高效液相色譜法測定魚、蝦和雞肉中的呋喃唑酮殘留

摘要：建立高效液相色譜（HPLC）法測定魚、蝦和雞肉中呋喃唑酮藥物殘留量的方法。色譜條件為Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）柱，流動相乙腈-0.1%磷酸水溶液（30∶70，V/V），流速1.0 mL/min，檢測波長365 nm，柱溫25 ℃。結果表明，呋喃唑酮標準溶液在0.2～5.0 ng范圍內與峰面積呈良好的線性關系（r=0.999 1），檢出限為0.2 μg/kg（S/N=3）。樣品平均加標回收率為97.7%～102.9%，RSD為1.1%～1.5%（n=6）。該方法簡單、快速、靈敏度高、重復性好，適用于魚、蝦和雞肉中呋喃唑酮的殘留分析。

關鍵詞：呋喃唑酮；藥物殘留；高效液相色譜法

中圖分類號：O657.7+2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）16-3974-03

呋喃唑酮（Furazolidone）別名痢特靈，具有殺菌能力強、抗菌譜廣等優點，曾在臨床上廣泛使用；同時作為防治傳染病，也曾被廣泛用于養殖業。但呋喃唑酮的毒副作用較強，易導致消化系統疾病、過敏反應等，目前臨床上已逐漸被淘汰。但另一方面，由于呋喃唑酮價廉易得，曾在養殖業中廣泛使用，但大劑量或長時間使用不僅對動物產生致癌、致畸、致突變等毒副作用，而且殘留量高，可危害人類健康。早在1991年，硝基呋喃類藥物就被美國FDA認定為致癌物和誘變劑，并禁止在飼料中添加。我國于2002年農業部第193號公告《食品動物禁用的獸藥及其它化合物清單》中將呋喃唑酮列為禁用藥。盡管如此，我國部分不法養殖業主仍私下濫用呋喃唑酮，進而導致肉類食品中的呋喃唑酮殘留嚴重，不僅嚴重威脅消費者健康，同時也嚴重影響了我國肉類食品的聲譽，在目前我國食品安全矛盾日益尖銳的大環境下，加強對該藥物的殘留監控具有十分迫切的現實意義。

目前，檢測呋喃唑酮的方法包括：高效液相色譜法[1-3]、分光光度法[4]、微分脈沖陰極溶出伏安法[5]、極譜法[6]、原子吸收法[7]和毛細管電泳法[8，9]等。本試驗采用高效液相色譜法-紫外檢測法測定了魚、蝦和雞肉中的呋喃唑酮殘留，以期對魚、蝦和雞肉中呋喃唑酮的殘留監控提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

魚、蝦和雞肉樣品為市售。

乙腈、甲醇為色譜純試劑（Dima公司），水為去離子水，其余試劑均為分析純。呋喃唑酮對照品（中國藥品生物制品檢定所）。

1.2 儀器

高效液相色譜儀（島津LC-10ATvp型輸液泵，島津SCL-10Avp型控制器，島津SPD-10Avp型紫外檢測器，島津LC Solution 色譜工作站）、旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）、TLD-5型低溫高速離心機（上海安亭科學儀器廠）、SB-5200型超聲波清洗機（寧波新芝科器研究所）。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱KROMASIL C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相乙腈-0.1%磷酸水溶液（30∶70，V/V），經0.45 μm濾膜，超聲脫氣，流速1.0 mL/min，檢測波長365 nm，柱溫25 ℃，進樣量20 μL。

1.3.2 對照品的制備 稱取呋喃唑酮對照品0.050 0 g，以甲醇定容于50 mL棕色容量瓶中，取該溶液1.00 mL定容于100 mL棕色容量瓶，搖勻，即得呋喃唑酮標準儲備液（10.00 μg/mL），于4 ℃保存。進樣前用流動相適當稀釋，并過0.45 μm微孔濾膜。

1.3.3 試樣預處理 稱取搗碎樣品約10.00 g，加25 mL二氯甲烷攪拌分散后浸泡15 min，超聲提取15 min，提取液轉移至無水硫酸鈉SPE柱并濾入圓底燒瓶中，殘渣分別用25 mL和15 mL二氯甲烷按上述方法各重復提取一次，提取液也轉移至無水硫酸鈉SPE柱并濾入圓底燒瓶中，再用15 mL二氯甲烷沖洗無水硫酸鈉SPE柱，吹出柱中液體，合并濾液，將濾液于45 ℃水浴條件下減壓蒸發至近干。用2.00 mL流動相和2.00 mL正己烷溶解殘渣并充分洗滌圓底燒瓶，將液體轉入離心管中，4 000 r/min離心5 min，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，再向離心管中加入2.00 mL正己烷，混勻2 min，離心，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，下層清液經氮氣吹干后定容于2.00 mL，樣液過0.45 μm微孔濾膜，待測。在整個操作過程中應避光操作。

2 結果與分析

2.1 色譜分離

試驗結果表明，不同梯度的乙腈-0.1%（V/V，下同）磷酸水溶液系統、乙腈-0.1%醋酸水溶液系統、甲醇-0.1%磷酸水溶液系統為流動相，經比較選擇，第一種流動相分離效果和重現性好，呋喃唑酮和基質中其他成分達到基線分離，樣品中其他成分對測定無干擾，理論塔板數在10 000以上，結果見圖1A。本測定方法可用于魚、蝦和雞肉中呋喃唑酮藥物殘留的含量測定。

2.2 標準曲線、線性范圍及檢出限

取呋喃唑酮標準儲備液，用流動相稀釋成濃度為0.01～2.50 μg/mL的系列對照品溶液，進樣20 μL，按色譜條件測定。對照品進樣量（X）與峰面積（Y）之間的標準曲線方程為：Y=91 716X+2 408.6，r = 0.999 1。結果表明，在0.2～5.0 ng范圍內，呋喃唑酮的質量和峰面積呈良好的線性關系。在該條件下，以S/N=3計，本法呋喃唑酮檢出限為0.02 ng，在實際樣品中呋喃唑酮檢出限為0.2 μg/kg。

2.3 精密度、穩定性和重復性試驗

取呋喃唑酮對照品溶液進樣20 μL，連續進樣6次，測定平均峰面積為91 398，RSD為0.6 %；表明儀器精密度良好。分別取魚、蝦和雞肉樣品溶液20 μL分別在0～12 h內進樣，測定呋喃唑酮的峰面積，其RSD為1.9%～2.1%，表明樣品在12 h穩定性良好。分別取同一批魚、蝦和雞肉陽性樣品按照“1.3.3”項方法平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定呋喃唑酮，外標法定量。其RSD為0.9%～1.1%（n=6），表明該方法重復性較好。

2.4 回收率試驗

稱取魚、蝦和雞肉搗碎樣品約10.00 g，各6份，分別準確加入適量體積的呋喃唑酮標準儲備液，按“1.3.3”制備供試品溶液，并進行色譜分析。加樣回收結果見表1。

2.5 樣品測定

按“1.3.3”對魚、蝦和雞等樣品進行樣品預處理，然后按上述色譜條件測定，進樣20 μL，外標法定量，結果表明，魚和雞肉中呋喃唑酮含量分別為44.6 μg/kg和453.6 μg/kg，不符合現行國家標準（食品中不得檢出呋喃唑酮），而在蝦樣品中未檢出呋喃唑酮。各樣品測定的圖譜見圖1（B～C）。

3 小結

與文獻[1-3]的測定結果比較，本方法更加靈敏，對呋喃唑酮的檢出限可達0.2 μg/kg，滿足歐盟規定出口食品中呋喃唑酮的殘留量不得超過1.0 μg/kg的檢測要求[10]。呋喃唑酮對光敏感，在動物體中代謝快速，半衰期僅數小時，除非殘留濃度很高，通常檢出原藥殘留的幾率較小。從試驗結果看，有部分樣品超標嚴重，提示相關部門應加強相關食用動物的飼養環節管理。

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