穿刺活檢聯合流式細胞儀檢測對惡性淋巴瘤診斷和分型臨床研究

[摘要] 目的 探討穿刺活檢聯合流式細胞儀檢測對惡性淋巴瘤診斷和分型的情況。 方法 回顧性分析 2009年3月～2012年3月在我市兩所醫院就診的惡性淋巴瘤患者62例，均進行流式細胞儀檢測和穿刺活檢。 結果 應用流式細胞儀檢測結果為：骨髓受累者55例，其中非霍奇金淋巴瘤45例，霍奇金淋巴瘤10例；應用穿刺活檢檢測結果為：骨髓受累者28例，其中 6例在流式細胞儀檢測中未檢測出；具有統計學差異（P < 0.05）。 結論 應用流式細胞儀檢測比應用穿刺活檢法有更高的準確度，但也有假陰性的現象，所以應該將穿刺活檢聯合流式細胞儀進行檢測，這樣能提高準確度。

[關鍵詞] 穿刺活檢；流式細胞儀檢測；聯合檢測

[中圖分類號] R733.1 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）18-0106-02

淋巴細胞發生了惡性增生就會形成惡性淋巴瘤。惡性淋巴瘤常見表現為骨髓受累。淋巴瘤的病理類型約70種，主要可分為霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤這兩種類型。在我國，大部分患者為非霍奇金淋巴瘤[1]，約90%。隨著社會的進步，人們生活水平的提高，惡性淋巴瘤在近20年來的發病率逐年升高[2]，怎樣準確診斷惡性淋巴瘤是臨床上亟待解決的難題之一。本文回顧性分析了2009年3月～2012年3月在我市兩所醫院就診的惡性淋巴瘤患者62例，目的是研究穿刺活檢聯合流式細胞儀檢測對惡性淋巴瘤診斷和分型的情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2009年3月～2012年3月在我市兩所醫院就診的惡性淋巴瘤患者62例，其中男34例，女28例，年齡14～74歲，平均（47.4±2.5）歲；非霍奇金淋巴瘤55例，其中T細胞來源15例，B細胞來源26例，霍奇金淋巴瘤11例， 其余不詳。

1.2 檢測方法

1.2.1 流式細胞儀檢測 抽取骨髓液5 mL，立即加入15 mL肝素抗凝，用流式細胞儀檢測。并分離出單個的核細胞，將核細胞進行洗滌，將細胞數量控制在（1～3）×106。再取20支試管，每支試管中加入100 μL的核細胞，依次在每支試管中加入20 μL熒光標記過的單克隆抗體、CD2、CD4、CD5、CD3、CD9、CD10、CD8、CD7、CD34、CD20、CD15等。將這些試管在4℃冰箱里放置15 min，用小鼠血清IgG作為陰性對照。在每支試管中加入2～3 mL的紅細胞裂解液[3]，離心20 min，離心后產物用PBS洗滌1～2次。最后用流式細胞儀進行分析。用Cell Quest來分析，先圈定異常幼稚細胞群，計算各細胞表面抗原的陽性百分率，如果被標記的細胞大于總數的20%，則為陽性。

1.2.2 穿刺活檢 在患者身上做骨穿，抽取3 mL骨髓液，進行涂片和染色，在顯微鏡下觀察。

1.3 統計學處理

應用 SPSS 17.0軟件來進行數據的統計及處理，計數資料采用卡方檢驗，P < 0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

應用流式細胞儀檢測結果為：骨髓受累者55例，其中非霍奇金淋巴瘤45例，霍奇金淋巴瘤10例；應用穿刺活檢檢測結果為：骨髓受累者28例，其中有6例在流式細胞儀檢測中未檢測出；兩組結果具有統計學差異（χ2=6.45，P < 0.05），見表1。流式細胞儀檢測得到的惡性淋巴瘤骨髓受累方法中，a型11例，b型0例，c型28例，d型16例。

3 討論

在淋巴結和結外淋巴組織產生的細胞腫瘤就叫做淋巴瘤。按照現行統一的分類[4]，惡性淋巴瘤可分為非霍奇金淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤兩大類。惡性淋巴瘤常見的表現主要為淋巴受累。骨髓檢查的目的就是了解骨髓造血功能和骨髓受累的情況，確定惡性淋巴瘤的分型，從而為選擇藥物和選擇治療手段提供依據。

有研究報道，2%～74%的淋巴瘤有骨髓受累現象[5]，非霍奇金淋巴瘤的骨髓受累為16%～75%，霍奇金淋巴瘤的骨髓受累為2%～32%。用骨髓活檢的方法發現骨髓受累率為21%。而應用針吸骨髓涂片法發現骨髓受累率約為15%～33%。國內的骨髓受累檢出率遠遠低于國外，主要原因為我國在這方面的技術不過關，儀器精度較低。隨著科技的發展，應用流式細胞術已經問世，應用流式細胞儀檢測骨髓受累無疑能提高檢出率。

惡性腫瘤的主要治療方法就是保肢治療，它要求穿刺活檢有更嚴格的方法。如果穿刺活檢不正確，容易造成腫瘤對局部血管和神經的污染，導致穿刺活檢失敗。所以在進行穿刺活檢時，要對腫瘤有充分的了解。在穿刺活檢中，需要免疫標記，免疫標記時，有許多抗體可供選用，但一定要根據抗體的種類，選擇合適的抗原修復方法，如消化法和微波法等。

流式細胞術能對細胞進行自動分選和分析。將細胞溶液放入流式細胞儀，就可以測量細胞的各種性質，如生物物理性質和生物化學性質，也可以根據細胞的性質，將細胞從特定的范圍內分選出來。

本文通過流式細胞儀對62例惡性淋巴瘤患者進行檢驗，發現骨髓受累患者55例，通過穿刺活檢對62例惡性淋巴瘤患者檢測發現骨髓受累患者28例，其中6例未在流式細胞儀中檢測出。通過統計學分析，兩種方法檢測出的骨髓受累患者有統計學差異（P < 0.05），說明用流式細胞儀檢測的方法優于穿刺活檢的方法。但是有6例患者在穿刺活檢中呈陽性，但在流式細胞儀檢測中呈陰性，這表明流式細胞儀還未達到100%的檢測準確度。穿刺活檢這種方法樣本量小，準確度小，但方便可行，而流式細胞儀檢測操作復雜，準確性高，只有兩種方法結合，才能更精確地檢測惡性淋巴瘤骨髓受累。

臨床分期與患者的治療方法有密切的關系。如果惡性淋巴瘤患者有骨髓受累，那么患者的臨床分期就為Ⅳ期，應該引起重視。本文用流式細胞儀檢測比用穿刺活檢法檢測出更多的骨髓受累患者，這說明流式細胞儀檢測技術精確度更高，值得臨床上應用。目前用得較多的方法就是穿刺活檢法，而流式細胞儀檢測法還未得到更普遍的應用。

通過本文的研究，發現應用流式細胞儀檢測比應用穿刺活檢法有更高的準確度，但也有假陰性的現象，所以應該將穿刺活檢聯合流式細胞儀進行檢測，這樣能提高準確度。

[參考文獻]

[1] 子華，杜湘桂，王桃仙，等. 骨髓檢查對惡性淋巴瘤分期的重要性[J]. 中國腫瘤臨床，1984，11（1）：17-19.

[2] 殷杰，顧健. 流式細胞術對惡性淋巴瘤細胞膜表面標記及倍體分析[J]. 國外醫學：輸血及血液學分冊，2003，26（5）：421-422.

[3] 珊珊. 流式細胞術-白血病免疫分型規范化[J]. 中國實驗血液學雜志，2002，10（1）：1-5.

[4] 叔逵，王健民，王杰軍. 中國臨床腫瘤學教育專輯[M]. 北京：中國醫藥科技出版社，2001：204-211.

[5] 郭會芹，孫耘，田援. 乳腺粗針穿刺活檢的臨床病理應用[J]. 中華病理學雜志，2004，33（3）：277-279.

（收稿日期：2013-03-18）