2011年北京市海淀區(qū)手足口病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果分析

北京市海淀區(qū)疾病預(yù)防控制中心(100094) 白 婧 王菊光 劉方遙 紀(jì)黎黎 何 斌

手足口病(hand-foot-mouth disease，HFMD)是由多種人腸道病毒引起的一種兒童常見傳染病，是我國法定報(bào)告管理的丙類傳染病〔1〕，容易在兒童中造成暴發(fā)和流行，甚至產(chǎn)生重癥、死亡病例〔2，3〕。為了解手足口病的流行特征，更好地防控手足口病，北京市各個(gè)區(qū)縣疾控中心相繼開展了HFMD的監(jiān)測(cè)工作。北京市海淀區(qū)2011年3～12月采集本地區(qū)HFMD患者臨床標(biāo)本205例，對(duì)其進(jìn)行分子生物學(xué)檢測(cè)，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

材料與方法

1.病例標(biāo)本來源

本研究所用標(biāo)本為2011年3月至12月期間采集于北京地壇醫(yī)院、北京佑安醫(yī)院、北京海淀醫(yī)院、清河圣地婦兒醫(yī)院、新世紀(jì)兒童醫(yī)院、北京兒童醫(yī)院等6家醫(yī)院就診的HFMD患者咽拭子，其中包括:152例散發(fā)病例(散發(fā)病例為監(jiān)測(cè)病例，每個(gè)自然月的第一周和第三周，采集于清河圣地婦兒醫(yī)院)、53例重癥病例(手足口病患者神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)等出現(xiàn)危及生命的癥狀和體征，臨床一般診斷為重癥病例)。所有病例標(biāo)本采集后－4℃運(yùn)輸，－20℃保存。205例病例標(biāo)本的年齡在8個(gè)月到11歲之間。男女比例為1.53:1。

2.腸道病毒核酸檢測(cè)

(1)腸道病毒核酸提取 核酸提取采用Roche公司生產(chǎn)的核酸自動(dòng)提取儀用試劑盒MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。

(2)腸道病毒核酸擴(kuò)增 核酸擴(kuò)增采用愛普益公司生產(chǎn)的腸道病毒通用型、柯薩奇病毒A16型、腸道病毒71型核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。PCR的擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)?42℃30min，1 個(gè)循環(huán);95℃ 3min，1 個(gè)循環(huán);94℃ 10s，50℃30s，72℃ 1min，4 個(gè)循環(huán);94℃ 15s，55℃ 45s，40 個(gè)循環(huán)。若檢測(cè)樣本無S型擴(kuò)增曲線或Ct＞36.2，則判定樣本為核酸檢測(cè)陰性;若檢測(cè)樣本呈S型擴(kuò)增曲線且Ct≤36.2，則判定樣本為核酸檢測(cè)陽性。

3.儀器設(shè)備

核酸提取采用Roche公司的MPLC2.0型核酸自動(dòng)提取儀;核酸擴(kuò)增采用AB公司的7500Fast型熒光定量PCR儀。

結(jié) 果

1.HFMD病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

應(yīng)用熒光RT-PCR的方法對(duì)205例HFMD患者的咽拭子進(jìn)行了腸道病毒的核酸檢測(cè)，不同月份病毒核酸檢測(cè)結(jié)果見表1。從表中的數(shù)據(jù)計(jì)算得出，患者的咽拭子的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)總陽性率為57.56%(118/205)，其中，監(jiān)測(cè)病例的實(shí)驗(yàn)室陽性率為72.16%(96/152)，重癥病例的實(shí)驗(yàn)室陽性率為41.50%(22/53)。按照手足口防控指南(2009)版的要求，對(duì)海淀區(qū)內(nèi)手足口病毒的流行情況進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)，除3、4月外，其他月份均采集HFMD患者咽拭子15～25份進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室病毒核酸檢測(cè)，6～10月，監(jiān)測(cè)病例EV71病毒的陽性率較低，分別為8.00%、4.55%、0%和10.53%;監(jiān)測(cè)病例CVA16全年均呈現(xiàn)較高的陽性率，陽性率最高在10月，為73.33%，最低在5月，為13.33%，平均陽性率為30.90%;5～10月，監(jiān)測(cè)病例均有其他HEV病毒檢出，而4月、11～12月，均未檢出其他HEV病毒。重癥病例發(fā)病率主要集中在6～8月，符合手足口病的發(fā)病規(guī)律，而10～12月，又出現(xiàn)了一個(gè)手足口重癥病例的發(fā)病小高峰。

2.不同性別HFMD病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

對(duì)全年檢測(cè)數(shù)據(jù)按照性別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)得到海淀區(qū)不同性別HFMD病毒核酸檢測(cè)結(jié)果，見表2。HFMD病例數(shù)中男性患者為124例，女性患者為81例，男女比例為1.53:1;監(jiān)測(cè)病例中男性患者為90例，女性患者為62例，男女比例為1.45:1;重癥病例中男性患者為34例，女性患者為19例，男女比例為1.79:1。從總病例看，女性患者的CAV16病毒陽性率為30.86(25/81)，男性患者的CAV16陽性率為20.97%(26/124)，兩者存在顯著差異(P=0.046＜0.05)。而EV71病毒陽性率男性和女性分別為17.74%(22/124)和17.28%(14/81)，其他 HEV病毒陽性率分別為15.32%(19/124)和14.81%(12/81)。

3.不同年齡HFMD病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

對(duì)HFMD患者咽拭子病毒核酸檢測(cè)結(jié)果按照0～歲、3～歲、6～歲以及12歲以上四個(gè)年齡段進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，見表 3。205例 HFMD患者中，122例(59.51%)屬于0～歲組，75例(36.59%)屬于3～歲組，8例(3.90%)屬于6～歲組，12歲以上無HFMD病例。HFMD以感染0～歲、3～歲兩個(gè)年齡段為主，研究發(fā)現(xiàn)，2011年海淀區(qū)這兩個(gè)年齡段兒童感染的HFMD病原體主要以CAV16為主，0～歲組25.41%(31/122)、3～歲組25.33%(19/75)。

表1 北京市海淀區(qū)3～12月份HFMD病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

表2 北京市海淀區(qū)不同性別HFMD病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

表3 北京市海淀區(qū)不同年齡HFMD病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

討 論

EV71和CAV16為引起HFMD的主要病原體，在不同的時(shí)期，兩者交替占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位。2008年北京市HFMD病原以EV71為主，CAV16為輔，高峰期(5月～8月)EV71是 CAV16的4.3倍;2009年北京市HFMD的主要病原仍然是CAV16和EV71，但其中CAV16的檢出數(shù)是EV71檢出數(shù)的1.4倍〔4〕。豐臺(tái)區(qū)2008年手足口病以 EV71感染為主，2009年以CAV16感染為主，而2010年EV71感染比例又有所上升〔5〕。大興區(qū)2008年手足口實(shí)驗(yàn)室診斷病例分型結(jié)果顯示 EV71占陽性病例的 79.41%，2009年以CAV16感染為主，而2010年EV71又占到陽性病例數(shù)的63.36%〔6〕。平谷區(qū)2008年～2010年的手足口實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)病例數(shù)雖相對(duì)較少，但流行趨勢(shì)和以上兩個(gè)區(qū)相同〔7〕。從實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果可以看出，2011年海淀區(qū)手足口病主要是CAV16感染為主，占實(shí)驗(yàn)室檢出陽性數(shù)的43.22%(51/118)。隨著手足口病近年來的暴發(fā)流行〔8〕，做好手足口病的防控工作顯得尤為重要，而利用現(xiàn)有數(shù)據(jù)，對(duì)手足口病的發(fā)病趨勢(shì)進(jìn)行預(yù)測(cè)，并研究手足口病毒不同型別的流行季節(jié)分布特征、易感人群分布特征以及臨床特征等，就可以及早地、有針對(duì)性地在社區(qū)、托幼機(jī)構(gòu)開展手足口防病宣傳工作，降低手足口病的發(fā)病率。

2011年海淀區(qū)手足口病重癥病例的發(fā)病規(guī)律與2011年海淀區(qū)手足口病月發(fā)病數(shù)統(tǒng)計(jì)規(guī)律相同，6～8月為手足口病發(fā)病高峰期，平均發(fā)病數(shù)為713例，而10～12月出現(xiàn)一個(gè)手足口病發(fā)病的小高峰，平均發(fā)病數(shù)為327例(數(shù)據(jù)來源于中國疾病預(yù)防控制信息系統(tǒng))。從實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果來看，重癥病例的檢出率低于監(jiān)測(cè)病例的檢出率。劉海博〔9〕等人研究了不同發(fā)病至采樣時(shí)間陽性率的差異，發(fā)現(xiàn)發(fā)病至采樣時(shí)間≤2d和＞2d的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而采樣至送檢時(shí)間、重癥與非重癥病例標(biāo)本以及不同單位采樣標(biāo)本陽性率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上研究發(fā)現(xiàn)提示，接診醫(yī)院一旦發(fā)現(xiàn)重癥病例，應(yīng)立即逐級(jí)上報(bào)，區(qū)縣疾控中心才能及時(shí)采集到患者標(biāo)本進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，及早對(duì)病例做出明確實(shí)驗(yàn)室診斷，在針對(duì)患者的治療和疫情防控方面均有重要意義。

無論是監(jiān)測(cè)病例還是重癥病例，男性的病例數(shù)均高于女性，這與北京市其他幾個(gè)區(qū)縣的研究結(jié)果相一致〔5，10－11〕，這可能與男孩經(jīng)常與小朋友玩耍的比例顯著高于女孩有關(guān)〔12〕，增加了密切接觸傳播疾病的幾率。從不同性別HFMD病毒核酸檢測(cè)結(jié)果來看，女性患者的CAV16病毒陽性率高于男性患者的CAV16陽性率。而曲梅對(duì)北京市2009年手足口病的病原結(jié)構(gòu)研究顯示，CAV16和EV71引起HFMD的人群的特征，無論從發(fā)病年齡、男女性別比、職業(yè)分布等各方面，兩者都沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異〔3〕。兩者結(jié)論出現(xiàn)差異的原因可能與不同年代、不同地區(qū)流行優(yōu)勢(shì)型別的變遷和病毒自身的遺傳進(jìn)化以及人群的免疫狀態(tài)有關(guān)，使得不同型別的腸道病毒對(duì)不同人群存在選擇易感性。這還需要進(jìn)一步研究2011年北京市各地區(qū)CAV16和EV71引起HFMD的人群的特征情況，來得出相應(yīng)的結(jié)論。

2010年昌平區(qū)HFMD發(fā)病年齡集中在2～4歲年齡組，以EV71為主〔13〕。本研究劃分的統(tǒng)計(jì)年齡段與昌平區(qū)有所不同，但基本趨勢(shì)一致，符合手足口病發(fā)病特征〔14〕。而HFMD高發(fā)年齡段以CAV16感染為主，這可能是由于調(diào)查研究的年份有所不同，引起HFMD的病毒優(yōu)勢(shì)型別有所改變所致。

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