阿奇霉素滴眼液的生產工藝篩選及穩定性研究

[摘要] 目的 本研究考察了生產工藝對阿奇霉素滴眼液穩定性的影響，通過考察其在高溫及光照條件下的穩定性，篩選最佳工藝，為實際生產的可行性提供了參考。 方法 模擬滴眼液的實際生產環境，設計了4種生產上可行的工藝，通過對其性狀、含量及總雜質等主要指標的考察及影響因素實驗，篩選最佳生產工藝。 結果 影響因素試驗結果顯示，阿奇霉素滴眼液對高溫、光照均較敏感；工藝篩選結果顯示，高溫滅菌對阿奇霉素影響較大。 結論 工藝3為較佳工藝。另外，阿奇霉素滴眼液應盡量避光低溫保存，生產過程應避免對主藥的高溫處理。

[關鍵詞] 阿奇霉素；滴眼液；工藝；穩定性

[中圖分類號] R743 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）13-49-04

Study on production processes and stability of azithromycin eye drops

WANG Shujuan1 ZHAO Xiaohong1 ZHANG Xiaoming2 WANG Yongjun1 YANG Xuyue2

1.Changzhou Yabang Institute of Medicine Co.，Ltd，Changzhou 213163，China；2.Jiangsu Yabang Aipusen Pharmaceutical Co.，Ltd，Yancheng 224599，China

[Abstract] Objective To investigate the effect of production processes on stability of azithromycin eye drops，we screen the optimal procedure by the influencing factor experiments including illumination and high temperature，then provide a reference to the practical production. Methods According to the drops workshop conditions，evaluate the four procedures and determine the optimization by the characteristics， assay and impurity in the influencing factor experiments. Results Azithromycin eye drops is sensitive to heat and light，and trend to be degraded with high temperature sterilization step. Conclusion The result show that the third procedure is optimal， the azithromycin eye drops should be stored at low temperatures from light； In additon，the procedure should be avoid to high temperature.

[Key words] Azithromycin；Drops；Procedure；Stability

阿奇霉素是一種大環內酯類抗生素，目前臨床作為一線抗感染藥物廣泛使用[1]。阿奇霉素可用于治療化膿性鏈球菌引起的急性咽炎、急性扁桃體炎；流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌或肺炎鏈球菌引起的細菌性急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性細菌性感染；肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌以及肺炎支原體所致的社區獲得性肺炎；由衣原體引起的尿道炎、子宮頸炎、沙眼；敏感菌所致皮膚及軟組織感染等均有較好的作用。

阿奇霉素也被研制成為滴眼劑用于細菌性結膜炎的治療。針對普通滴眼液在眼部滯留時間短、生物利用度低的缺陷，不少研究者報道了阿奇霉素緩釋滴眼液的研制，包括處方研究、藥動學研究等[2-3]。在滴眼液中加入卡波姆、聚卡波菲、泊洛沙姆等高分子聚合物，達到因環境改變而增加阿奇霉素眼部滯留的效果[4-6]。但因阿奇霉素本身對酸、堿、熱等較為敏感，尤其當阿奇霉素制備成液體制劑，其受環境如溫度、光照影響的可能性會更大[7-8]。而《中國藥典2010版二部》規定，滴眼劑必須為無肉眼可見異物的無菌制劑[9]。這要求滴眼劑在實際生產中須經無菌、無異物處理（包括過濾、高溫高壓、煮沸等手段），以符合質量標準。因此阿奇霉素滴眼液的生產工藝應得到嚴格控制，既要符合質量要求，又應避免主藥受工藝過程的影響。本研究即考察了不同生產工藝對阿奇霉素滴眼液穩定性的影響。

1 儀器與試劑

1.1 儀器及設備

SPT-500配料罐；XGP-15D回轉式清洗機；DFY-G1000臭氧滅菌柜；TCS-3電子臺秤；KAQ-洗瓶機；DSG2-80滴眼液灌裝旋蓋機；島津LC-20AT高效液相色譜儀；BP211D分析天平；梅特勒-托利多V20水分測定儀；恒溫恒濕箱SHH-SDT；G2X-9070MBE干燥箱；BC-50E低溫光照儀；凈化工作臺；冷藏柜；HTY-2000A集菌儀；微波爐；坐式自控電熱壓力蒸汽滅菌鍋；全封閉無菌試驗過濾培養器（20050404）。

1.2 試藥

阿奇霉素（石家莊制藥集團華盛制藥有限公司）；阿奇霉素對照品（中國藥品生物制品檢定所）；紅霉素標準品（中國藥品生物制品檢定所）；阿奇霉素滴眼液（自制，規格1%），乙腈（色譜純，天津科密歐化學試劑開發公司），磷酸氫二鈉（色譜純，天津科密歐化學試劑開發中心），磷酸（分析純，天津市科密歐化學試劑）；磷酸氫二銨（色譜純，天津科密歐化學試劑開發中心）；檸檬酸（分析純，湖南爾康制藥有限公司）；氯化鈉；pH 7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液。

1.3 實驗

1.3.1 樣品的制備 處方（表1）。

1.3.2 生產工藝的篩選 要達到無異物和無菌要求，不可避免地涉及到過濾除異物、高溫、高壓或煮沸滅菌等工藝過程。考慮到阿奇霉素對pH、高溫敏感、在溶液中易氧化等性質，本研究模擬實際生產的過濾和滅菌過程，設計了不同生產工藝來制備阿奇霉素滴眼液，并考察其質量和穩定性。

1.3.2.1 工藝1 按照表1所示處方，將卡波姆撒入處方量的60%的注射用水中充分溶脹，作為基質1；另將檸檬酸、阿奇霉素、依地酸二鈉、泊洛沙姆、氯化鈉、苯扎氯銨、甘露醇加入處方量的20%的注射用水溶解，經0.22μm微孔濾膜過濾，續濾液加入到基質1中，攪拌均勻。調節pH值至6.3左右，過220目篩網，密閉煮沸60 min，冷卻至室溫，加注射用水至全量。標記為樣品1。

1.3.2.2 工藝2 按照表1所示處方，將卡波姆撒入處方量的60%的注射用水中充分溶脹，過220目篩網，作為基質1；另將依地酸二鈉、泊洛沙姆407、氯化鈉、苯扎氯銨、甘露醇溶于處方量的20%的注射用水，經0.22μm微孔濾膜過濾后加入到基質1中，攪拌均勻，煮沸60 min，冷卻后作為基質2；最后將檸檬酸、阿奇霉素溶于處方量的15%的注射用水，經0.22μm微孔濾膜過濾后加入到基質2，攪拌均勻，最后調pH值至6.3左右，加注射用水至全量。標記為樣品2。

1.3.2.3 工藝3 按照表1所示處方，將卡波姆撒入處方量的60%的注射用水中充分溶脹，過220目篩網，過220目篩網，作為基質1；另將泊洛沙姆407、氯化鈉、苯扎氯銨、甘露醇溶于處方量的20%的注射用水，經0.22μm微孔濾膜過濾后加入到基質1中，攪拌均勻，煮沸60 min，冷卻后作為基質2；最后將檸檬酸、依地酸二鈉、阿奇霉素溶于處方量的15%的注射用水，經0.22μm微孔濾膜過濾后加入到基質2，攪拌均勻，最后調pH值至6.3左右，加注射用水至全量。標記為樣品3。

1.3.2.4 工藝4 按照表1所示處方，將卡波姆撒入處方量的60%的注射用水中充分溶脹，過220目篩網，過220目篩網，作為基質1；另將泊洛沙姆407、氯化鈉、苯扎氯銨、甘露醇溶于處方量的20%的注射用水，經0.22μm微孔濾膜過濾后加入到基質1中，攪拌均勻，調節pH值至6.6左右，煮沸60 min，冷卻后作為基質2；最后將檸檬酸、依地酸二鈉、阿奇霉素溶于處方量的15%的注射用水，未調pH值，測定pH值為5.27，經0.22μm微孔濾膜過濾后加入到基質2，攪拌均勻，加注射用水至全量，測定pH值約為6.2。標記為樣品4。

1.3.3 影響因素試驗 將2.1.2項下制備的樣品1～4，取適量分別于高溫60℃、強光照射（4500±500）LX等條件下放置10 d。于10 d取樣，對其性狀、含量及雜質進行考察，與0天樣品比較。

1.4 分析方法

1.4.1 含量測定 色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.01 mol/L磷酸氫二鉀溶液-乙腈（20∶80）為流動相；檢測波長為210 nm；柱溫為40℃；理論塔板數按阿奇霉素峰計算應不低于2000。測定法：精密量取本品5 mL，置50 mL量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；另取阿奇霉素標準品適量，加乙腈溶解并稀釋制成每1mL約含阿奇霉素1.0 mg的溶液，作為對照品溶液；精密量取對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。

1.4.2 有關物質測定 精密量取本品2 mL，置10 mL量瓶中，加溶劑（稱取1.73 g磷酸二氫銨，加水至1000 mL使之溶解，用氨水調節pH至10.0；轉移350 mL至一容器中，加300 mL乙腈，350 mL甲醇，混勻，即得）適量使溶解，并用溶劑稀釋定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；另取阿奇霉素對照品適量，精密稱定，用溶劑溶解并稀釋成每1毫升中約含阿奇霉素10μg的溶液，作為對照溶液。照高效液相色譜法（《中國藥典》2010年版二部附錄V D）測定，采用硅膠表面經雜化處理的十八烷基鍵合硅膠色譜柱（XBridgeTM Shield RP18，250 mm×4.6 mm，5μm）；以磷酸氫二鈉溶液（稱取1.8 g無水磷酸氫二鈉，加水至1000 mL使之溶解即得）流動相A，甲醇為流動相B，乙腈為流動相C，柱溫為45℃，檢測波長為210 nm，按表2的梯度條件進行洗脫。量取對照溶液50μL注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%；再精密量取供試品溶液與對照溶液各50μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，扣除溶劑峰和輔料苯扎氯胺（0.003%）峰外，按相對保留時間對各雜質進行歸屬，按校正后的峰面積計算，阿奇霉素B（相對保留時間約為1.16）校正后（乘以校正因子0.95）不得過1.0%，阿奇霉素GX與紅霉素A偕亞胺醚（相對保留時間約為0.92、0.42）校正后（分別乘以校正因子0.09、0.50）不得過0.5%，其它單個雜質不得過1.0%，雜質總量不得過4.0%。

2 結果

如表3樣品檢測結果，不同工藝制備的阿奇霉素滴眼液，其性狀、黏度、pH無顯著區別，但含量、雜質均有所區別。0 d的樣品2與0 d的樣品1相比，其含量、總雜有明顯差別，說明高溫滅菌對阿奇霉素影響較大，提示工藝過程應盡量避免高溫過程，或采用其他滅菌方式；0 d的樣品3與0 d樣品2相比，其含量無明顯區別，而總雜量稍有降低，提示工藝3比工藝2稍有改善，可能原因是配制檸檬酸阿奇霉素溶液時，依地酸二鈉的存在抑制了阿奇霉素的降解，提高了阿奇霉素溶液的穩定性；0 d的樣品4與0 d的樣品3相比，含量無顯著差異，總雜指標也無明顯區別，說明pH值調節的先后順序對樣品的穩定性基本無影響，考慮簡化工藝過程，確定工藝3為最佳工藝。

由表4影響因素實驗結果可知，樣品1～4在高溫60℃、光照條件下放置后，與0 d樣品相比，性狀、pH基本無變化，而含量均有所下降，總雜質也明顯增加，說明阿奇霉素滴眼液對高溫和光照敏感，應注意低溫和避光保存。

3 最佳工藝的可行性

3.1 三批生產

根據工藝篩選研究結果，對最佳工藝進行20000瓶規模的放大生產三批，進一步考察其質量和穩定性，以確定最佳工藝的可行性。具體實施處方按表5，生產步驟按1.3.2.3項下工藝3進行。經無菌灌裝后制得樣品。

3.2 影響因素實驗

取三批樣品適量分別于高溫60℃、強光照射（4500±500）LX等條件下放置10 d。于10 d取樣，對其性狀、含量及雜質進行考察，與0 d樣品比較。

3.3 實驗結果

表6為最佳工藝連續生產三批樣品的0 d測定結果，表7為最佳工藝連續生產三批樣品影響因素實驗結果。按最佳工藝連續生產三批樣品0 d結果顯示，性狀、pH值、黏度

均合格且無差異，含量和總雜質合格且無差異，說明確定的工藝穩定、可行；影響因素試驗結果顯示，高溫和光照對阿奇霉素滴眼液影響較大，含量、總雜質均有顯著變化，與前期工藝篩選結果一致。

4 討論

滴眼液不同于其他外用藥品，應符合無菌、無異物的規定，否則對人眼的傷害程度很難估計。常規的滴眼液實際生產中，為了達到無異物和無菌的目的，通常對熱穩定性好的藥物進行過濾除異物和高溫、熱壓滅菌處理。而阿奇霉素本身對酸、堿、熱較為敏感的性質，加之形成液體制劑后，受酸、堿、高溫、光照條件的影響難以估計。結合上述考慮，本研究根據滴眼液的實際生產過程，設計了4種工藝來制備阿奇霉素滴眼液，以考察生產條件和處理過程對其質量的影響。結果顯示，幾種工藝對阿奇霉素滴眼液的性狀、黏度、pH值基本無影響，但含量、雜質均有不同程度的差異。其中，工藝1與2對比，說明高溫滅菌對阿奇霉素滴眼液質量影響尤其顯著，提示工藝過程應避免高溫，滅菌過程也應避免高溫或采取其他方式；工藝2與3對比顯示，工藝3較工藝2佳，推測可能是因為配制過程依地酸二鈉抑制了阿奇霉素的氧化、降解，提高了溶液穩定性。但該推測還需進一步研究和證實。

最佳工藝（工藝3）進行了重復試產，產品質量與前期篩選結果一致，進一步證實了優選工藝的可行性。

將阿奇霉素滴眼液研制成眼部緩釋給藥的新劑型，近幾年受到廣泛關注，也出現了一些關于處方研制的文獻報道，但對其車間放大以及試產問題的研究和探討少有報道。本研究即模擬滴眼液實際生產環節設計了不同工藝，考察各工藝過程對樣品質量的影響。研究結果顯示，在滴眼液常規生產條件下，無菌環境下、采用分開配制、部分過濾、部分滅菌、避光操作等手段，才能夠制備出合格的樣品；影響因素實驗結果顯示，阿奇霉素滴眼液對高溫和光照均較敏感，應注意低溫和避光保存。

對于穩定性較差的阿奇霉素滴眼液，若要實現常規滴眼液車間的生產，需要采取復雜的配制手段、處理過程、適度的避光，同時必須嚴格做好生產環境的監控以確保無菌、無塵，才能保證最終產品質量的合格。

另外，對于越來越多的新型藥物制劑，要在常規制車間、常規設備上實現生產，往往需采取復雜、繁瑣的方法和手段以保證產品質量。因此，對于不斷發展的新型藥物制劑，實際的生產、新的設備引進以及生產環境的監控和改進也將成為一個研究的重點和熱點。

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（收稿日期：2013-05-22）