6—BA對大豆愈傷組織誘導影響的初步研究

摘要：以大豆（Glycine max）品種吉農21的胚軸、子葉、子葉節、胚根為外植體，探討了不同濃度6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）對大豆愈傷組織誘導的影響。結果表明，對于大豆無菌苗不同組織部位的外植體，MS+1.0 mg/L IAA +1.0 mg/L 6-BA 均為最佳的愈傷組織誘導培養基。

關鍵詞：大豆（Glycine max）；吉農21；6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）；愈傷組織

中圖分類號：Q813.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）16-3999-03

大豆（Glycine max）屬于蝶形花科大豆屬，別名黃豆，是古老的栽培作物之一，至今大約有四、五千年的種植歷史。我國不僅種植大豆歷史悠久，而且是栽培大豆的起源地，世界上其他國家的大豆大多是直接或間接從我國傳播出去的。大豆的組織培養研究始于20世紀60年代，但各種外植體的組織培養與再生植株都十分困難。直到80年代中后期，大豆的組織培養工作才有了突破性的進展，大豆的組織培養常用外植體包括真葉、下胚軸、子葉、子葉節、胚軸和胚等[1-9]。近年來，也有報道可以通過胚尖誘導形成再生植株[10-12]，但多數再生體系再生頻率低、重復性差，而愈傷組織再生體系與直接再生體系相比具有重復性好、出芽率高等特點。然而迄今為止，通過大豆愈傷組織途徑獲得再生植株的報道較少。本研究探討不同濃度的6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）對愈傷組織誘導的影響，篩選出愈傷組織誘導的最佳培養基，進而能建立一個高效的大豆愈傷組織遺傳轉化受體系統。

1 材料與方法

1.1 材料

大豆種子吉農21由吉林農業大學生物技術中心提供。

1.2 方法

1.2.1 種子的萌發 選取飽滿成熟的大豆吉農21的種子，用體積分數為70%的乙醇消毒30 s，再用質量分數為0.1%的升汞溶液消毒10 min，用無菌水沖洗3～5次后接種到MS基本培養基上，溫度（25±2） ℃，光照度2 000 lx條件下進行培養。

1.2.2 愈傷組織的誘導 以培養7 d后的無菌實生苗的胚軸、子葉、子葉節、胚根為外植體，分別接種于不同愈傷組織誘導的培養基中，放入黑暗條件下進行培養，20 d后統計其愈傷組織誘導情況。愈傷組織誘導培養基分別為A培養基：MS+ 1.0 mg/L IAA + 1.0 mg/L 6-BA；B培養基：MS+ 1.0 mg/L IAA + 2.0 mg/L 6-BA；C培養基：MS+ 1.0 mg/L IAA + 3.0 mg/L 6-BA。

2 結果與分析

2.1 大豆胚軸愈傷組織的誘導

取培養7 d后的無菌苗的胚軸為外植體，分別接種到A、B、C 3種培養基上，黑暗條件下培養20 d（表1）。從表1中可以看出，對于胚軸來說，A培養基的誘導效果最好，愈傷組織誘導率達到98.1%，并且形成的愈傷組織顏色呈淡黃色，比較致密，狀態良好（圖1），而其他兩種培養基上形成的愈傷組織褐化很多，可能是因為6-BA濃度過高引起的。

2.2 大豆子葉愈傷組織的誘導

取培養7 d后的無菌苗的子葉為外植體，分別接種到A、B、C 3種培養基上，黑暗條件下培養20 d（表2）。從表2中可以看出， 對于子葉來說，A培養基的誘導效果最好，愈傷組織誘導率可以達到100.0%，并且形成的愈傷組織顏色呈淡黃色，比較致密，狀態良好（圖2）。

2.3 大豆子葉節愈傷組織的誘導

取培養7 d后的無菌苗的子葉節為外植體，分別接種到A、B、C 3種培養基上，黑暗條件下培養20 d（表3）。從表3中可以看出來，對于子葉節來說，A培養基的誘導效果最好，愈傷組織誘導率可以達到97.4%，形成的愈傷組織顏色呈淡黃色，比較致密，狀態良好（圖3）。其他兩種培養基較A培養基形成的愈傷組織褐化增多，愈傷組織的生長受到阻礙。

2.4 大豆胚根愈傷組織的誘導

取培養7 d后的無菌苗的胚根為外植體，分別接種到A、B、C 3種培養基上，黑暗條件下培養20 d（表4）。從表4中可以看出，對于胚根來說，A培養基的誘導效果最好，愈傷組織誘導率可以達到68.2%，形成的愈傷組織顏色呈淡黃色，比較致密，狀態良好（圖4）。其他兩種培養基較A培養基形成的愈傷組織數目明顯減少，褐化嚴重，愈傷組織的生長受到嚴重阻礙，可能由于根部對于細胞分裂素濃度更為敏感所致，高濃度的細胞分裂素抑制了根部愈傷組織的形成。

3 小結與討論

在愈傷組織的誘導過程中，生長素和細胞分裂素的配合使用均能誘導4種外植體產生愈傷組織。不同的外植體對于激素的反應水平不同，胚根對細胞分裂素的濃度變化更為敏感，子葉，子葉節和胚軸則不敏感，高濃度的植物生長調節劑均能使外植體出現褐化。本研究以吉農21的無菌苗不同部位為外植體，利用不同培養基進行培養。結果表明，MS+1.0 mg/L IAA+1.0 mg/L 6-BA為最佳的愈傷組織誘導培養基，與李大瑋[13]的結論基本一致。

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