粗針督脈平刺對周圍性面癱大鼠口唇微循環的影響

陳凡,宣麗華,陳君,葉茜茜

(1.浙江中醫藥大學第一臨床醫學院,杭州 310053;2.浙江省中醫院,杭州 310006)

在周圍性面神經損害的動物模型中,有明顯的面肌毛細血管灌注變化,而損傷好轉后面肌微循環可以恢復接近正常水平,據此本研究擬大鼠口唇微循環改變作為主要觀測指標,驗證粗針督脈平刺針刺療法對大鼠周圍性面神經損傷后面肌微循環的影響,為粗針督脈平刺療法的治療提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物用雄性Wistar大鼠70只,重200～250 g(SPF級,浙江中醫藥大學實驗動物中心)。針灸針規格為0.18 mm×25 mm和0.25 mm×40 mm,江蘇省吳江市佳辰針灸器械有限公司生產。激光多普勒血流灌注成像儀,PeriScan PIM Ⅱ系統(瑞士PERIMED公司制造),本院第三臨床醫學院研究室提供,激光波長670 nm,探頭與檢測物之間距離20 cm。本研究采用NR掃描模式,步長 3 mm,根據觀察部位確定掃描面積。該儀器與計算機聯機,并應用 LDPI圖像軟件,進行體表血流圖的記錄、分析、處理和存貯。檢測的微循環血流灌注值使用單位為 PU(測量體積內血細胞濃度與血細胞平均運動速度的乘積)。

1.2 造模

將70只雄性Wistar大鼠編號,隨機取56只,按文獻[1-2]方法造模。大鼠禁食1 d后稱重,用10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)行腹腔注射,待5 min大鼠處于麻醉狀態后,將其左側臥固定于手術臺上,耳后剪毛,碘伏乙醇消毒備皮,俯臥位固定于鼠板上,沿右側耳根后緣行一弧形切口,鈍性分離面神經主干,用微型眼科持針器(Inamli Restfrei制)壓迫露出的面神經,持續30 s,松開30 s,再壓迫30 s,持針器尖端壓強7.84×106 Pa,壓迫幅寬1.0 mm,制成大鼠面癱模型。用縫線標記損傷段,縫合。麻醉過后可看到造模大鼠出現右側面癱表現。

1.3 分組和干預方法

14只未造模大鼠為假手術組(A),A組鈍性分離面神經主干后未做鉗夾造模,其余56只損傷大鼠隨機分為粗針針刺組(B)、普通針刺組(C)、基礎西藥組(D)、面癱模型組(E),每組14只。穴位定位參照華興邦《大鼠穴位圖譜的研制》[3];造模后第1天不處理;B組造模后于神道穴約呈10°角進針,沿督脈經向下平刺2 cm,操作者不使用提插捻轉等手法,留針1 h;C組在大鼠合谷、頰車、四白、地倉穴呈10°角進針,針刺深度0.5 cm,不使用提插捻轉等手法,留針30 min;D組予強的松片灌胃治療,維生素B1、維生素B12腹腔注射給藥;E組不予治療。所有大鼠正常環境下飼養,造模后第7天和第14天,觀察所有大鼠面部有無明顯變化,并采用激光多普勒灌注成像儀PeriScan PIM Ⅱ系統觀察所有大鼠右唇微循環血流灌注變化。

1.4 數據采集

于造模后1天和治療后第7天、第14天時,按Simone10分法[2]對其神經功能進行評分,去除評分為4分以下的動物。Simone10分法評定如下,1分為無觸須運動且胡須方向向后,無眼閉和瞬目反射;2分為輕微觸須運動且胡須方向向后,眼部肌肉緊張;3分為較大觸須運動且方向向后,存在瞬目反射伴50%眼閉;4分為正常運動且方向向后,存在瞬目反射伴75%眼閉;5分為正常運動且方向向前,完全存在瞬目反射。胡須運動和眼部肌肉運動所得評分相加,一共10分。

由專人操作,于造模后1天和治療后第7天、第14天時,大鼠稱重后按前述方法麻醉,室內溫度保持在15℃～20℃,口唇、黏膜溫度30℃～32℃,仰臥位暴露嘴唇,取右側嘴唇兩端連線的中點,取直徑為0.2 cm的圓形測量面積,采用激光多普勒灌注成像儀進行檢查,獲得微循環血流灌注圖及微循環血流灌注值(測量體積內血細胞濃度與血細胞平均運動速度的乘積,單位PU)。

1.5 統計學方法

采用SPSS13.0統計軟件處理,統計描述用均數±標準差表示,組間比較用方差分析,方差齊性時用 LSD檢驗,方差不齊時用Dunnett-t檢驗,P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠右側嘴唇血流灌注圖區域顏色比較

紅色區域表示血流灌注豐富,黃色和綠色區域表示血流灌注稍差,藍色區域表示血流灌注差。治療7 d后,A組測量區域以黃色為主;B組圖測量區域以紅色、黃色為主,黃色居多;C組和D組測量區域以紅色和黃色為主,E組以紅色為主,部分區域見黃色。治療14 d后,A組測量區域依舊以黃色為主,但顏色較淡;B組和C組測量區域以黃色為主,但見少許綠色;D組測量區域以黃色為主,可見點狀分布的紅色和綠色;E組以黃色和紅色為主。詳見圖1和圖2。

2.2 手術前后大鼠口唇血流變化

假手術組術后與術前比較口唇血流灌注無明顯變化(P＞0.05),手術組大鼠造模后口唇血流灌注比術前明顯上升(P＜0.01),本實驗結果表明,周圍性面癱大鼠模型會造成大鼠口唇血流灌注的明顯升高。詳見表1。

表1 手術前后大鼠口唇血流變化 (±s,PU)

表1 手術前后大鼠口唇血流變化 (±s,PU)

注:與同組術前比較1)P＜0.01

組別 n 術前 術后假手術組 14 133.22±27.80 128.10±31.28手術組 56 130.47±22.29 180.76±21.761)

圖1 第7天時各組大鼠嘴唇血流灌注圖的比較

圖2 第14天時各組大鼠嘴唇血流灌注圖的比較

2.3 各組大鼠治療后右側口唇微循環血流灌注值比較

表2 各組大鼠右側口唇血流灌注量值比較 (±s,PU)

表2 各組大鼠右側口唇血流灌注量值比較 (±s,PU)

注:與假手術組相比1)P＜0.05,2)P＜0.01;與面癱模型組比較3)P＜0.01;與普通針刺組比較4)P＜0.05;與同組7 d比較5)P＜0.01

組別 n 治療時間7 d 14 d假手術組 14 130.36±28.56 131.16±22.84基礎西藥組 14 151.44±15.801)3) 141.61±13.133)粗針針刺組 14 163.26±20.462) 133.30±21.703)4)5)普通針刺組 14 165.43±24.572) 153.20±30.731)面癱模型組 14 178.16±12.572) 169.47±9.792)

面癱模型組與同時相假手術組比較,口唇血流灌注量有明顯差異(P＜0.01),但面癱模型組右側口唇血流灌注量隨著時間的延長有緩慢降低的趨勢。各組隨著治療時間的延長右側口唇血流灌注量均有恢復正常的趨勢,在治療7 d時,各組口唇血流灌注量平均值均高于假手術組(P＜0.05),治療14 d后,基礎西藥組和粗針針刺組右側口唇血流灌注量平均值下降比較明顯,與面癱模型組比較均有明顯差異(P＜0.05),普通針刺組和基礎西藥組與治療7 d時右側口唇血流灌注量平均值無明顯差異。基礎西藥組和粗針針刺組均能恢復到假手術組水平,且比治療7 d時明顯改善右側口唇血流灌注量(P＜0.05)。提示粗針能使面癱模型大鼠口唇微循環接近正常水平,并且要優于普通針刺,在統計學上有差異,與西藥治療無明顯區別,且在統計學上無明顯差異。詳見表2。

2.4 各組大鼠行為學評分比較

在治療7 d時,各治療組大鼠行為學評分均高于面癱模型組(P＜0.01);與普通針刺組比較,基礎西藥組大鼠行為學評分較高(P＜0.05),粗針針刺組則比普通針刺組行為學評分高,但兩組差異無統計學意義(P＞0.05)。在14 d時,各治療組大鼠行為學評分均高于面癱模型組(P＜0.01),與普通針刺組比較,基礎西藥組大鼠行為學評分較高,但兩組之間差異無統計學意義(P＞0.05),粗針針刺組大鼠行為學評分較高,兩組之間差異有統計學意義(P＜0.05)。除假手術組外,各組大鼠在14 d時行為學評分均與7 d時的差異有統計學意義(P＜0.01)。

表3 各組大鼠行為學評分比較 (±s,分)

表3 各組大鼠行為學評分比較 (±s,分)

注:與假手術組相比1)P＜0.05,2)P＜0.01;與面癱模型組比較3)P＜0.01;與普通針刺組比較4)P＜0.05;與同組7 d比較5)P＜0.01

組別 n 治療時間7 d 14 d假手術組 14 10.00±0.00 10.00±0.00基礎西藥組 14 9.00±0.002)3)4) 9.53±0.512)3)5)粗針針刺組 14 8.07±0.752)3) 9.61±0.501)3)4)5)普通針刺組 14 7.84±0.372)3) 9.23±0.432)3)5)面癱模型組 14 6.08±0.282) 7.09±0.302)5)

3 討論

激光多普勒成像儀可用于無創組織血流灌注量圖像化及量化檢查,其通過低能量激光束的掃描,生成監測區域的血流灌注量彩色圖像,因此可以監測健康或者病理組織的微循環狀況。本研究中應用了儀器系統具備的同時記錄檢測部位血流值和直觀圖像的功能,進行圖像的觀察對照和檢測血流值的統計學對照。本研究參考相關文獻[4]以口唇黏膜的微循環檢測作為了解面肌血循環功能狀態的指標來觀察周圍性面癱的病情及療效。

針刺療法在臨床應用較多[5-6],包括傳統針灸療法及粗針刺法等。本研究采用的粗針平刺法有別于傳統醫學中的針灸療法。首先針具的直徑為 1.0 mm,而普通針灸針直徑多在0.18～0.35 mm之間;其次施針部位在督脈上,而傳統針灸多在面部穴位上施針。本研究參考相關文獻[7]將粗針刺入大鼠后留針時間定為1 h;根據人體與大鼠脊椎的長寬比較,確定實驗所用的粗針直徑為0.25 mm,體針直徑為0.18 mm。

周圍性面癱的病理改變主要為面神經水腫,可見炎細胞浸潤,髓鞘或軸突有不同程度的變性,以在莖乳孔和面神經管內的部分尤為顯著[8]。故現代醫學理論主張應改善局部血液循環,解除血管痙攣,促使局部水腫炎癥的及早消退,恢復神經機能,防止癱瘓肌的過度牽引。因此治療上可以通過促進局部血液循環的改善,解除血管痙攣就可促周圍性面癱的恢復。其中微循環障礙主要表現為血管通透性和血漿容量發生變化[9],肌肉內壓力升高[10]。但目前有學者[11]發現面神經炎急性期患者的頭面部遠紅外熱像特征以充血性改變為主。說明面癱發生時,面部組織可能由于面部組織出現炎癥反應,微血管擴張而出現充血現象。面癱發病急性期面神經微循環障礙并不能馬上導致面部肌肉微循環的障礙。實驗中造模前后測量大鼠口唇微循環值也證實面癱急性期大鼠口唇微循環以充血性改變為主。

本實驗以大鼠口唇黏膜的微循環檢測作為了解面肌血循環功能狀態的指標以及大鼠面部行為學觀察來觀察周圍性面癱的病情及療效。有研究發現[12],針刺能改善模型大鼠患肢活動,促進痛覺、觸覺恢復,改善血液流變學各項指標,減輕炎癥反應,改善神經根變性,降低炎癥因子水平。本實驗結果顯示經過粗針督脈平刺治療后,大鼠口唇血流灌注量的值是不斷降低最后接近正常。可能是因為面癱早期,面部組織出現炎癥反應,微血管擴張。粗針督脈平刺后,面部組織的炎癥反應逐漸消失,面部微血管充血逐漸減輕,最后恢復正常,因此口唇微循環灌注量的值也隨著治療逐漸降低最后恢復正常。不同的治療方式均能降低面癱模型大鼠的口唇微循環值,減輕炎癥反應,并對行為學有明顯改善作用,也證明了粗針督脈平刺對周圍性面癱大鼠面神經的炎癥的消除,對充血微血管的恢復有積極作用,且粗針針刺的遠期療效顯著。本實驗雖在一定程度上通過對口唇微循環灌注量的測量和行為學功能的評分了解面癱大鼠的恢復情況,但并不能直接反映大鼠面神經局部的血流灌注情況,面部組織微循環與面神經周圍微循環的關系尚待進一步研究。

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