AS及MVD在子宮內膜癌組織中表達狀況及臨床研究

[摘要]目的 研究血管生長抑制素（AS）和微血管密度（MVD）在子宮內膜癌中的表達及臨床應用價值。 方法 增生期子宮內膜組，子宮內膜增殖癥組，子宮內膜癌組各30例，采用免疫組織化學法檢測其子宮內膜組織中AS及MVD的表達結果。 結果 （1）子宮內膜癌組與增生期子宮內膜組、子宮內膜增殖癥組間MVD、AS間的差異有統計學意義（P<0.05）；（2）血管抑素與MVD的表達有相關性（rs=0.706，P<0.05）。結論 AS和MVD在子宮內膜癌的發生發展中起到重要作用，可以考慮將它們看做子宮內膜癌的潛在侵襲性方面的腫瘤標志物，作為抗腫瘤治療的新靶標。

[關鍵詞]血管抑素；微血管密度；子宮內膜癌

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）14-23-02

The expression of angiostatin and microvessel demist in endometrial and the clinical investigation

ZHENG Wei FAN Huiyi LIANG Xiaoman XU Yan

Panyu District Central Hospital of Guangzhou， Guangzhou 510080，China

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of angiostatin and microvessel demist in endometrial and the clinical investigation. Methods The immunohistochemical method was used to detect the expression of AS and microvessel demist in 30 adenocarcinoma endometrial，30 endometrial hyperplasia and 30 endometrial cancer. Results First，the levels of MVD showed a significant difference between adenocarcinoma endometrial，endometrial hyperplasia and endometrial cancer（P<0.05）；Second，the expression of angiostatin was associated with MVD （rs=0.706，P<0.05）. Conclusion The results clue on the important role of AS and MVD on the development of endometrial earcinoma. Additional we can treat them as endometrial eareinoma potential invasive tumor markers and as the anti-tumor therapy of important novel targets.

[Key words] Angiostatin；Microvessel demist；Endometrial cancer

子宮內膜癌是婦科疾病中的惡性腫瘤之一，近年來，發病率逐漸上升，成為世界范圍內的趨勢。對它的惡性行為的不斷研究，也越來越受到關注。近年來，在子宮內膜癌的研究中，血管生成開關調控機制學說也取得了不斷的進展。在數量繁多的血管生成調控因子之中，更多的研究集中在血管內皮生長因子（vascularendothelialgrowthfactor， VEGF），內皮抑素（Endostatin）。其中，截止到現在，VEGF可以高效抑制腫瘤中血管的形成，并且可以通過誘導腫瘤中的血管進一步轉化為Endostatin，是所有內源性的血管抑制劑中最為有效的抑制劑之一[1]，而血管生長抑制素（angiostatin， AS）和微血管密度（MVD）則較少報道。本實驗應用免疫組化方法檢測AS和MVD在子宮內膜癌中的表達，評價兩者之間相關性，探討兩者在子宮內膜癌發病機制中的可能作用機制及其潛在的臨床應用價值。

1 材料與方法

1.1 樣本

收集我院2011～2013年間患者行手術或者活檢標本時的蠟塊標本，其中子宮內膜腺癌患者30例，臨床資料相對完

整，術前均未行放化療等治療。年齡范圍為27～74歲，中位年齡53歲；增生期子宮內膜患者30例；子宮內膜增殖癥患者30例，其中依據ISGP將這部分患者進一步進行分類，復合型增生患者為11例，單純型增生患者為9例，不典型的增生患者為10例。

1.2 主要試劑

血管抑素鼠抗人單克隆抗體購自Neomarkers公司，鼠抗人CD34抗體和免疫組化試劑盒由Amersham公司提供。血管抑素、MVD一抗濃度比例為1︰100。

1.3 檢驗方法

依據說明書中的步驟，采用已有的陰性切片的結果作為陰性對照，同時采用陽性切片的結果作為陽性對照；在PBS中孵育陽性切片?？瞻讓φ战M則是采用陰性切片組的結果。

1.4 結果判斷

染色結果顯示，腫瘤細胞和一部分淋巴細胞的胞漿內呈現出棕黃色的顆粒，這是血管抑素表達的結果。對血管抑素的評估可通過陽性細胞的比例和染色的強度進行衡量。參照陽性細胞所占的比例，無顯示時記做0分，≤25%的話則記做1分，26%～50%的話則記做2分，>50%的話記做3分。相應的，無顯色時將其記做0分，棕黃色時可以記做1分，棕色時可記做2分，棕褐色時則記做3分。兩項結果進行相加，記為免疫組化的結果。其中強陽性的為6分以上（++），陽性結果的為3～4分（+），陰性結果的分值為0～2分（-）[2]。用CD34對內皮細胞進行標記，顯微鏡下計算血管的數量來計算MVD。具體方法為低倍鏡下（40倍）首先對染色密集的區域進行選擇，高倍鏡下（400倍）隨機選擇5個視野區，計數。取其平均值。注：血管的管腔徑若大于8倍的紅細胞的胞徑則不進行計數[3]。

1.5 統計學處理

用統計學軟件SPSS16.0進行統計學分析，計量資料采用t檢驗，計數資料則采用秩和檢驗或x2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組患者MVD、血管抑素的表達情況（表1）

3 討論

血管抑素是由 O’Reilly在1994年首次從荷Lewis患肺癌的小鼠尿液、血清里分離出來， 是經血漿中的纖維蛋白溶酶原裂解而得到的片段。分子質量為38ku。其有5個kringle區域組成。其中kringle1-3區組成特殊的“碗狀”結構，可以抑制內皮細胞的不斷增值[4]。不同的是，Kringle4-5區可以發揮較強的拮抗內皮細胞的遷移的功能。

血管抑素與內皮抑素具體相類似的生物學功能，對內皮細胞的作用是特異性的，可以起到抑制其不斷增值、移動和對血管的形成作用。同時促進它的凋亡，達到對腫瘤生長的抑制作用。體外實驗對T241纖維肉瘤模型小鼠的研究中發現，血管抑素發揮對原發性惡性腫瘤的抑制作用可以達到77%，并且當原發腫瘤被切除后，肺轉移灶中大約70%的部分可以保持繼續休眠狀態，達到2～5個月之久[5]。Moser等[6]將位于內皮細胞表面的合成ATP酶的抗體與其結合，觀察到AS對內皮細胞的抑制增殖作用減少了90%，由此可以推測它對內皮細胞抑制作用的機制可能是由于AS與ATP合成酶的進一步結合。腫瘤的惡性行為主要與腫瘤的侵襲性和轉移性有關，而腫瘤細胞的侵襲與轉移多與新生血管的生成有關[3]。惡性腫瘤細胞中存在多種抑制或促進新生血管生存的因子。Abulafia等[7]對子宮內膜癌及子宮內膜里的血管內皮細胞進行了染色，研究中可以看到子宮內膜增生過長組中，MVD值低于子宮內膜癌組。另外，子宮內膜癌中血管的進一步生成對疾病的診斷及預后同樣也有一定的意義。因此，本文將進一步探討血管生長抑制素和微血管密度在子宮內膜癌中的表達及臨床應用價值。

在本次研究中，通過對子宮內膜增殖癥患者、增生期子宮內膜患者、子宮內膜癌患者的子宮內膜組織里AS及MVD的表達情況的測量，發現子宮內膜癌與子宮內膜增殖癥、增生期子宮內膜組之間AS、MVD差異有統計學意義。研究中所顯示的結果與國外已有的相關文獻中的研究結果是相一致的。該結果也進一步暗示了子宮內膜癌的發生、發展、預后等與血管的生成可能存在著較為密切的聯系。MVD與血管抑素的表達相關。可進一步推測在子宮內膜癌的發生過程中，兩者是相互影響的，但具體機制仍需要進一步研究。

綜上所述，子宮內膜癌的發生、發展、預后等與AS、MVD的表達差異存在著較為密切的聯系。子宮內膜癌組的MVD明顯高于增生期子宮內膜組織、子宮內膜增殖癥組，進一步提示在子宮內膜癌的發生發展過程中，血管生成可能是其中重要的機制之一。子宮內膜癌中血管抑素、MVD的高表達提示血管生成與子宮內膜癌的發生密切相關，且AS及MVD之間可能存在著相互作用。

[參考文獻]

[1] O'Reilly MS，Boehm T.Endostatin：an endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor growth[J].Cell，1997，88（2）：277-85.

[2] Mattern J，Koom?gi R，Volm M.Association of vascular endothelial growth factor expression with intratumoral microvessel density and tumour cell proliferation in human epidermoid lung carcinoma[J].Br J Cancer，1996，73（7）：931-934.

[3] Kaku T，Kamura T，Kinukawa N，et al.Angiogenesis in endometrial carcinoma[J].Cancer，1997，80（4）：741-747.

[4] Abad MC，Arni RK，Grella DK，et al. The X-ray crystallographic structure of the angiogenesis inhibitor angiostatin[J].J Mol Biol，2002，318（4）：1009-1017.

[5] Cao Y，O'Reilly MS.Expression of angiostatin cDNA in a murine fibrosarcoma suppresses primary tumor growth and produces long-term dormancy of metastases[J].J Clin Invest，1998，101（5）：1055-1063.

[6] Moser TL，Stack MS.Angiostatin binds ATP synthase on the surface of human endothelial cells[J].Proc Natl Acad Sci USA，1999，96（6）：2811-2816.

[7] Abulafia O，Triest WE，Sherer DM，et al. Angiogenesis in endometrial hyperplasia and stage I endometrial carcinoma[J].Obstet Gynecol，1995，86（4 Pt 1）：479-485.

（收稿日期：2013-05-10）