系統性紅斑狼瘡患者血清B淋巴細胞刺激因子與BR3表達的相關性研究

[摘要] 目的 研究系統性紅斑狼瘡（SLE）患者血清B淋巴細胞刺激因子水平與BR3表達，以探討其發病機制，為臨床治療提供依據。 方法 將SLE患者40例作為病例，健康對照40例，檢測SLE患者和正常對照血清BLyS和IL-1、BR3水平，并與患者臨床活動性評分（SLEDAI）比較。 結果 SLE組BLyS、IL-1、BR3水平（123.79±68.80、123.79±68.80、123.79±68.80）μg/L和對照組（64.25±13.76、64.25±13.76、64.25±13.76）μg/L比較差異有統計學意義（P < 0.01）；SLE患者SLE評分與BLyS、IL-1、BR3之間存在正性相關性關系（r = 0.783，P = 0.007；r = 0.654，P = 0.034；r = 0.875，P = 0.002）；BR3水平與BLyS之間存在正性相關性關系（r = 0.945，P = 0.000）；與IL-1之間不存在相關性關系（r = 0.324，P = 0.664）。 結論 BLyS、IL-1可以作為SLE病情診斷的客觀指標；BlyS對B淋巴細胞的調控可能是通過BR3途徑實現的。

[關鍵詞] 系統性紅斑狼瘡；BLyS；BR3

[中圖分類號] R593.24+1 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）14-0039-02

系統性紅斑狼瘡（SLE）臨床表現多樣，主要以多組織、多系統、多器官損傷為主，發病以女性為主，大約為男性8倍以上。其發病機制復雜，可涉及到抗原負荷增多、B淋巴細胞抑制缺陷、B淋巴細胞活化過度、B淋巴細胞抗體產生過多、免疫失耐受、T細胞功能亢進等。B細胞被認為主要參與到發病過程中，激活和分泌針對自身抗原的抗體。B淋巴細胞刺激因子（BLyS）又稱為B細胞活化因子（BAFF），多表達于單核細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞及激活的中性粒細胞等，通過誘導B淋巴細胞增殖、分化和分泌，增強體液免疫應答，其過表達可導致小鼠出現SLE樣表現[1]。BLyS主要通過與受體結合發揮生物學作用，受體3（BLyS receptor 3）又稱為BAFF受體（BAFF receptor，BAFF-R），是BLyS最主要和特異性受體，是介導BLyS依賴性B細胞信號的主要受體，其表達直接影響B細胞的成熟和分泌，對SLE患者的癥狀有直接關系[2]。本研究通過對40例SLE患者血清BLyS水平和BR3受體水平進行分析，研究二者直接關系，并探討其水平與癥狀直接的相關性，為SLE的發病尋找實驗證據支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象共40例，均為2009年3月～2010年2月在本院風濕免疫科就診的住院患者，其中男5例，女35例，男女比例1∶7，年齡15～67歲，平均（35.7±12.3）歲。所有患者均符合美國風濕病協會（ARA）修訂的SLE診斷標準，并排除嚴重感染、惡性高血壓和妊娠哺乳期患者。另取正常對照40例，均來自我院體檢科健康成年人，男5例，女35例，男女比例1∶7；年齡18～65歲，平均（34.9±11.9）歲。兩組在年齡、性別構成上差異無統計學意義（P > 0.05）。

1.2 研究方法

以ELISA檢測SLE患者和正常對照血清BlyS和IL-1表達水平，RT-PCR檢測BR3水平，并與患者臨床活動性評分（SLEDAI）比較，研究兩組差異。

1.2.1 儀器與試劑 酶標光度儀（美國Sigma公司）；全自動生化分析儀（日本SANYO）；BLyS、IL-1試劑盒（德國TECAN公司）；檸檬酸鹽緩沖液、PBS緩沖液等（美國RD公司）；722分光光度計（武漢萬達實驗儀器公司）；RT-PCR儀（美國MJ公司）。

1.2.2 實驗方法 清晨、空腹抽取SLE患者和對照肘靜脈血10 mL，5 mL按說明書進行ELISA實驗，其余密度梯度離心，分離外周單個核細胞，進行RT-PCR。引物長度519 bp，上游5’-GGAAGACCCAGGAACCAC-3’，下游5’-AAGGCAAGCACACCAAA-3’，反應產物以2%瓊脂糖凝膠分離，EB染色定量。

1.3 統計學分析

所獲數據均錄入到SPSS19.0軟件中，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，方差齊時行t檢驗，方差不齊進行校正的t檢驗；計數資料按實際發生數表示，SLEDAI評分與BLyS、IL-1水平關系比較采用Spearman相關性分析；BR3與BLyS、IL-1水平關系比較采用Pearson相關性分析。P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SLE組和對照組BLyS、IL-1、BR3比較

兩組比較BLyS（μg/L）、IL-1（ng/L）、BR3（μg/L）差異均有統計學意義（P < 0.01）。見表1.

2.2 SLE評分與BLyS之間關聯性分析

SLE患者SLE評分與BLyS之間存在正性相關性關系（r = 0.783，P = 0.007）；與IL-1之間存在正性相關性關系（r = 0.654，P = 0.034）；與BR3之間存在正性相關性關系（r = 0.875，P = 0.002）。

2.3 BR3水平與BLyS之間關聯性分析

SLE患者BR3水平與BLyS之間存在正性相關性關系（r = 0.945，P = 0.000）；與IL-1之間不存在相關性關系（r = 0.324，P = 0.664）。

3 討論

SLE是一種自身免疫性疾病，主要臨床表現為貧血、WBC和血小板減少等。在抑制BLyS的小鼠中可以見到成熟B細胞減少，體內免疫球蛋白水平降低；而在過度表達BLyS的小鼠中可以看到B細胞數量增加，免疫球蛋白升高，自身抗體效價升高、免疫復合物升高、免疫球蛋白沉積等，出現嚴重的紅斑狼瘡樣病變。使用BLyS拮抗劑治療有效[3]，因此，BLyS被認為是SLE發病的關鍵環節，在SLE的發病中占有重要地位。我們研究也發現，BLyS水平在患者中明顯高于對照，且與患者SLEDAI評分呈現一致性，這與其他學者研究結果基本一致[4]，說明BLyS完全可以作為SLE病情診斷的客觀指標，能夠反映患者病情的嚴重程度，采取針對BLyS的B細胞介導的自身免疫性疾病的拮抗阻斷治療可能有效。

細胞因子在免疫細胞的成熟、分化上起到重要作用[5，6]，本次研究發現IL-1水平在患者和非患者中差異明顯，說明SLE患者炎性因子表達活躍，同時發現SLEDAI評分與IL-1呈現正相關關系，推測BLyS影響機體炎性因子分泌，炎性因子又導致機體出現臨床癥狀。也有學者研究發現IL-1可以增強BLyS的表達，且這種增強有時間依賴性[7]，二者之間呈現反饋性增強。因此可以IL水平作為病情和預后診斷的指標之一。

在BLyS的三種受體中，BCMA主要對延長抗體分泌和骨髓漿細胞存活起作用，又被稱為“孤兒受體”；TACI則調節B細胞功能，而BR3是BLyS的特異性受體，介導依賴性B細胞信號。動物實驗認為BLyS對機體的調節可能是通過BR3途徑實現，當給予BR3融合蛋白結合BLyS從而阻斷刺激因子與B細胞結合時，B細胞的增殖和分化也受到抑制。也有學者發現重組BR3蛋白可以協同抗CD3抗體，刺激T細胞分泌細胞因子[8]，在B細胞發育成熟中起到主要作用。本研究發現SLE患者BR3遠遠高于對照，且與BLyS水平呈現正相關關系，進一步證實了BLyS對B淋巴細胞的調控可能是通過BR3途徑實現的，臨床可以嘗試通過給予某些BR3融合蛋白來阻斷BLyS的生物學作用以治療SLE。

[參考文獻]

[1] 陳恒悅，王暢，肖黎明. B淋巴細胞刺激因子家族相關分子在系統性紅斑狼瘡治療中的作用[J]. 醫學研究生學報，2010，23（11）：1205-1206.

[2] Wallance DJ，Stohl W，Furie RA，et al. A phase II， randomized， double-blind， placebo-controlled， dose-ranging study of belimumab in patients with active systemic lupus erythematosus[J]. Arthritis Rheum，2009，61（9）：1168-1178.

[3] 劉才旺，倪紅兵，鞠少卿. 血清B淋巴細胞刺激因子與SLE關聯性的初步研究[J]. 現代檢驗醫學雜志，2007，22（3）：40-42.

[4] 董娟，劉秀梅. 系統性紅斑狼瘡患者外周血調節性T細胞及TGF-β的檢測[J]. 中國現代醫生，2010，48（2）：32-34.

[5] Ramaujam M，Bethunaickan R，Huang W，et al. Selective blockade of BAFF for the prevention and treatment of systemic lupus erythematosus nephritis in NZM2410 mice[J]. Arthritis Rheum. 2010，62（5）：1457-68.

[6] 李東升，王瑋秦，孫春艷，等. 系統性紅斑狼瘡患者B淋巴細胞刺激因子及其受體BAFF-R的表達[J]. 中華皮膚科雜志，2006，39（1）：10-12.

[7] Furie R，Petri M，Zamani O，et al. A phase Ⅲ， randomized， placebo-controlled study of belimumab， a monoclonal antibody that inhibits B lymphocyte stimulator， in patients with systemic lupus erythematosus[J].Arthritis Rheum，2011，12（63）：3918-30.

[8] 沈雯雯，徐星銘，戴宏. 狼瘡性腎炎患者血清和腎內B淋巴細胞刺激因子及BR3的表達[J]. 安徽醫科大學學報，2012，47（6）：659-660.

（收稿日期：2013-03-22）