銀杏葉及野生榛蘑中硒的分布研究

摘要：探討了銀杏（Ginkgo biloba）葉及野生榛蘑（Armillaria mellea）中不同溶解態硒的含量分布。比較了2種植物在熱水、0.1 mol/L 的醋酸溶液、鹽酸溶液、EDTA溶液以及氯化鎂溶液中硒的浸出率。結果表明，浸提能力的大小不僅取決于浸提的方法，而且還受到浸提溶劑的極性以及浸提時間等因素影響。

關鍵詞：分子熒光法；銀杏（Ginkgo biloba）葉；榛蘑（Armillaria mellea）；硒

中圖分類號：0657 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）18-4494-03

近年來，銀杏（Ginkgo biloba）被報道具有多種功能成分，其功效分析一直是國內外研究熱點。野生榛蘑（Armillaria mellea）可作調味品或配菜用，其菌絲體富含蜜環菌香豆素和麥角甾醇等化合物，榛蘑發酵制劑對膽囊炎和肝炎療效顯著[1，2]。硒是一種準金屬元素，屬于第ⅥA族元素，地殼中硒的豐度僅為0.05～0.09 μg/g。近年來，硒在治療癌癥、心血管病、糖尿病等疾病的功效引起了人們的重視[3-5]。硒存在的形態不同，其化學結構及理化性質也不同。硒在植物中主要以無機硒[3]以及有機硒形態存在[4]，其中有機硒包括硒蛋白、硒代半氨酸、硒代胱氨酸、硒多糖等，其結構性質的差異是造成硒在不同溶劑中溶解度不同的主要原因[6-8]。本試驗通過分析不同溶劑對銀杏葉及野生榛蘑的浸提效果，分析硒的溶解情況，為人體補硒提供借鑒和參考。

1 材料與方法

1.1 材料

銀杏葉采自遼寧大學崇山校區（沈陽），野生榛蘑采自長白山。

光譜純硒（Ⅳ）粉購于國家環保總局標準樣品研究所，2，3-二氨基萘購于Acros Organics公司，優級純鹽酸和硝酸購于沈陽化學試劑廠，去離子水由實驗室自制。

1.2 儀器

Cary Eclipse熒光分光光度計（美國VARIAN公司）；ESJ120-4電子天平（沈陽龍騰電子稱量儀器有限公司）；紅外快速干燥箱（沈陽市皇姑區長江五金機電廠）；SHZ-2000型雙配套循環水式多用真空泵（河南省鞏義市英峪予華儀器廠）；SYZ-B型石英亞沸高純水蒸餾器（江蘇金壇市宏華儀器廠）。

1.3 方法

1.3.1 硒標準儲備液的配制 精確稱取100.0 mg光譜純硒粉，溶于少量硝酸中，加2 mL高氯酸，置沸水浴中加熱3.5 h，冷卻后加入8.4 mL鹽酸，再沸水浴2 min，以0.1 mol/L鹽酸稀釋至1 L，此儲備液Se（IV）濃度為100 μg/mL。

1.3.2 硒標準工作溶液的配制 將Se（Ⅳ）儲備液用0.1 mol/L鹽酸稀釋，配制0.05 μg/mL硒溶液，于-4 ℃保存。

1.3.3 2，3-二氨基萘溶液的配制 稱取100 mg 2，3-二氨基萘于帶蓋錐形瓶中，加入100 mL 0.1 mol/L鹽酸，待溶解后振搖15 min。加20 mL環己烷，繼續振搖，分液，收集下層溶液于棕色瓶中，然后加高度約為1 cm的環己烷覆蓋表面，于-4 ℃保存。整個操作避光配制。

1.3.4 硒的工作曲線 準確吸取硒標準使用液 0.0、0.2、1.0、2.0、4.0 mL，加水至5 mL，再分別加入20 mL EDTA混合液，用6 mol/L鹽酸調pH值至1.5～2.0。以下步驟在暗室進行：加入3 mL 2， 3-二氨基萘試劑，混勻，沸水浴5 min，取出立即流水冷卻，然后加3 mL環己烷，振搖4 min，將全部溶液移入分液漏斗，待分層后棄去水層，有機相轉入比色皿中，小心勿混入水滴，于λex=376 nm，λem=520 nm處測定苤硒腦的熒光強度。

1.3.5 樣品測定 稱取銀杏葉粉末樣品及榛蘑粉末樣品各1 g，設3份平行，向其加入不同的浸提劑，分別于沸水浴中浸提不同時間，然后將浸提液抽濾，并參照1.3.4法測定硒含量，計算硒浸出率。

1.3.6 銀杏葉和山榛蘑中硒的測定 分別準確稱取1.000 0 g銀杏葉粉和山榛蘑粉樣品于磨口錐形瓶中，加10 mL濃硫酸，樣品濕潤后，再加20 mL混合酸（硝酸∶高氯酸=2∶1，V/V）放置過夜。次日于砂浴上逐漸加熱，當激烈反應發生后（溶液變無色），繼續加熱至產生白煙，溶液逐漸變成淡黃色，消解反應完全，離心，取上清液，移入100 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L HCl溶液定容。準確移取4.0 mL混合酸于磨口錐形瓶中，并加入20 mL EDTA混合液，用氨水溶液（濃氨水∶純水=1∶1，V/V）調至淡紅橙色。同時設一組空白對照，并參照1.3.4法測定，求出△F值。

1.3.7 銀杏葉多糖和山榛蘑多糖中硒的測定 采用水煮醇沉方法制備銀杏葉多糖和野生榛蘑多糖[2]，分別準確稱取0.100 0 g銀杏葉多糖和野生榛蘑多糖，置入聚四氟乙烯消化罐中，加入3 mL硝酸溶液，升溫180 ℃，消化4 h，冷卻后，將消解液定容至50 mL，采用電感耦合等離子體-質譜測定多糖中硒的含量。

2 結果與討論

2.1 標準曲線結果

熒光強度與硒含量在0～0.083 3 μg/mL之間呈良好線性關系，標準曲線回歸方程為：y=2 024.9x+7.129 5，R2=0.999 1。

2.2 銀杏葉和山榛蘑中硒的測定

銀杏葉和山榛蘑中硒含量的測定結果見表1。從表1可知，銀杏葉和野生榛蘑中硒的含量分別為0.771 μg/g和2.856 μg/g。

2.3 不同提取液對銀杏葉中硒的提取效果分析

分別以熱水、0.1 mol/L鹽酸溶液、醋酸溶液、EDTA溶液和氯化鎂溶液作為浸提劑，研究不同浸提劑、浸提時間對溶解態硒浸提效果的影響，銀杏葉浸提結果見圖2。由圖2可知，硒的溶出量隨著浸提時間增加而增加，但在醋酸溶液中例外；EDTA溶液的浸出量普遍偏低；氯化鎂溶液浸泡24 h后的量隨著時間增加而增大。

2.4 不同提取液對山榛蘑中硒的提取效果分析

以熱水、0.1 mol/L的鹽酸溶液、醋酸溶液、EDTA溶液和氯化鎂溶液作為浸提劑，山榛蘑中溶解態硒浸提結果見圖3。結果表明，野生榛蘑水溶態硒和交換態硒均隨著浸提時間增加而增加，同樣，EDTA浸出的絡合態硒量較小。

2.5 銀杏葉多糖和山榛蘑多糖中硒的測定

銀杏葉多糖和山榛蘑多糖中硒的含量分別為0.998 6 ng/g（n=4）和0.488 2 ng/g（n=4）。

2.6 銀杏葉和榛蘑中硒的浸提率

以熱水、0.1 mol/L 鹽酸溶液、醋酸溶液、EDTA溶液和氯化鎂溶液作為浸提劑，銀杏葉中硒的浸提結果見表2。從表2可知，除了醋酸溶液外，其他浸提劑隨著浸提時間增加，硒浸出率增大，但各種浸提劑條件下的硒浸出率均低于50%。結果表明熱水浸泡是一種簡便的補硒方法。

山榛蘑中硒的浸提結果見表3。從表3可知，在同樣浸提條件下，山榛蘑中硒的浸出率較低。

3 結論

研究結果表明，在相同浸提條件下，0.1 mol/L鹽酸溶液及0.1 mol/L醋酸溶液對硒的浸提率高，且大部分浸提劑對硒的浸提效果都與浸提時間成正比，但由于醋酸溶液易揮發，隨著時間的增加，其浸提效果卻與之相反。浸提劑浸提能力大小的順序為：0.1 mol/L醋酸溶液>0.1 mol/L鹽酸溶液>0.1 mol/L氯化鎂溶液>熱水>0.1 mol/L EDTA溶液。浸提能力大小的時間順序為：24 h>12 h>8 h（醋酸溶液除外）。從熱水的浸提結果可知，在加熱條件下，部分Se可從植物體中浸提出來，其水溶態硒含量高，表明熱水浸提榛蘑和銀杏葉是人類天然補硒的好途徑。

參考文獻：

[1] 許愛華，陳華圣，夏葉玲，等.銀杏外種皮多糖對荷瘤小鼠免疫功能的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，1996，7（3）：22-24.

[2] 張渝陽，王曉寧，周 蕾，等. 山榛蘑中多糖的提取與測定[J]. 遼寧大學學報（自然科學版）， 2006，33（4）：331-333.

[3] YANG K L， JIANG S J. Determination of selenium compounds in urine samples by liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry with an ultrasonic nebulize [J]. Anal Chim Acta，1995，307（1）：109-115.

[4] GAMMELGAARD B， JONS O. Determination of selenite and selenate in human urine by ion chromatography and inductively coupled plasma mass spectrometry[J]. Analytical Atomic Spectrometry， 2000，15（8）：945-949.

[5] HUANG K X， LIU Q， XU H B. Antioxidation of selenoproteins and discovery of 21st nature amino acid[J]. Chinese Journal of Inorganic Chemistry，2008，24（8）：1213-1218.

[6] SPALLHOLZ J E， PALACE V P， REID T W. Methioninase and selenomethionine but not Se-methylselenocysteine generate methylselenol and superoxide in an vitro chemiluminescent assay： implications for the nutritional carcinostatic activity of selenoamino acids[J]. Biochemical Pharmacology，2004，67（3）：547-554.

[7] LIU H N， WEN L X， TAN H. Research progress on pharmacological activity of selenium polysaccharide[J]. China Pharmaceuticals，2010，19（5）：1-3.

[8] FAN C D， JIANG J， YIN X， et al. Purification of selenium-containing allophycocyanin from selenium-enriched spirulina platensis and its hepatoprotective effect against t-BOOH-induced apoptosis[J]. Food Chemistry，2012，134（1）：253-261.