人支氣管上皮細胞原代培養(yǎng)的護理支持

[摘要] 目的 探討人支氣管上皮細胞原代培養(yǎng)中護理配合措施。 方法 做好我院2012年1～9月接收的34例肺癌患者的術(shù)前護理工作，包括人支氣管上皮細胞分離前科普宣教和心理護理等，了解人支氣管上皮細胞原代培養(yǎng)的各種方法，熟悉操作過程，備齊所需要的物品，并且協(xié)助研究人員完成人支氣管上皮細胞的原代培養(yǎng)。 結(jié)果 經(jīng)過有效地護理配合，34例患者均順利完成支氣管上皮細胞的分離，無不良反應(yīng)發(fā)生；并且通過組織貼塊法、蛋白酶消化+機械刮刷法、纖支鏡刷檢法三種不同的分離培養(yǎng)方法中探索出組織貼塊法獲得的支氣管上皮細胞成活率高，純度高，是一種經(jīng)濟、簡便、實用的支氣管上皮細胞培養(yǎng)方法。 結(jié)論 在人支氣管上皮細胞的原代培養(yǎng)中，配合相應(yīng)的護理，效果良好，為研究出經(jīng)濟、簡便、實用的支氣管上皮細胞培養(yǎng)方法奠定了基礎(chǔ)，值得在臨床中推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] 人支氣管上皮細胞；原代培養(yǎng)；護理配合

[中圖分類號] R329 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）14-125-02

The nursing cooperation of human bronchial epithelial cells primary culture

LI Zhijuan OU Xuezhen XIAO Fanghong LUO Zhangying

Department of Internal Medicine，Dongguan People's Hospital， Dongguan 523059， China

[Abstract] Objective To explore the nursing measures of primary culture for human bronchial epithelial cells. Methods 34 cases of patients with lung cancer were selected to perform bronchial epithelial cells primary culture，which were accepted series nursing methods including pre-collection science mission and psychological care. Results All patients were successfully completed the separation of bronchial epithelial cells without adverse reaction through effective nursing cooperation.By researching organization posted tablets of the testimony，protease digestion and mechanical wiping method，fiber mirror brush method for human bronchial epithelial cells primary culture， explored that organization posted tablets of the testimony was a kind of economic，convenient and practical method of bronchial epithelial cells. Conclusion Our research results show that nursing cooperation laid the foundation for the study of an economy，simple and practical method of bronchial epithelial cell culture，which is worth to be popularized in human bronchial epithelial cells primary culture，.

[Key words] Human bronchial epithelial cells；Primary culture；Nursing cooperation

支氣管上皮細胞是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道屏障，在慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機制中均起著重要的作用，逐漸受到人們的重視。支氣管上皮細胞不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細胞，還作為效應(yīng)細胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細胞因子，從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)，而體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細胞由于與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上存在很大的相似性，支氣管上皮細胞的原代培養(yǎng)成為研究呼吸道上皮功能的必要條件[1]。本室在參考國內(nèi)外相關(guān)研究的基礎(chǔ)上[2-3]，擬采用組織貼塊法、蛋白酶消化+機械刮刷法、纖支鏡刷檢法三種不同的分離培養(yǎng)方法對支氣管上皮細胞進行原代培養(yǎng)，探索出一種能夠獲得成活率高、純度高的支氣管上皮細胞，經(jīng)濟、簡便、實用的支氣管上皮細胞培養(yǎng)方法，但是研究中發(fā)現(xiàn)在上皮細胞的分離過程中，患者的積極配合、護士對人支氣管上皮細胞原代培養(yǎng)的各種方法的了解

和操作過程的熟悉，對于人支氣管上皮細胞原代培養(yǎng)的成功尤為重要，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對我院2012年1～9月接收的，確診為肺癌34例患者進行人支氣管上皮細胞的標本來源，其中：男19例，女15例，患者年齡最小41歲，最大73歲，平均53.2歲，所有患者均在知情條件下對其支氣管上皮細胞進行分離采集。

1.2 設(shè)備與耗材

倒置相差顯微鏡、纖支鏡、一次性無菌細胞刷均為日本Olympus公司產(chǎn)品；支氣管上皮細胞生長培養(yǎng)基為德國Promocell公司產(chǎn)品；蛋白酶、人的胎盤膠原Ⅵ為美國Sigma公司產(chǎn)品；細胞培養(yǎng)板、細胞凍存管均購自美國Coming公司；含青、鏈霉素的雙抗、0.25%胰酶/EDTA、胎牛血清、MEM培養(yǎng)基均為美國Gibco公司產(chǎn)品。

1.3 護理配合

1.3.1 支氣管上皮細胞分離前護理 由于肺癌患者本身對于自己的疾病就有一定的恐懼，當(dāng)被告知需要對其癌旁正常的支氣管組織進行分離采集或者在纖支鏡直視下，用毛刷進行刷檢，進一步加重他們的心理負擔(dān)，影響采集分離過程的進行。因此采集前護士應(yīng)向患者就該項采集技術(shù)和操作的科學(xué)性、安全性和有效性及采集的主要方法和過程進行必要的介紹和說明，并且對患者進行心理護理，解除他們心理上不必要的顧慮，消除其焦慮、恐懼心理，盡量取得他們的認可和配合為人支氣管上皮細胞的分離創(chuàng)造前提條件。分離前一晚患者應(yīng)保證充足的睡眠，禁止服用影響實驗結(jié)果的藥物，護士在分離前評估患者的一般情況，如生命體征等，檢測體溫、脈搏、血壓等，排除發(fā)熱、心衰等患者。

1.3.2 支氣管上皮細胞分離前儀器及物品準備 為防止出現(xiàn)不良反應(yīng)，分離前應(yīng)該注備好急救物品。為支氣管上皮細胞分離準備好MEM培養(yǎng)基、0.25%胰酶/EDTA、含青、鏈霉素的雙抗、胎牛血清、支氣管上皮細胞生長培養(yǎng)基、蛋白酶、人的胎盤膠原Ⅵ、鼠抗人的角蛋白8單克隆抗體、超敏即用型免疫組化試劑盒、細胞培養(yǎng)管、細胞凍存管等物品和倒置相差顯微鏡、纖支鏡等設(shè)備；并且將支氣管上皮細胞生長培養(yǎng)基配置成含有人表皮生長因子、牛垂體提取物、人轉(zhuǎn)鐵蛋白、腎上腺素、人胰島素、氫化可的松等的無血清培養(yǎng)液于4℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 支氣管上皮細胞分離過程中的護理配合 了解人支氣管上皮細胞原代培養(yǎng)的各種方法，熟悉操作過程，支氣管上皮細胞分離麻醉前要與患者進行充分的交談和提醒，并告知其注意事項及有可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)，相應(yīng)措施等，以消除患者緊張情緒。安裝機器配套管路，并且分離過程中應(yīng)嚴格執(zhí)行無菌操作，保證一人一套管路，防止患者發(fā)生感染。作好觀察記錄，并且時刻注意觀察不良反應(yīng)的發(fā)生，如果發(fā)現(xiàn)患者出現(xiàn)四肢抽搐，血壓、脈搏變化等癥狀，應(yīng)及時告知醫(yī)生給予對癥處理。配合醫(yī)生將分離的癌旁正常的支氣管組織進行處理，用組織貼塊法、蛋白酶消化+機械刮刷法、纖支鏡刷檢法三種不同的分離培養(yǎng)方法進行原代培養(yǎng)，并按照觀察結(jié)果做好觀察記錄。支氣管上皮細胞在體外培養(yǎng)中對環(huán)境要求較高，對成纖維細胞的污染、培養(yǎng)基、生長基質(zhì)等都有特殊的要求，并且原代培養(yǎng)過程需要在無菌條件下進行，因此護士應(yīng)該確保所用物品的潔凈和無菌，實驗操作環(huán)境的無菌。

1.3.4 支氣管上皮細胞分離后患者的護理 支氣管上皮細胞分離后注意患者的傷口護理，防止感染。對患者進行飲食等其他生活護理，囑患者臥床休息，加強對患者支氣管上皮細胞分離的后續(xù)觀察，嚴密觀察生命體征，并且繼續(xù)觀察血壓、脈搏、呼吸及是否有不適癥狀出現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)問題及時處理。

2 結(jié)果

經(jīng)過有效地護理配合，34例患者均順利完成支氣管上皮細胞的分離，無不良反應(yīng)發(fā)生；組織貼塊法、蛋白酶消化+機械刮刷法、纖支鏡刷檢法3種不同的分離培養(yǎng)方法中探索出組織貼塊法獲得的支氣管上皮細胞成活率高，純度高，是一種經(jīng)濟、簡便、實用的支氣管上皮細胞培養(yǎng)方法。

3 討論

臨床研究中發(fā)現(xiàn)[4-5]，人支氣管上皮細胞原代培養(yǎng)過程中，上皮細胞的分離技術(shù)非常重要，但是其受患者的配合態(tài)度、護士對人支氣管上皮細胞原代培養(yǎng)的各種方法的了解和操作過程的熟悉等多種因素的影響，限制了人支氣管上皮細胞培養(yǎng)方法的研究。并且由于由于氣道為開放性組織，與外界大氣相通，黏膜表面有細菌定植，容易污染，對細胞的獲取量、細胞的純度和成活率都有較大的影響[6]，因此，對于儀器、設(shè)備和所使用的物品都與較高的要求，需要具有對操作熟練的護士人員進行配合，并加強對患者病情的觀察，對于出現(xiàn)不良反應(yīng)的患者，及時告知醫(yī)生給予對癥處理，才能夠保證順利完成人支氣管上皮細胞的原代培養(yǎng)，探索出一種經(jīng)濟、簡便、實用的支氣管上皮細胞培養(yǎng)方法。

在本研究中，經(jīng)過有效地護理配合，34例患者均順利完成支氣管上皮細胞的分離，無不良反應(yīng)的發(fā)生；并且通過組織貼塊法、蛋白酶消化+機械刮刷法、纖支鏡刷檢法三種不同的分離培養(yǎng)方法中探索出組織貼塊法獲得的支氣管上皮細胞成活率高，純度高，是一種經(jīng)濟、簡便、實用的支氣管上皮細胞培養(yǎng)方法。由此可見，護士加強與患者的交流，熟練掌握人支氣管上皮細胞原代培養(yǎng)的操作過程，規(guī)范操作規(guī)程，有助于人支氣管上皮細胞的原代培養(yǎng)的成功。

綜上所述，在人支氣管上皮細胞的原代培養(yǎng)中，配合相應(yīng)的護理，效果良好，為研究出經(jīng)濟、簡便、實用的支氣管上皮細胞培養(yǎng)方法奠定了基礎(chǔ)，并且為進一步研究不同的呼吸系統(tǒng)疾病提供了良好的基礎(chǔ)，值得在臨床中推廣應(yīng)用。

[參考文獻]

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[3] 張景熙，李強，白沖，等.經(jīng)纖維支氣管鏡刷檢人支氣管上皮細胞的原代培養(yǎng)[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2004，25（7）：791-792

[4] Yaghi A，Zaman A，Dolovich M.Primary human bronchial epithelial cells grown from explants[J].J Vis Exp，2010，26（37）：1789.

[5] 黃維琳.人支氣管上皮細胞體外不同培養(yǎng)基培養(yǎng)效果比較[J].黔南民族醫(yī)專學(xué)報，2007，20（4）：197-198.

[6] 王春景，劉玉琴，張宏，等.細胞培養(yǎng)操作中常見問題及處理對策[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2009，29（3）：335.

（收稿日期：2013-04-27）