丙型肝炎檢驗(yàn)方法的臨床研究與分析

[摘要] 目的 回顧性分析丙型肝炎患者檢驗(yàn)結(jié)果，探討丙型肝炎的有效檢驗(yàn)方法。方法 對209份標(biāo)本進(jìn)行酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測抗-HCV和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法（FQ-PCR）檢測HCV-RNA，分析兩種檢測方法的有效性及差異。結(jié)果 檢出抗-HCV陽性138份（66.03%），HCV-RNA陽性128份（61.24%），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。抗-HCV與HCV-RNA均陽性者112份（53.59%），兩者均陰性的55例（26.32%）。兩種檢測方法總符合率為79.90%（配對x2=2.3810，P>0.05）。結(jié)論 ELISA和FQ-PCR法檢測HCV比較無顯著差異，但二者結(jié)合檢測可提高HCV檢出率。

[關(guān)鍵詞] 丙型肝炎；檢驗(yàn)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR法；酶聯(lián)免疫法

[中圖分類號] R512.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）13-125-02

Clinical research and analysis of detection method for Hepatitis C

OU Hui

Zhongshan Center for Disease Control and Prevention of Guangdong Province，Zhongshan 528400，China

[Abstract] Objective To retrospectively analyze the test results of patients with hepatitis C and explore the effective inspection method for hepatitis C. Methods Anti-HCV was detected by enzyme-linked immunoassay（ELISA） and HCV-RNA was detected by real-time fluorescence quantitative PCR（FQ-PCR） in 209 specimens to analyze the effectivenesses and differences of the two methods. Results 138（66.03%） cases were detected positive for anti-HCV，while 128（61.24%） cases were detected positive for HCV-RNA（P> 0.05）. 112 cases （53.59%） were positive for both Anti-HCV and HCV-RNA，while 55 cases （26.32%） were negative for both Anti-HCV and HCV-RNA.The total coincidence rate of the two methods was 79.90%（paired x2=2.3810，P>0.05）. Conclusion There is no significant difference of detecting HCV between ELISA and FQ-PCR，however，the detection rate of HCV can be improved by combination of the two methods.

[Key words] Hepatitis C； Detection； Real-time fluorescent quantitative PCR method； Enzyme-linked immunoassay

丙型肝炎（HCV）是一種由丙型肝炎病毒引起的主要經(jīng)血液傳播的慢性疾病，可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝細(xì)胞癌（HCC），對患者的健康和生命危害極大。為了掌握和了解目前丙型肝炎的有效檢驗(yàn)方法，提高HCV檢出率，筆者對209例丙肝患者臨床資料進(jìn)行回顧性分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

209份標(biāo)本來自2010年10月～2012年9月到本中心體檢人群88例，吸毒人員121例。其中男134例，女75例，年齡18～81歲，平均（32±13.8）歲。

1.2 研究方法

常規(guī)采集患者的靜脈血，離心取血清備用。采用ELISA法檢測抗-HCV抗體，試劑盒購自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司和應(yīng)用FQ-PCR法檢測HCV-RNA，采用深圳匹基生物工程有限公司的丙型肝炎核酸擴(kuò)增試劑和Research公司的Opticon2實(shí)時(shí)熒光定量檢測儀（PCR系統(tǒng)）。分析上述兩種檢測法的有效性及差異。

1.3 檢驗(yàn)方法

兩種檢驗(yàn)方法均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，在有效期內(nèi)使用，遵循同一實(shí)驗(yàn)室，同一操作者，同一批號試劑的實(shí)驗(yàn)原則。

ELISA法：任何一例檢測結(jié)果呈陽性均用同種試劑3孔復(fù)檢（采血樣管1孔、血袋樣管2孔），判定標(biāo)準(zhǔn)：陽性：樣本A值≥Cut-of，陰性：樣本A值

FQ-PCR 法：通過熒光信號的變化間接檢測HCV-RNA。判斷標(biāo)準(zhǔn)：C1值≤36.0的樣本為陽性，C1值無數(shù)值的樣本為陰性，38

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，行x2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

血清抗-HCV與HCV-RNA檢測比較：209份標(biāo)本中檢出抗-HCV陽性138份（66.03%），HCV-RNA陽性128份（61.24%），二者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。抗-HCV與HCV-RNA均陽性者112份（53.59%），抗-HCV陰性HCV-RNA陽性16份（7.66%），抗-HCV陽性HCV-RNA陰性26份（12.44%），兩者均陰性的55例（26.32%）。兩種檢測方法總符合率為79.90%（167/209）。見表1。

3 討論

丙型肝炎是一種常見的病毒性肝炎，相對于急、慢性患者，病毒攜帶者是更危險(xiǎn)的傳染源[2]。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球HCV的感染率約為3%，估計(jì)約1.7億人感染了HCV，

每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5萬例[3]，已成為當(dāng)今社會嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。由于其自然轉(zhuǎn)陰率低，治療效果差，病程遷延，且與肝硬化、肝癌等的發(fā)生及發(fā)展顯著相關(guān)，目前尚無有效的治療手段與疫苗，因此掌握和了解目前臨床常用的丙肝檢測項(xiàng)目，對健康人群進(jìn)行有效的篩選對丙型肝炎的診斷和治療具有重大的作用與意義。

目前臨床診斷HCV的主要依據(jù)仍是抗-HCV抗體和HCV-RNA。本研究對209份血清樣本采用ELISA 法檢測抗-HCV和FP-PCR法檢測HCV-RNA，檢出抗-HCV陽性138份（66.03%），HCV-RNA陽性128份（61.24%），二者比較無顯著差異（P>0.05）。兩種檢測結(jié)果均陽性者112份，均陰性55份，兩種檢測方法一致率為79.9%，比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=2.3810，P>0.05）。認(rèn)為臨床兩法結(jié)合檢測丙型肝炎病毒感染可以提高檢出率，減少漏診、誤診。

抗-HCV的檢測是最早出現(xiàn)的HCV檢測技術(shù)，經(jīng)過幾代的發(fā)展，酶聯(lián)免疫法是其中應(yīng)用最廣泛的檢測手段，在靈敏性和特異性上有了長足的進(jìn)步。但由于各廠家使用的HCV基因重組抗原的質(zhì)量和各抗原片段包被比例不同，從而使各廠家試劑的靈敏度和特異性存在一定的差異，導(dǎo)致抗-HCV檢測結(jié)果的不一致，產(chǎn)生漏檢和假陽性等[4]，同時(shí)由于其操作復(fù)雜，而且需用多種試劑及特定的儀器設(shè)備，時(shí)間長，因此具有一定的局限性。

PCR技術(shù)是目前分子生物學(xué)領(lǐng)域中靈敏度最高，特異性最強(qiáng)的一項(xiàng)檢測技術(shù)。臨床上丙型肝炎病毒的核酸檢測包括定性檢測和定量檢測，其中實(shí)時(shí)熒光定量PCR是最廣泛使用的方法。在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上添加熒光染料或熒光探針，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析[5]。在丙肝感染初期，血清中病毒含量極低，常規(guī)分子雜交技術(shù)難以檢出HCV-RNA.作為EILSA技術(shù)的有力補(bǔ)充，PCR很好的解決了這個(gè)難題。常常作為HCV感染的主要確診手段。但HCV-RNA易被血細(xì)胞中的RNA酶降解，如果被檢標(biāo)本保存不當(dāng)（如反復(fù)凍融）將影響檢測結(jié)果。

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，HCV臨床檢測技術(shù)也不斷進(jìn)步，但不管哪種檢測方法都離不開靈敏度高、早期就能作出診斷、檢測過程快速準(zhǔn)確等這些原則[6]，但要做到真正理想的HCV檢測，仍然需要一定的實(shí)驗(yàn)室條件，就目前而言，許多基層醫(yī)院還沒有普及。因此在實(shí)際工作中，可以將幾種檢測方法聯(lián)合使用，綜合判斷病人的病情，以減少初篩時(shí)的漏診、誤診率。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳錦容.丙型肝炎患者的臨床檢驗(yàn)分析[J].中國醫(yī)藥指南，2011，9 （27）：48-49.

[2] 王榮香，祝建軍，王祖芳.膠體金法快速檢測血HBV、HCV、HCV、TP在門診患者創(chuàng)傷性操作前檢測的意義[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20（6）：1419-1420.

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[4] 王福生.ELISA和PCR法篩查無償獻(xiàn)血者結(jié)果的分析[J].細(xì)胞與免疫學(xué)雜志，2010，26（4）：398.

[5] 王學(xué)波.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2010，8（9）：28-29.

[6] 馮國剛.丙型肝炎病毒臨床檢驗(yàn)技術(shù)研究進(jìn)展[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，31（17）：2781-2782.

（收稿日期：2013-04-24）