山東莘縣甜瓜細菌性軟腐病病原研究

摘 要：在山東省聊城市莘縣采集的甜瓜病果上分離獲得7個細菌菌株，接種甜瓜48 h果實發生明顯腐爛，癥狀同田間發病果。經室內對菌體形態、染色反應、培養性狀、生理生化特性以及致病性測定等項目鑒定，確認該病菌為胡蘿卜軟腐歐氏桿菌胡蘿卜軟腐致病亞種[Erwinia carotovora subsp. carotovora （Jones） Bergey et al.]。

關鍵詞：甜瓜；果實軟腐病；病原鑒定

中圖分類號：S436.5 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2013）11-0100-03

2009年，山東省聊城市莘縣種植甜瓜發生果實腐爛現象，發生面積較大，且有逐年加重的趨勢。除聊城外，山東省其他地區也有該病害發生及危害的報道。發病果實表面最初出現褐色油漬狀斑點，病斑逐漸擴大，剖開病果可見從果皮經肉到瓜瓤逐漸擴大的褐色腐爛，隨著病情加重，最終導致整個果實腐爛，病瓜后期散發惡臭氣味。據癥狀觀察，此病害為一種細菌性病害。為證實病原，筆者開展了此病害的病原菌研究工作。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株 7個供試菌株：編號為SEC1～SEC7，2009～2010年從山東省聊城市莘縣采集的甜瓜病果上分離獲得；對照菌株SEC.C-321：白菜軟腐病菌[Erwinia carotovora subsp. carotovora（Jones）Bergey et al.]，由山東農業大學植保學院植物病理系提供。

1.1.2 供試植物 致病性測定用感病甜瓜：龍甜1號。

1.1.3 培養基 NA培養基為分離培養基；KB培養基用于觀察熒光反應[1]。

1.2 試驗方法1.2.1 病原菌分離純化 取病變組織，用無菌解剖刀切取病健交界部位，并切成表面積為1 mm2的小塊，0.1%

1.2.2 致病性測定 將在NA培養基上培養24 h的SEC1～SEC7菌株分別配成濃度為的菌懸液。取甜瓜果實用滅菌水洗凈晾干，75%酒精擦洗進行表面消毒。用滅菌接種針蘸取菌液刺傷接種，無菌脫脂棉蘸取無菌水覆蓋保濕，28℃條件下誘導發病。每天觀察發病情況，待接種果實發病后進行再分離。

1.2.3 馬鈴薯腐敗 將馬鈴薯洗凈，75%酒精表面消毒，無菌環境下切成5 mm厚的片狀，將SEC1～SEC7號菌株在NA培養基28℃條件下培養24 h，用滅菌移菌環移菌苔，接種在塊莖上，培養48 h，觀察馬鈴薯薯塊腐敗情況。

1.2.4 煙草過敏反應

1.2.5 細菌學性狀 病原細菌個體形態、染色反應、培養性狀、生理生化測定等項目，主要參照“植病研究方法”、“植物病原細菌的分類和鑒定”等方法進行[2～6]。

2 結果與分析

2.1 病原菌分離和致病性測定

從山東省聊城市莘縣采集和提供的樣品中共分離純化獲得7個菌株，依次編號為SEC1～SEC7。致病性測定結果表明，SEC1～SEC7菌株針刺甜瓜20 h 后出現水漬狀腐爛，在接種發病果實上再分離到和接種細菌菌落一樣的細菌。馬鈴薯軟腐試驗48 h，均引起馬鈴薯薯塊腐敗。煙草過敏反應測定，在煙草上引起過敏性壞死反應。

2.2 病原菌鑒定

2.2.1 細菌形態及染色反應 供試7個菌株菌體呈短桿狀，兩端鈍圓，大小為（0.5～1） μm×（1～3.2）μm。采用透射電鏡負染技術觀察到多根周生鞭毛（圖1），無芽孢，革蘭氏染色呈陰性[7]。

圖1 甜瓜細菌性軟腐病的病原菌

2.2.2 培養性狀

2.2.3 生理生化性狀 馬鈴薯腐爛，煙草產生過敏性反應。氧化酶、精氨酸雙水解酶、鳥氨酸鹽脫羧酶、賴氨酸鹽脫羧酶均呈陰性，不產生吲哚，明膠液化，甲基紅等呈陰性反應。碳源利用見表2，葡萄糖、乳糖、纖維二糖、阿拉伯糖、核糖、甘露醇、七葉靈水解等均呈陽性反應。不水解淀粉，

3 結論與討論

從甜瓜病果上分離純化獲得7個菌株SEC1～SEC7。對7個供試菌株進行致病性測定，均能發病，癥狀與田間自然發病癥狀相同，煙草上產生過敏性（桔斑）反應，馬鈴薯薯塊腐敗。并從接種發病的病斑中再分離到完全相同的細菌。

7個供試菌株經室內測定均呈格蘭氏陰性反應，菌體呈短桿狀、兩端鈍圓、菌體周生鞭毛。KB培養基上菌落呈白色，不產生熒光色素，18項生理生化測定和對照菌株SEC.C-321以及文獻記載相同，可確認山東莘縣甜瓜細菌性軟腐病是由胡蘿卜軟腐歐氏桿菌胡蘿卜軟腐致病亞種[Erwinia carotovora subsp. carotovora （Jones） Bergey et al.]侵染引起的。

參 考 文 獻：

[1] 東秀珠， 蔡妙英. 常見細菌系統鑒定手冊[M]. 北京： 科學出版社，2001， 353-364.

[2] 郭書普主編. 蔬菜蟲草害原色圖譜[M]. 北京： 中國農業出版社，2005， 222.

[3] 呂佩珂， 劉文珍， 段半鎖， 等. 中國蔬菜病蟲害原色圖譜續集[M].呼和浩特：遠方出版社，1996， 74.

[4] 任欣正. 植物病原細菌的分類和鑒定[M]. 北京： 科學出版社，1992， 107-151.

[5] 王金生. 植物病原細菌學[M]. 北京： 中國農業出版社， 2000.

[6] 中國科學院微生物研究所細菌分類組. 一般細菌常用鑒定方法[M]. 北京：科學出版社，1978， 46-49.

[7] 鄭繼法. 區別格蘭氏陽性菌的簡易快速試驗[J]. 山東農業大學學報，1984， 1-2： 121-122.