蝴蝶蘭組培快繁技術(shù)研究

摘 要：以蝴蝶蘭的花梗為外植體，研究蝴蝶蘭快繁方法。結(jié)果表明，花梗外植體在培養(yǎng)基MS+BA3mg/L+NAA1mg/L上培養(yǎng)15d后產(chǎn)生幼芽；叢生芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+BA5mg/L+NAA0.1mg/L，增殖率為2.07%；生根誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為1/2MS+NAA1mg/L+IBA1mg/L，生根率可達(dá)100%。

關(guān)鍵詞：蝴蝶蘭；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中圖分類號(hào) Q949.71+8.43 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2013）12-23-02

蝴蝶蘭（Phalaenopsis amabilis Bl.）是蘭科蝴蝶蘭屬多年生名貴花卉，于1750年發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)70多個(gè)原生種，原產(chǎn)馬來西亞等熱帶地區(qū)，大多數(shù)產(chǎn)于潮濕的亞洲地區(qū)，在中國臺(tái)灣和泰國、菲律賓、馬來西亞、印度尼西亞等地都有分布，其中以臺(tái)灣出產(chǎn)最多，因花形似蝶而得名。其株型美觀、枝葉繁茂，花朵碩大、花色鮮艷，而且花期特別長，一般為2～3個(gè)月，最長可達(dá)半年，適于家庭擺設(shè)或作切花用于花籃、花束等，在熱帶蘭中素有“蘭花皇后”的美譽(yù)，有較高的觀賞和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，深受國內(nèi)外花卉市場(chǎng)的歡迎。但是，由于蝴蝶蘭是單莖性氣生蘭，植株很少發(fā)育側(cè)枝，很難采用常規(guī)分株方式進(jìn)行無性繁殖，其種子也不含胚乳或其他組織，在自然條件下萌發(fā)率極低，因此無法利用播種方式進(jìn)行有性繁殖，而采用組織培養(yǎng)方法進(jìn)行種苗繁殖是目前蝴蝶蘭大規(guī)模生產(chǎn)的唯一途徑。

近年來，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了大量研究，蝴蝶蘭組織培養(yǎng)誘導(dǎo)原球莖的外植體有莖尖、葉片、花梗腋芽、花梗節(jié)間切段等誘導(dǎo)類原球莖，進(jìn)而誘導(dǎo)分生苗實(shí)現(xiàn)快繁。

蝴蝶蘭的繁育方法有2種：叢生芽和原球莖增殖。原球莖增殖容易出現(xiàn)變異，采用叢生芽增殖能夠很好地保持原有品種的特性，還可利用花梗腋芽、葉片等作為外植體接種在不同培養(yǎng)基上進(jìn)行離體培養(yǎng)，再利用誘導(dǎo)產(chǎn)生的不定芽的莖尖進(jìn)行莖尖培養(yǎng)，可得到大量的原球莖狀體。由于莖尖作外植體誘導(dǎo)原球莖誘導(dǎo)率高，但損傷母株，而且還會(huì)有不同程度的污染率，故利用腋芽萌發(fā)的不定芽的幼葉為外植體，雖然誘導(dǎo)率稍低，但大大降低了污染率。

大量研究表明，在蝴蝶蘭進(jìn)行組織培養(yǎng)過程中，選取的外植體不同，原球莖的誘導(dǎo)率也有很大差異，其中幼葉、莖尖、花梗腋芽是蝴蝶蘭原球莖誘導(dǎo)的較佳外植體，葉片和根段的誘導(dǎo)效果最差。但是，采用莖尖作外植體會(huì)對(duì)植株造成損傷，因此蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)通常以幼葉或花梗腋芽為外植體。蝴蝶蘭組織培養(yǎng)采用的基本培養(yǎng)基有MS、1/2MS、VW、B5、KC、花寶及其改良型等。

通過組織培養(yǎng)，在短期內(nèi)獲得大量幼小植株，是經(jīng)濟(jì)有效的快速繁殖方法，也是工廠化育苗的重要途徑。研究蝴蝶蘭快速繁殖的方法、生長發(fā)育規(guī)律及其綜合栽培技術(shù)，有利于我國花卉業(yè)向高檔次、高效益方向發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料 選取白花紅心品種健壯無病蟲的帶節(jié)花梗。蝴蝶蘭組織培養(yǎng)的外植體有莖尖、莖段、葉片、花梗腋芽、花梗節(jié)間、根尖等，各部位均可誘導(dǎo)成功，只是難度高低不一。蝴蝶蘭是單莖性熱帶氣生蘭，只有1個(gè)莖尖，如果直接從開花植株取得莖尖或莖段，造成整株浪費(fèi)；以葉片或根尖作外植體，材料豐富，但誘導(dǎo)周期長、難度大；用花梗腋芽或花梗節(jié)間作外植體，容易誘導(dǎo)，外植體表面滅菌成功率高，是最合適的外植體取樣部位。

1.2 方法 取材前2～3周，把母株置于溫室內(nèi)培養(yǎng)，不要噴水。在接種前選擇健壯無病的帶節(jié)花梗剪下，用自來水沖洗干凈，將花梗剪成長約2～3cm帶腋芽的切段，用無菌吸水紙或紗布吸干水分，帶入無菌操作室按無菌操作程序進(jìn)行滅菌和接種，再用70%的酒精浸30s后，在超凈工作臺(tái)上用0.1%HgCl2溶液消毒8min、12min、16min，無菌水沖洗4～5次，切取帶1～2個(gè)芽點(diǎn)的花梗接種于MS+BA3的培養(yǎng)基上，可用腋芽萌發(fā)為叢生芽。初代培養(yǎng)誘導(dǎo)溫度為25～28℃，光照以1 800～2 200lx為宜。20d后統(tǒng)計(jì)不同時(shí)間處理對(duì)外植體污染率及死亡率的影響。

外植體的誘導(dǎo)與繼代增殖均以MS為基本培養(yǎng)基，在繼代增殖過程中附加不同濃度BA、NAA的激素配比；生根培養(yǎng)設(shè)置了1/2MS、1/3MS、1/4MS處理，同時(shí)附加香蕉泥100g/L，活性炭1g/L和不同濃度的NAA、IBA。所有培養(yǎng)基均添加蔗糖25g/L或30g/L；瓊脂6g/L；pH5.3。培養(yǎng)溫度25～27℃；每天光照10～16h；光照強(qiáng)度為1 500lx。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒時(shí)間對(duì)無菌體系建立的影響 從表1可以看出，蝴蝶蘭外植體隨消毒時(shí)間的延長，污染率得到了有效的控制，在12～16min內(nèi)，可將污染率控制在10%～20%，成功率達(dá)60%。但同時(shí)，外植體死亡率也不斷增加，其中16min的死亡率高達(dá)60%，而8min的死亡率僅為10%。綜上所述，筆者認(rèn)為，蝴蝶蘭外植體以12min的消毒時(shí)間最佳。

2.2 花梗腋芽的培養(yǎng) 將消毒好的外植體切成帶1～2個(gè)芽點(diǎn)的花梗接在啟動(dòng)培養(yǎng)基MS+BA3mg/L+NAA1mg/L+蔗糖30g/L上進(jìn)行培養(yǎng)?；ü?cè)芽在此培養(yǎng)基上培養(yǎng)7～10d后腋芽突起膨大，經(jīng)過15d后腋芽萌發(fā)，可達(dá)1cm以上的不定芽。

2.3 不同BA濃度對(duì)叢生芽增殖的影響 叢生芽的分化與增殖是實(shí)現(xiàn)蝴蝶蘭工廠化的關(guān)鍵。在一定范圍內(nèi)，不同激素組合可使誘導(dǎo)出來的腋芽分化成叢生芽。在試驗(yàn)過程中筆者觀察到NAA的誘導(dǎo)率比IAA、IBA高，BA的誘導(dǎo)率比KT高。從表2可以看出，增殖率隨著BA濃度的上升而增加，但是，BA濃度并非越高越好，高濃度的BA會(huì)使芽長勢(shì)細(xì)弱。本試驗(yàn)的最佳分化培養(yǎng)基為MS+BA5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L。

2.4 不同無機(jī)鹽的營養(yǎng)對(duì)生根的影響 影響蝴蝶蘭無根苗生根的重要因素是無機(jī)營養(yǎng)元素。本試驗(yàn)比較了1/2MS、1/3MS和1/4MS等處理，結(jié)果見表3。無機(jī)營養(yǎng)較多的生根率明顯高于含量較低的處理；另外，生根壯苗需要較豐富的碳水化合物，因而蔗糖濃度對(duì)生根有顯著影響，生根率隨蔗糖濃度的提高而升高，同時(shí)添加香蕉泥提高了培養(yǎng)基總糖含量，從而也可以提高生根率并促進(jìn)生根苗的生長。本試驗(yàn)的最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA1mg/L+IBA1mg/L+蔗糖25g/L，生根率可達(dá)100%。

2.5 試管苗的移栽 當(dāng)試管苗具有3～4片葉、2～3條粗壯的根時(shí)，即可進(jìn)行移栽。南方地區(qū)可在3～10月進(jìn)行，以4～6月或9～10月移栽效果為好。先將試管苗移出實(shí)驗(yàn)室，打開瓶蓋，放置于通風(fēng)、明亮的常溫房間煉苗，每天早、中、晚各噴水1次，保證足夠的濕度。3d以后，用鑷子將小苗輕輕夾出培養(yǎng)瓶，洗凈根部附著的培養(yǎng)基?？上扔? 500倍的多菌靈藥液浸泡5～10min，然后種植于椰糠基質(zhì)中，環(huán)境溫度保持25～28℃，濕度保持在80%～90%，防陽光直射。當(dāng)新葉長出、新根伸長時(shí)，每周1次葉面噴施0.3%～0.5%KH2PO4，成苗率可達(dá)65%以上。

3 結(jié)論

在本試驗(yàn)中，蝴蝶蘭外植體無菌體系的建立取決于消毒時(shí)間，8min與16min的消毒效果都不甚理想，而以12min的成功率較高。隨著消毒時(shí)間的延長，外植體死亡數(shù)也不斷增加，說明長時(shí)間用升汞作為消毒劑對(duì)蝴蝶蘭幼嫩莖段有很強(qiáng)的殺傷力。

由于蝴蝶蘭這個(gè)名貴品種對(duì)移栽環(huán)境要求的特殊性，因此，迄今為止，筆者仍未能獲得蝴蝶蘭試管苗移栽較為成功的經(jīng)驗(yàn)。對(duì)于其移栽試驗(yàn)還有待于進(jìn)一步的研究與探討。

參考文獻(xiàn)

[1]劉青林，馬祎，鄭玉梅，等.花卉的組織培養(yǎng)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

[2]韋三立.花卉組織培養(yǎng)[M].北京：中國林業(yè)出版社，2000.

（責(zé)編：徐世紅）