狗肝菜多糖對肝纖維化大鼠肝組織瘦素及血管內皮因子蛋白表達的影響

【中圖分類號】R575.2 【文獻標識碼】A 【文章編號】1672-3783（2013）12-0120-01

【摘要】目的：研究狗肝菜多糖對二甲基亞硝胺（DMN）誘導的肝纖維化大鼠肝組織中瘦素（Leptin）及血管內皮因子蛋白表達的影響。方法：用DMN誘導大鼠肝纖維化模型，不同濃度狗肝菜多糖干預后，肝臟常規取材、制片，免疫組織化學方法檢測各組大鼠肝組織Leptin及血管內皮因子蛋白表達的情況。結果：模型組大鼠肝組織Leptin及血管內皮因子蛋白染色強度和范圍明顯高于正常組，具有顯著性差異（P<0.05）；與模型組比較，狗肝菜多糖高劑量組、狗肝菜多糖中劑量組大鼠肝組織Leptin及血管內皮因子蛋白表達明顯降低，具有顯著性差異（P<0.05）。結論：狗肝菜多糖抗肝纖維化的作用機制可能通過降低Leptin及血管內皮因子蛋白的表達而調控細胞外基質的代謝有關。

【關鍵詞】狗肝菜多糖；肝纖維化；免疫組織化學；瘦素；血管內皮因子

瘦素（Leptin）及血管內皮因子在代謝、炎癥、腫瘤中均發揮著重要作用，明顯加重肝纖維化的發展程度，可能是一個關鍵促纖維化因子。狗肝菜多糖是是爵床科華九頭獅子草屬，在抗炎抑菌、抗氧化、抗病毒中發揮重要作用。近年來通過其化學成分、藥理作用的研究，其藥用價值得到了進一步的肯定，尤其是在保肝護肝方面。因此，作者等通過免疫組化方法，觀察狗肝菜多糖干預的肝纖維化大鼠肝組織中Leptin及血管內皮因子蛋白表達情況，探討狗肝菜多糖抗肝纖維化機制是否與降低Leptin及血管內皮因子蛋白表達有關。

1材料與方法

1.1 SPF級SD大鼠72只，體重180-220g，雄性，適應性喂養2d，每組12只，隨機分為正常對照組、模型組、秋水仙堿組、狗肝菜多糖高劑量組、狗肝菜多糖中劑量組、狗肝菜多糖低劑量組。除正常對照組外，余60只造模。模型復制：每只動物按2ml.kg-1劑量，腹腔注射0.5% DMN，連續注射三天，停藥四天，造模時間為四周，共注射12次。第一周用2/3劑量，以后用全量。藥物處理：秋水仙堿組劑量為0.1mg.kg-1，狗肝菜多糖高、中、低劑量組分別為300mg.kg-1、200mg.kg-1、100mg.kg-1，除正常對照組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃外，各組均灌胃給藥，1次/d，連續4周。4周末，實驗結束時，取大鼠肝組織常規脫水、制片，蘇木素-伊紅染色（HE）染色，觀察各組大鼠肝組織形態改變；免疫組織化學方法檢測各組大鼠肝臟Leptin、血管內皮因子表達情況。

免疫組化結果判定： 以胞質出現棕黃色或棕褐色顆粒為陽性。先按染色強度打分：0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；再按陽性細胞所占百分比打分：0分為陰性，1分為<10%，2分為11%-50%，3分為51%-75%，4分為>75%?？偡?-1分（-），2-3分（+），4-5分（++），6-7分（+++）。

1.2 用SPSS17.0 統計軟件，進行Ridit分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 Leptin表達情況

與正常組比較，模型組表達明顯升高（P<0.05）；與模型組比較，狗肝菜多糖高、中劑量組、秋水仙堿組瘦素蛋白表達明顯降低（P<0.05），狗肝菜多糖低劑量組瘦素蛋白表達無統計學意義（P>0.05）；狗肝菜多糖高、中劑量組與秋水仙堿組比較，無統計學意義（P>0.05）。

3討論

新近發現，瘦素（leptin）與轉化生長因子β1，血小板源性生長因子，腫瘤壞死因子，r干擾素、 缺氧誘導因子-1α等構成相互促進或抑制的調解網絡，在肝纖維化形成中具有重要作用。作用機制為促進肝內轉化生長因子β1、血小板衍生生長因子等細胞因子的表達，增加膠原的表達，上調基質金屬蛋白酶抑制劑-1的表達，減少基質金屬蛋白酶-1的形成，減少細胞外基質的降解，并能上調促炎因子和促血管生成因子，從而促進纖維化發展[1]。在人肝星狀細胞細胞系（LX - 2） 、鼠肝星狀細胞細胞系（HSC - T6）和從正常鼠肝內分離培養活化的肝星狀細胞內均發現有Leptin受體的表達，Leptin能刺激基質金屬蛋白酶抑制劑啟動子活性，激活絡氨酸激酶和信號轉導與轉錄激活因子3，5酶活性，進而促進基質金屬蛋白酶抑制劑-1的產生。Crepo J檢測135名慢性肝炎患者和75名正常對照者Leptin水平，并評價Leptin水平與肝纖維化程度的相關性，結果表明Leptin水平與肝纖維化程度正相關，隨著纖維化程度增加而升高。王曙強[2]認為，在非酒精性肝硬化中，Leptin水平與轉化生長因子β1水平呈正相關，Leptin在非酒精性肝硬化中是獨立的致病因素，Leptin可能通過轉化生長因子β1系統導致肝纖維化。

狗肝菜多糖作為一種民間藥物，有清熱解毒、消腫利濕的功效，常用來治療水腫、感冒發熱、蛇蟲咬傷等。近年來通過其化學成分、藥理作用的研究，其藥用價值得到了進一步的肯定。此次研究發現，模型組大鼠肝組織Leptin及血管內皮因子表達明顯高于正常組，證實Leptin及血管內皮因子在肝纖維化中發揮了重要作用。狗肝菜多糖防治大鼠肝纖維化可能與其降低Leptin及血管內皮因子表達，抑制肝星狀細胞增殖和降低肝內轉化誘導因子β1等細胞因子表達，減輕肝臟炎性壞死程度，減少血管生成，從而抑制肝纖維化的啟動密切有關。同時，中醫藥與西醫治療比較，具有成本低廉、副作用小、多靶點、提取簡單等優勢。我國又是傳統中醫藥大國，中藥資源豐富，因此，狗肝菜多糖防治肝纖維化研究具有廣闊的推廣前景。

參考文獻

[1]劉弋云，朱萱.瘦素在肝纖維化形成中的作用與地位[J].國際消化病雜志，2009，29（6）：384-386.

[2]王曙強.瘦素和轉化生長因子β1對非酒精性脂肪性肝炎患者肝纖維化的影響[ J ].臨床和實驗醫學雜志，2009，8（8）：17-18.