ADAM12與IGF—Ⅱ聯合檢測與自然流產相關性研究

[摘要] 目的 探討ADAM12、IGF-Ⅱ聯合檢測與自然流產的關系。 方法 放免法、時間分辨熒光法分別檢測正常妊娠、先兆流產、稽留流產組血清IGF-Ⅱ、ADAM12-S水平；原位雜交法檢測絨毛組織ADAM12-S、IGF-ⅡmRNA水平。 結果 ①血清ADAM12-S、IGF-Ⅱ表達在正常妊娠、先兆流產、稽留流產依次下降，兩兩有顯著差別（P <0.05）。②絨毛ADAM12-S、IGF-Ⅱ的mRNA表達在正常妊娠組、先兆流產組、稽留流產組依次下降，兩兩比較有顯著性差別（P < 0.05）。③血清ADAM12-S與IGF-II表達正相關（r = 0.309），差異有統計學意義（P < 0.05）。 結論 聯合檢測ADAM12和IGF-Ⅱ可提高預測自然流產的準確性，兩者相互作用失衡可能是導致自然流產發生的重要原因。

[關鍵詞] 自然流產；ADAM12；IGF-II

[中圖分類號] R714.1 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）18-0037-02

近年來，自然流產的發生率越來越高，只有很少部分可以找出明確的原因，大部分發生機制并不是十分清楚，預測方法更加缺乏，很難采取預防性治療措施，避免不良結局的發生。近年來多項研究證實IGF-Ⅱ、ADAM12均與自然流產的發生關系密切。解整合素-金屬蛋白酶12（A disintegrin and metalloproteinase 12； meltrin-，ADAM12）是一種與組織生長及器官發育相關的含鋅蛋白酶， ADAM12的濃度在整個孕期隨孕周增加升高，特別是早期敏感[1]。胰島素樣生長因子2（Insulin-like growth factor Ⅱ，IGF-Ⅱ）調節妊娠早期發育的多個環節，影響早期胚胎絨毛細胞滋養層的侵入、分化和胎盤形成。ADAM12-S作為一種胰島素樣生長因子結合蛋白的水解酶，對體內的IGF-Ⅱ的生物活性起著調節作用。本研究旨在探討ADAM12與IGF-Ⅱ與早期自然流產發生的關系， 為臨床探析自然流產的發病機制及早期預測方案提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011 年4月～2012 年9 月在我院婦產科門診行清宮術的患者，符合以下要求者納入研究人群：1）年齡在20-35歲之間；2）停經6～10 周，B超證實為宮內單胎妊娠；3）孕前6 個月月經規則，近3個月未服用過甾體類激素藥物；4）無內科疾患，外傷，精神刺激或生殖系統畸形等異常。分為三組：正常對照組35例，先兆流產組34例，稽留流產組39例。三組的年齡分別為20～34（27.22±2.89）歲、24～35（30.56±3.26）歲、21～34（29.56±2.87）歲，差異無統計學意義（P > 0.05）；孕周分別為6+6～9+2（7.86±1.02）周、7+2～9+6（8.35±1.89）、6+1～9+5（7.92±1.43）周，差異無統計學意義（P > 0.05）。

1.2 方法

1.2.1血標本采集 吸宮前10 min抽取肘靜脈血5 mL，置入干燥不抗凝的試管內，以3 000 r/ min，離心15 min，獲取血清置入-70℃冰箱保存，成批采用放射免疫法測定IGF-Ⅱ含量及時間分辨熒光檢測法測定ADAM12-S含量。放免試劑盒由上海麥莎生物科技有限公司提供，試驗步驟嚴格按說明書步驟進行。時間分辨熒光免疫分析采用芬蘭PerKinElmer公司提供的試劑盒及其配套時間分辨熒光免疫分析Victor1420 型檢測儀。

1.2.2 病理標本采集 各組于人工流產術或清宮術后留取絨毛組織以10%甲醛固定、石蠟包埋，制片厚4 μm，采用原位雜交方法測定ADAM12與IGF-ⅡmRNA的表達，并請病理專業人員雙盲閱片，在光學顯微鏡下隨機抽取5個高倍視野，Motic B5 顯微攝像系統攝像，MIAS醫學圖像分析系統計算每個視野的平均吸光值（A），計算ADAM12與IGF-ⅡmRNA的表達水平。

1.3統計學處理

計量資料均數±標準差（x±s）表示，采用SPSS16.0 統計軟件包多組間F檢驗，以α=0.05（雙尾）為檢驗水準，P <0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清中ADAM12-S及IGF- II的表達水平

①血清ADAM12-S表達水平在正常妊娠組（226.62±12.45）、先兆流產組（149.15±10.98）、稽留流產組（98.24±8.16）依次下降，兩兩相比均具有統計學意義（P < 0.05）；②血清IGF-Ⅱ表達水平在正常妊娠組（140.52±11.75）、先兆流產組（97.88±9.34）、稽留流產組（45.32±6.05）依次下降，兩兩相比差異均有統計學意義（P < 0.05）。見表1。

2.2絨毛組織中ADAM12-SmRNA及IGF- IImRNA的表達水平

①絨毛組織ADAM12-SmRNA表達水平在正常妊娠組（0.87±0.12 ）、先兆流產組（0.65±0.18）、稽留流產組（0.36±0.15）依次下降，兩兩相比均具有統計學意義（P < 0.05）；②絨毛組織中 IGF-ⅡmRNA表達水平在正常妊娠組（0.96±0.21）、先兆流產組（0.68±0.19）、稽留流產組（0.45±0.17）依次下降，兩兩相比均具有統計學意義（P < 0.05）。見表2。

2.3血清中ADAM12-S及IGF- II的表達水平的相關性分析

血清中ADAM12-S與IGF- II的表達水平呈正相關，相關指數為r = 0.309，P < 0.05，差異有統計學意義。

3 討論

胰島素樣生長因子系統結構與胰島素相似，通過自分泌或旁分泌方式發揮作用，有促進細胞繁殖、分化、生長、代謝等多種生物效應[2]，其中IGF-Ⅱ更是被認為參與了早期妊娠多個環節的調節，是胚胎發育的重要影響因子[3，4]。妊娠6周時，IGF-Ⅱ即隨絨毛膜外合體滋養層滲透和浸入到母體基質，在固定絨毛的浸入性滋養層細胞柱中可見大量IGF-ⅡmRNA 表達，表達量呈梯度上升， 在前端侵入部表達水平最高， 提示IGF-Ⅱ參與著床的過程，在滋養層細胞的侵入中起一定作用[5]。McKinnon進行絨毛外滋養層細胞的體外培養實驗提示絨毛外滋養層細胞位移和侵襲是由IGF-Ⅱ誘發，其誘發作用的信號傳導是通過IGF-ⅡR及其他信號傳導途徑完成[6]，提示IGF-Ⅱ參與調節滋養細胞侵入，影響胚胎著床過程。Lopez 等[7]通過對妊娠裸鼠的研究發現，IGF-Ⅱ參與胎盤的生長機制，IGF-II在胎盤中可調控糖原合成及糖原細胞的數量，影響胎盤的生長，從而進一步影響胎兒發育。IGF-Ⅱ低水平表達時，能通過影響胎盤功能而妨礙胚胎及滋養葉的生長發育，同時炎性細胞因子分泌增多，使免疫微環境的破壞和發生異常的免疫排斥反應，如IGF-Ⅱ表達水平嚴重降低時甚至可能導致胚胎死亡[8]。本研究中孕婦血清及絨毛組織中的IGF-Ⅱ表達水平在正常妊娠組、先兆流產組、稽留流產組依次下降，表明孕婦血清IGF-Ⅱ低水平表達與胚胎發育不良及流產的發生密切相關， 稽留流產孕婦血清中IGF-Ⅱ表達更是顯著降低。研究結果提示IGF-Ⅱ的表達水平可用來反映胚胎的發育狀況，有望成為預測早期不良妊娠結局的一個敏感因子。

ADAM12是一個擁有多功能區域的蛋白，在細胞分化、黏附、融合和相互作用過程中發揮重要的作用，在胎盤組織中表達豐富，參與了滋養細胞細胞的生長、分化、融合及遷移等多個環節[9]。人ADAM12有膜結合/可溶性形式（ADAM12-L）和分泌性/可溶性形式（ADAM12-S）兩種，ADAM12-SmRNA只在胎盤組織中表達，具有妊娠特異性[10]。顧茂勝等證明孕婦血清中ADAM12-S在孕早期隨孕周而增加，中位數呈線性關系[11]。吳昊等證明早期先兆流產患者血清中的ADAM12-S水平明顯低于同時期正常孕婦，并提出ADAM12-S有望成為自然流產早期預測指標之一[12]。本研究結果顯示，孕婦血清及絨毛組織中的ADAM12-S表達水平在正常妊娠組、先兆流產組、稽留流產組依次下降，且兩兩相比差異均有統計學意義（P < 0.05），與其結果相符。ADAM12-S是胰島素樣生長因子結合蛋白-3（insulin-like growth factor-binding protein-stree，GFBP-3）和IGFBP-5的水解酶，IGFBP-3作為為IGF在體內的主要結合蛋白，與IGF結合使其緩慢釋放從而提高IGF的生物活性[13]。ADAM12-S將IGFBP-3分解成小的蛋白水解片段，使IGFBP與IGF的結合力降低，從而影響IGF的生物活性，這可能是ADAM12參與胚胎發育調節的途徑之一，兩者相互作用失衡可能是導致自然流產發生的重要原因。本研究發現孕婦血清中ADAM12-S與IGF- II的表達水平呈正相關，也佐證這一觀點。

早期妊娠中孕婦血清及絨毛組織中ADAM12-S與IGF- II的表達水平與胚胎發育狀況密切相關，且兩者之間關聯緊密，兩者聯合檢測能提高預測自然流產的敏感度，值得臨床深入探討。探究兩者的相互作用機制可能為探索自然流產的發病機制提供新思路。

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（收稿日期：2013-04-01）