厭氧菌的微生物檢驗及臨床意義

【中圖分類號】R446.5 【文獻標識碼】A 【文章編號】1672-3783（2013）12-0137-01

【摘要】目的：探討厭氧菌的微生物檢驗方法及臨床意義。方法：選80例厭氧菌感染的標本采集、送檢、檢驗方法及常見厭氧菌的快速鑒定進行分析。結果：80例感染標本中厭氧菌培養陽性者24例，陽性率為30 %。其中單純厭氧菌陽性者10例，占陽性標本的41.6 % ；厭氧菌和需氧菌混合感染14例。6例為兩種厭氧菌感染。結論：60%的感染與厭氧菌有關，有些部位的感染80%以上是由厭氧菌感染所致。厭氧菌標本的采集與送檢，直接關系到實驗室培養的陽性率與準確性。對于厭氧菌感染，實驗室診斷日益受到重視。

【關鍵詞】厭氧菌；標本采集立；送檢；檢驗方法

厭氧菌分布十分廣泛是體內正常菌群的組成成員，正常情況下菌群之間保持著微生態平衡，厭氧菌代謝產生的乙酸、乳酸等能抑制病原菌生長。選取80例感染標本中厭氧菌檢驗進行分析。

1 臨床資料

1.1 一般資料 本組為2012年3月～2013年3月住院患者感染標本80例，男性48例，女性32例，年齡15～73歲，平均年齡42歲。肺部感染20例，腹部水及腹腔引流液39例，膽汁14例，穿刺膿液7例。

1.2 方法

1.2.1標本采集與送檢 標本采集后要立即送檢，送檢過程中也必須避免接觸氧氣。標本送到實驗室后，應在20～30 min內處理完畢，最遲不超過2 h，以免其中的兼性厭氧菌過度生長而抑制厭氧菌的生長。若不能及時接種，可將標本置室溫下保存，切不可冷藏，因在低溫時氧氣的溶解度較高，不利于厭氧菌的生長。

1.2.2厭氧菌的檢驗方法

1.2.2.1肉眼觀察 每次接種前均應觀察標本的性狀，如是否為膿性、血性，有無黑色壞死組織或黑色分泌物，有無硫黃樣顆粒，是否有惡臭等。

1.2.2.2直接鏡檢 除血液標本外，各種臨床標本在接種前均須直接涂片，做革蘭染色后鏡檢，以觀察細菌的染色性、形態特征以及標本中的菌量，以供分離培養、判斷結果時參考。

1.2.2.3分離培養 初代培養常用方法有厭氧罐法、氣袋法和厭氧手套箱法等。前兩種方法比較簡便，不需特殊設備，適用于小型實驗室，后一種方法設備較為復雜而昂貴，但效果最佳。盡量使用新鮮培養基，并在2～4 h內用完。使用前放入無氧環境，預還原處理24～48 h。可采用預還原滅菌法制作的培養基。若為液體培養基，在使用前必須煮沸10 min以驅除溶解氧，并迅速冷卻后接種細菌。標本經48h初代培養后，用放大鏡觀察平板上的菌落性狀。每個平板挑選5個不同性狀菌落，每個菌落分別接種2～3個平板，每個平板劃分4～6個區，分別作幾個菌落的次代培養。然后分別放入有氧、無氧和含5%～10%二氧化碳環境中培養48h。如在有氧、無氧環境中均能生長為兼性厭氧菌；如在有氧、無氧環境中均不生長或生長不好，而在二氧化碳環境生長最好為需二氧化碳菌；如在有氧下生長而在無氧下不生長則為需氧菌；在有氧環境中不生長而僅在厭氧環境中生長即為專性厭氧菌。

2 結果

80例感染標本中厭氧菌培養陽性者24例，陽性率為30 %。其中單純厭氧菌陽性者10例，占陽性標本的41.6 % ；厭氧菌和需氧菌混合感染14例。6例為兩種厭氧菌感染。厭氧菌在某些特定條件下，可引起人體的內源性感染。60%的感染與厭氧菌有關，有些部位的感染80%以上是由厭氧菌感染所致。

3 討論

對厭氧菌的感染，常規細菌培養方法不能檢出，常用抗菌藥物也多無效果，是臨床上許多疑難雜癥，如“無菌性感染或膿腫”、“原因不明的發熱”，以及某些感染性疾病遷延不愈和反復發作的重要原因之一。在發生菌群失調或機體免疫力下降或細菌進入非正常寄居部位時，這些厭氧菌即可作為條件致病菌而導致內源性感染。厭氧菌標本的采集與送檢，直接關系到實驗室培養的陽性率與準確性。

標本的采集與運送是否適當，對厭氧菌培養能否成功至關重要。厭氧菌的標本采集的原則是要求標本絕對不能被正常菌群所污染，采集時盡量避免接觸空氣。臨床在進行厭氧菌培養前還應與實驗室聯系，以便實驗室做好接種培養的準備[1]。標本應從正常無菌部位或通過嚴格無菌技術采集，用特殊技術或方法采取的標本，必須通過用于厭氧菌正常棲居地才能取到的標本，如痰、支氣管鏡采樣（無特殊保護套）、咽拭子、排出的尿及陰道拭子不能做厭氧菌培養；糞便標本厭氧菌培養，只能做難辨梭菌及內毒桿菌的培養。最好是床邊接種，如無條件床邊采樣時，盡快將空針中的氣體排盡，用消毒空針抽取厭氧培養標本，將針頭插入無菌橡皮塞。或將標本插入運送培養基中送細菌室培養。標本送到實驗室后，應在20～30 min內處理完畢，最遲不超過2 h，以免其中兼性厭氧菌過度生長而抑制厭氧菌的生長。如果一時來不及接種，可將標本置室溫下保存。標本不宜冷藏，因冷藏對某些厭氧菌有害，而且在低溫時氧的溶解度較高。每次標本接種前均應觀察標本的性狀，包括標本的氣味、是否膿性、帶血或腐敗物質等，對厭氧菌的鑒定很重要。

肺部和胸腔的厭氧菌感染，吸入性肺炎多發生于老年人及嬰幼兒。局限性肺炎和支氣管肺炎主要是慢性復發性局限性肺炎和支氣管炎，病理學上以間質性和肺泡內浸潤為特征，缺少明顯的組織壞死和臨床癥狀。壞死性肺炎厭氧菌感染率100%[2]。本病特點是形成許多直徑在2 cm以下的小膿腫和壞死灶。嚴重者，形成肺壞疽。病人情況嚴重，體溫在39℃以上，常侵犯兩肺葉。部分病人有惡臭的痰及膿胸，病死率較高。肺膿腫與膿胸由吸入性肺炎引起，1～2周后開始有空洞或出現氣液平面。病人長時期體溫高、熱期長，部分病人白細胞明顯增多，還有部分病人體重明顯下降。肺部出現膿性分泌物。

腹膜及腹腔內臟器的厭氧菌感染，腹膜炎細菌通過腹腔臟器的各種炎癥、手術、外傷和穿孔等，進入腹腔所引起的繼發性感染。肝膿腫及其他腹腔膿腫，臨床表現和診斷與需氧菌引起的肝膿腫相同，即發熱、寒戰、貧血、惡心、食欲不振、肝區疼痛、肝臟腫大和體重減輕等癥狀。膽道系統感染，正常膽囊壁及膽汁中無菌，或僅有極少數細菌[3]。在膽囊炎或膽石癥時腸道的菌群沿膽管上行，或經淋巴管進入膽囊壁。闌尾炎和闌尾膿腫多為需氧菌與厭氧菌的混合感染，且闌尾炎癥越嚴重，厭氧菌培養陽性率也增高。

參考文獻

[1]周貴民.厭氧菌血培養是值得重視的問題.中華醫學檢驗雜志，2005，28：979-980.

[2]張璞玉，陳升杰. 臨床標本厭氧菌培養結果分析J . 中華醫學檢驗雜志，2002 ，253（1） ：141 .

[3]吳多榮氧凈（OxyplatesTM）厭氧菌培養法的實驗室應用[J]中國熱帶醫學，2004，4：617～619