烏司他丁和血必凈抑制早期內毒素血癥大鼠炎癥反應的對比研究

[摘要] 目的 研究烏司他丁（ulinastatin，UTI）抑制早期內毒素（LPS）血癥大鼠的炎癥反應是否優于血必凈（Xuebijing，XBJ）。 方法 通過鼠尾靜脈注射LPS復制LPS血癥大鼠模型。54只SD大鼠隨機分為LPS組、（LPS+UTI）組、（LPS+XBJ）組，每組18只，分別在用藥后8 h、24 h、48 h時點隨機快速處死6只大鼠，取心臟血分離血清，用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法測定白細胞介素-1（IL-1）、白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）。 結果 三組中各時間點TNF-α、IL-6、IL-1分別比較差異均有統計學意義（P < 0.05）；（LPS+UTI）組在8 h時間點與（LPS+XBJ）組比較差異有統計學意義（P < 0.05），在24 h、48 h時間點差異無統計學意義（P > 0.05）。 結論 UTI和XBJ均能有效抑制LPS大鼠的炎癥反應；UTI在炎癥早期抑制炎癥反應優于XBJ。

[關鍵詞] 烏司他丁；血必凈；炎癥反應；白細胞介素-1；白細胞介素-6；腫瘤壞死因子-α

[中圖分類號] R459.7 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）23-0001-02

革蘭陰性菌（G-）是最常見的致病菌，內毒素（LPS）是G-菌感染的主要致病因子， 在微生物感染的早期就開始發揮作用。LPS通過受體結合后，觸發機體產生一系列炎癥級聯反應，在炎癥早期就釋放大量早期炎癥介質如TNF-α、IL-1β等，故抑制炎癥因子的釋放有重要的作用，目前大量研究表明烏司他丁（UTI）和血必凈（XBJ）均具有抑制炎癥反應作用，本研究通過檢測早期炎癥因子TNF-α、 IL-1及IL-6，從而探討UTI抑制LPS血癥大鼠的炎癥反應效果是否優于XBJ，旨在為臨床治療LPS血癥選藥提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

成年SPF級雄性SD大鼠54只，體重220～250 g，周齡8～10周，隨機分為LPS組、UTI治療組和XBJ治療組，每組18只，大鼠由廣東省醫學實驗動物中心提供。

1.2 主要試劑

LPS（美國，Sigma公司）；XBJ（天津紅日藥業股份有限公司，批號09091101）；UTI （廣東天普生化醫藥股份有限公司，批號02091002）； IL-1、IL-6、TNF-α（美國，Biosource公司）。

1.3 方法

使用LPS（5 mg/kg，用NS稀釋至1 mL）鼠尾靜脈注射建立LPS血癥大鼠模型[1]。分別用NS（2 mL）、TUI（20 000 U/kg，NS稀釋至2 mL）[2]、XBJ（4mL/kg，NS稀釋至2 mL）[3]腹腔注射相應組別的大鼠，每天2次，觀察大鼠用藥后活動、進食、豎毛、眼球凹陷、呼吸抑制等反應，每組分別在用藥后8 h、24 h、48 h時點隨機取6只大鼠并行乙醚吸入麻醉后處死大鼠，取心臟血，分離血清，測定IL-1、IL-6、TNF-α的值，并記錄大鼠死亡情況。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 各組大鼠一般觀察指標

NS對照組大鼠，正常活動及進食；LPS組大鼠注射LPS后8 h精神萎靡，堅毛，不進食，活動減少，體溫升高，呼吸急促，對刺激反應差；12 h后，呈嗜睡狀態，倦怠，卷曲，活動明顯減少，多數出現解稀便，至24 h達到高峰；48 h后漸恢復活動，少許進食水。（LPS+UTI）組和（LPS+XBJ）組大鼠注射LPS后的一般情況和高峰與LPS組相似，但程度較輕，24 h后活動及進食慚恢復，但是（LPS+UTI）組比（LPS+XBJ）組明顯。

2.2 TNF-α、IL-6、IL-1水平比較

（LPS+UTI）組、（LPS+XBJ）組及LPS組在不同時段的TNF-α、IL-6、IL-1水平比較，差異有統計學意義（P < 0.05），提示炎癥反應為動態變化，為早期監測的必要性提供理論依據；（LPS+UTI）組、（LPS+XBJ）組的TNF-α、IL-6、IL-1水平在注射后8 h、24 h、48 h比LPS組降低，差異具有統計學意義（P < 0.05），提示UTI、XBJ治療可降低TNF-α、IL-6、IL-1水平；UTI組的TNF-α、IL-6、IL-1水平在注射后8 h比XBJ組降低更多，差異具有統計學意義（P < 0.05），在注射后24 h、48 h，差異無統計學意義（P > 0.05），提示UTI在早期治療比XBJ效果好。見表1～3。

3 討論

TNF-α在白細胞介素的合成、增強炎癥反應等具有啟動、觸發作用[4]，經UTI干預后的缺血心肌大鼠動物模型的心肌TNF-α的表達明顯減少[5]。UTI還能降低重癥急性胰腺炎患者血清TNF-α、IL-6的水平[6]。LPS可上調IL-6的表達，UTI可抑制LPS所致的IL-6過度表達[7]，還可降低泌尿系膿毒性休克患者血清IL-6水平，改善泌尿系膿毒性休克的病情[8]。UTI使鼠爆發性肝衰竭模型動物的TNF-α等促炎因子的分泌減少，從而大鼠的肝臟損傷減輕[9]。UTI可減輕ALI過程中炎癥介質對內皮細胞骨架的影響，改善內皮細胞的通透性[1]，對LPS所致新生大鼠急性肺損傷也有保護作用，可能是通過抑制肺組織MMP-2的表達水平實現的，且抑制作用呈劑量依賴性[10]，其機制可能通過調節凋亡相關調控基因Bcl-2和Bax的不同表達發揮作用[11]。

XBJ可明顯抑制血漿LPS產生，下調炎癥介質TNF-α、IL-1及IL-6 水平[12]，減輕百草枯中毒大鼠的炎性反應[13]，能有效改善SIRS癥狀，調控炎癥反應過程[14]，也能有效抑制重度急性有機磷農藥中毒患者的炎癥反應[15]。

本研究粗略探討了UTI與XBJ抑制內毒素血癥大鼠炎癥反應的療效，在以后的科研中將增加樣本量，改變用藥劑量，增加測定值的時間點，以便更深入研究兩種藥物的療效。

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（收稿日期：2013-06-07）