高效液相色譜法中流動(dòng)相的配制方法

【摘 要】高效液相色譜法中的流動(dòng)相主要用水性溶劑、有機(jī)溶劑或它們的混合液，但是如何配制？選擇配制的方法不同，分析結(jié)果，特別是保留時(shí)間，也會(huì)有顯著的差別。

【關(guān)鍵詞】流動(dòng)相配制 體積比 質(zhì)量比 高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】O657.72 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1674-4810（2013）33-0172-01

高效液相色譜法中的流動(dòng)相主要用水性溶劑、有機(jī)溶劑或它們的混合液，另外水性溶劑也常用于緩沖液。常因資料上表示的內(nèi)容和實(shí)際的配制方法不同，而產(chǎn)生流動(dòng)相的差異，影響了色譜圖和分析結(jié)果。本文以具體的事例研究流動(dòng)相調(diào)制方法對(duì)分析結(jié)果的影響。

一般來說，溶劑的混合按體積比（V/V）或重量比（W/W）進(jìn)行。溶液的體積因溫度而變化，所以按重量比混合可調(diào)制再現(xiàn)性較好的混合溶劑，但由于操作較麻煩，通常多用體積比混合。因此，只要沒有特別標(biāo)明，就可按體積比進(jìn)行混合。但在特殊情況下，如胺類粘度高的溶液混合時(shí)，有時(shí)用重量—體積比（W/V）的方法。

一 有機(jī)溶劑和水性溶劑的混合方法

有機(jī)溶劑和水性溶劑的混合液作為流動(dòng)相是經(jīng)常的，但由于混合方法不同，有時(shí)分析結(jié)果相差很大。如20mM磷酸鈉緩沖液（pH 2.5）90%與乙腈10%的混合液，混合比為9∶1時(shí)，20mM磷酸鈉緩沖液（pH 2.5）90%與乙腈10%的體積比為9∶1，也就是可以解釋為各自按體積比例的相當(dāng)量稱取后進(jìn)行混合。另外，按10%乙腈解釋，用20mM磷酸鈉緩沖液（pH 2.5）將乙腈稀釋調(diào)制也可以成立。在后者情況下，產(chǎn)生混合體積減少部分，余下的添加20mM磷酸鈉緩沖液。兩者雖然沒有太大的差別，但由于混合方式不同，分析結(jié)果，特別是保留時(shí)間，也會(huì)有顯著的差別，這點(diǎn)必須注意。

二 50%或（V/V=1/1）乙腈水溶液的配制方法

對(duì)于用V/V=1/1的表示配制乙腈水溶液，多按這種方法進(jìn)行：用量筒測(cè)定乙腈500ml，用另一量筒測(cè)定水500ml，兩種液體在瓶內(nèi)充分搖晃混合。

不過50%乙腈水溶液的表示時(shí)，同樣也多是按上述方法配制，但查化學(xué)辭典時(shí)，實(shí)際上是按這種方法進(jìn)行配制：首先將500ml乙腈，注入1L的量瓶中，量瓶邊攪拌邊加水，等待液溫達(dá)到室溫，用全量水，使溶液到1L。

這樣一來，用%表示和“V/V”體積比表示，最終得出的流動(dòng)相組成不同。也就是說，混合溶劑的密度，與由原溶劑密度計(jì)算的單純平均值不相同，所以用上述兩種方法調(diào)制的流動(dòng)相組成差異。如在室溫（25℃）附近水50ml和乙腈50ml混合時(shí)體積不是100ml，而有所減少，約為96ml。在一般情況下，多用操作簡便的第一種方法。

三 溶劑體積的溫度影響

如前所述，溶液的密度受周圍溫度的影響。剛從溶劑冷藏箱拿出來的溶液溫度與實(shí)驗(yàn)室的室溫相比，要低不少，乙腈和水混合液因發(fā)熱反應(yīng)，溶液溫度升高。因此，為能調(diào)制再現(xiàn)性好的流動(dòng)相，建議在使用前用水浴（或熱水浴）將液溫調(diào)到接近室溫。

四 用兩臺(tái)泵進(jìn)行溶劑混合

在反相分析中，常用的有機(jī)溶劑和水的等濃度法，使用高壓兩元梯度系統(tǒng)，用兩臺(tái)泵將流動(dòng)相分別輸液后混合等封閉式混合時(shí)與預(yù)先在瓶內(nèi)混合后用1臺(tái)泵輸液時(shí)，因混合后體積變化的不同，保留時(shí)間也有所不同，一定要注意。

不僅是流動(dòng)性的調(diào)制方法，試樣溶液和其他溶液的調(diào)制也經(jīng)常有上述問題，另外，在不同部門（醫(yī)藥部門或化工部門）各自都有自己的常識(shí)和習(xí)慣。在這種情況下，就要求各部門在制作相關(guān)溶液配制方法時(shí)能規(guī)定通則，定義設(shè)計(jì)溶液的調(diào)制方法，這樣避免混亂，以在日常工作中更好地記住這些表示方法。

〔責(zé)任編輯：龐遠(yuǎn)燕〕