯后給予梯度酒精脫水、水化并高壓修復，滴加3%的過氧化氫溶液以及山羊血清封閉，滴加一抗過夜，PBS沖洗后滴加生物素標記二抗，甩掉PBS液并滴加鏈霉菌抗生物素一過氧化物酶溶液，加入新鮮配置的DAB溶液并于顯微鏡下觀察3～5 min，蘇木精染色30 s，溫熱PBS沖洗，給予梯度酒精脫水，二甲苯透明，給予中性樹膠封片。所有標記過的染色標本均設置陽性及陰性對照。

1.3 免疫組化結果檢測

免疫組化結果采用雙盲法檢測。Ang-2、VEGF陽性判斷標準:以細胞膜或者細胞質出現棕黃色的顆粒作為陽性表達，每張切片隨機選擇5個不同的視野，結果包括陽性細胞比例+染色強度。陽性細胞比例中≤10%計0分，≥11%～25%計1分，≥26%～50%計2分，≥51%～75%計3分，＞75%～100%計4分。染色強度計算中，弱為0分，中為1分，強為2分。結果0～3分為陰性，≥4分為陽性［3］。而淋巴管密度計數采用Wendner等［4］方法，先在低倍鏡下觀察切片以確定淋巴管密度最高處，再在高倍鏡下計算D2-40陽性淋巴管數，采用多功能病理圖像分析儀對標本5個視野內的淋巴管個數進行計數，所有5個視野內淋巴管的均數作為該部位的MLVD值。

1.4 統計學處理

數據采用SPSS16.0統計學軟件進行處理，資料采用均數±標準差(±s)表示，計量資料采用t檢驗，計數資料采用q檢驗，其中P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同胃組織中Ang-2、VEGF表達情況對比

Ang-2、VEGF表達陽性率在胃癌組織中分別為63.6%(42/66)和54.5%(36/66)，顯著高于癌旁組織的16.7%(3/18)、12.5%(2/18)，及正常組織中的5.6%(1/18)、5.6%(1/18)，P＜0.05。

2.2 胃癌組織中Ang-2、VEGF陽性表達與臨床病理參數之間關系

胃癌組織中Ang-2、VEGF陽性表達與TNM分期和有無淋巴結轉移明顯相關。TNM分期Ⅰ～Ⅱ的Ang-2、VEGF表達陽性率顯著低于TNM分期Ⅲ～Ⅳ的患者，P＜0.05;無淋巴結轉移的Ang-2、VEGF表達陽性率顯著低于有淋巴結轉移的患者，P＜0.05。見表1。

表1 胃癌組織中Ang-2、VEGF表達與臨床病理參數的關系(例，%)

2.3 胃癌組織中Ang-2、VEGF的表達與MLVD之間的相關性

Ang-2陽性表達組淋巴管密度平均為(15.32±3.25)個，顯著高于陰性組的(12.65 ± 2.51)個，t=4.053，P＜0.05。而 VEGF陽性表達組淋巴管密度平均為(15.06±3.17)個，顯著高于陰性組的(12.48±2.49)個，t=3.218，P＜0.05。

3 討論

淋巴結轉移是影響進展期胃癌患者預后的重要因素。淋巴結轉移是惡性腫瘤所獨有的行為學特征，是影響惡性腫瘤疾病預后的重要因素。有多種因子參與腫瘤淋巴結轉移的調控，本組研究探討血管內皮生長因子和血管生成素的促腫瘤淋巴結轉移作用。

血管生成素(angiopoietins，Ang)是一類分泌型的細胞因素，主要是由血管內皮細胞所分泌產生，由于其能促進血管的生成，故被命名為血管生成素［5］。Ang-2基因位于8p23.1，由496個氨基酸組成，與Ang-1有著60%的同源性，并能夠與受體酪氨酸激酶(Tie2)相結合［6］。Ang-2能夠競爭性地拮抗Ang-1，能夠通過競爭性抑制Ang-1與Tie2相互作用而參與血管的重塑和血管內膜的去穩定化，Ang-2正常情況下多分布在子宮、胎盤和卵巢當中，可能與這3種組織的血管重建密切相關［7］。但在病理情況下，Ang-2還能夠表達于炎癥、創傷以及腫瘤部位，參與血管的重建，其與腫瘤的生長、轉移和侵襲密切相關［8］。而遺傳學表明Ang-2也是淋巴管發育過程中重要的因子，Ang-2能夠使牛腸系膜淋巴管內皮細胞中Tie2受體磷酸化，從而能夠達到誘導淋巴管內皮細胞增殖和遷移的目的［9］。本組研究顯示，胃癌組織中的Ang-2(63.6%)表達陽性率顯著高于癌旁組織及正常組織中的表達，結果對比有統計學意義，P＜0.05。在隨后的胃癌組織中Ang-2表達與臨床病理參數之間相關性研究中顯示，胃癌組織中Ang-2表達與TNM臨床病理和有無淋巴結轉移明顯相關，TNM分期Ⅰ～Ⅱ的Ang-2表達陽性率顯著低于TNM分期Ⅲ～Ⅳ的患者，結果對比有統計學意義，P＜0.05;無淋巴結轉移的Ang-2表達陽性率顯著低于有淋巴結轉移的患者，結果對比有統計學意義，P＜0.05。研究結果表明Ang-2與腫瘤的惡性程度以及淋巴結轉移情況密切相關。此外，本組研究還發現，Ang-2陽性表達組淋巴管密度平均為(15.32±3.25)個，顯著高于陰性組的(12.65±2.51)個，結果對比有統計學意義，P＜0.05。表明Ang-2在胃癌中能夠促進癌周微淋巴管的生成，從而達到促進胃癌淋巴結轉移的目的，Ang-2與胃癌淋巴管生存密切相關。

VEGF具有促進血管內皮細胞的遷移、增殖及誘導血管生成的能力，促進微小靜脈通透性增加，與腫瘤的浸潤性生長以及腫瘤血管生存密切相關［10］。但有研究表明單純阻斷VEGF表達并不能夠完全地阻斷腫瘤的生長及血管的形成，其原因可能在于腫瘤組織中存在其他的因子與VEGF協同作用，目前有許多實驗研究表明胃癌組織中的Ang-2與VEGF表達具有顯著的相關性［11］。本組研究顯示VEGF在胃癌中呈現高表達，且其表達與胃癌淋巴管的生成密切相關，其通過促進胃癌淋巴管的生成達到促進胃癌淋巴結轉移的目的，而Ang-2與VEGF表達是否共同促進胃癌的發生、發展，有待于進一步的研究發現。

綜上所述，本組研究認為胃癌中Ang-2、VEGF能夠促進癌周微淋巴管的生成，從而促進胃癌淋巴結轉移。Ang-2、VEGF有望成為預測淋巴管生成以及淋巴結轉移的重要指標。

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