小鼠卵巢切除術中戊巴比妥鈉麻醉使用及圍手術期改良

摘要：目的 通過應用戊巴比妥鈉對10周齡的ICR小鼠實施麻醉，探索安全有效的麻醉劑量，并改良小鼠雙側卵巢切除術的圍手術期處理。方法 選用SPF級ICR品系6w齡雌性小鼠60只，隨機分為正常組和肝損傷組，正常組喂養標準飲食，肝損傷組喂養膽堿蛋氨酸缺乏飲食（Methionine and choline deficient diets， MCD diets）。4w后分別給予1%戊巴比妥鈉80mg/kg、10mg/kg腹腔注射，對麻醉效果及術后復蘇進行測試，術中術后采取保暖、傷口涂抗生素預防感染等措施，探索小鼠雙側卵巢切術圍手術期改良。結果 正常組和肝損傷組，1%戊巴比妥鈉80mg/kg和10mg/kg可保證麻醉安全有效；術中術后給予保溫，縫合時傷口涂抗生素等手段改良，可促進復蘇，大大提高存活率。 結論 在生理和病理狀態下，戊巴比妥鈉的麻醉劑量不同，尤其在肝損傷情況下，麻醉劑量應大大降低且應慎用。通過保溫、預防感染等手段對卵巢切除術的圍手術期處理進行改良，可加快術后蘇醒，提高存活率，減少術后并發癥。

關鍵詞：戊巴比妥鈉；麻醉；肝損；卵巢切除術；圍手術期

中圖法分類號：R332 文獻標志碼：A

戊巴比妥鈉是實驗中廣泛運用的麻醉劑，小劑量鎮靜，中等劑量催眠，大劑量麻醉與抗驚厥，主要抑制網狀結構上行激活系統。麻醉劑量即可顯著抑制呼吸、循環系統及基礎代謝，使心排量減少、血壓下降、體溫降低[1]；戊巴比妥鈉主要在肝臟內代謝。在肝功能損傷情況下，戊巴比妥鈉代謝受影響，在血中長時間維持較高濃度，加重呼吸循環抑制。通過對ICR小鼠麻醉實驗的研究，探討戊巴比妥鈉對ICR小鼠的麻醉效果及安全性，確定在生理和病理狀態下的安全劑量，同時在該劑量下行雙側卵巢切除術，對圍手術期處理進行改良。為科研相關動物麻醉及圍手術期處理提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 SPF級ICR小鼠60只，6w，體重30～35g，重慶醫科大學實驗動物中心提供（實驗動物生產許可證號為SCXK（渝）2012-0001，實驗動物使用許可證號為SYXK（渝）2012-0001）；戊巴比妥鈉，德國Merck公司；MCD飲食和標準飲食，美國Research Diets公司（貨號分別為A02082002B、A02082003B。MCD飲食配方：L -氨基酸171.4 g/kg、蔗糖455.3g/kg、玉米淀粉150.0 g/kg、麥芽糊精50.0 g/kg、纖維素30.0 g/kg、玉米油100 g/kg、礦物質混合物35.0 g/kg、碳酸氫鈉 7.5g/kg、維生素混合物10.0 g/k g、蛋氨酸 0 g/kg，膽堿 0 g/kg；標準飲食配方是MCD飲食配方加上蛋氨酸3 g/kg、膽堿2 g/kg）；手術器械，上海醫療器械有限公司；電子天平；分析天平；量筒；稱量紙；稱量勺；濾器；計時器；注射器。

1.2 方法

1.2.1模型建立 6w齡小鼠共60只，隨機分為兩組，每組30只。一組喂養MCD飲食4w，誘導發生非酒精性脂肪肝炎為肝損傷組，另一組喂養標準飲食4w為正常組。

1.2.2 麻醉劑濃度及配制 用分析天平對戊巴比妥鈉稱量并用氯化鈉注射液做稀釋劑配制成1%的戊巴比妥鈉溶液，用無菌濾器過濾，即配即用。

1.2.3 分組及麻醉劑量的探索 分別從正常組、肝損傷組中隨機選取20只進行預實驗，探索最佳麻醉劑量，剩下10只用于正式試驗。選取正常組小鼠20只，隨機分為4組，每組5只，戊巴比妥鈉劑量分別為：A1組40mg/kg，A2組60mg/kg，A3組80mg/kg，A4組100mg/kg；肝損傷組20只，隨機分為4組，每組5只，戊巴比妥鈉劑量分別為：B1組5mg/kg，B2組10mg/kg，B3組20mg/kg，B4組40mg/kg；于右下腹靠外側腹腔注射戊巴比妥鈉，然后行雙側卵巢切除術，進行麻醉效果的測定。麻醉前禁食12h。

1.2.4 麻醉狀態的觀察 麻醉藥物注射后初期仍然存在爬行動作，緊接著出現步態不穩、后肢無力、身體搖晃，隨后停止爬動呈側臥狀，不能翻正，部分小鼠出現肌肉顫動，刺激眼瞼無反應，角膜反射微弱，肌肉松弛，最后針刺手術部位皮膚不引起有害反射考慮進入手術所需麻醉狀態。

1.2.5麻醉效果分級 麻醉效果分級好，手術不躁動，或稍有躁動，但不影響手術；差，動物有躁動，勉強手術；極差，動物躁動劇烈，難以手術[2]。

1.2.6雙側卵巢切除術 戊巴比妥鈉腹腔注射，待小鼠進入麻醉狀態后，手術部位去毛，碘伏消毒、鋪巾，從背部中線兩側切口入[3]，切開皮膚0.5～1.0cm，逐層分離，暴露卵巢周圍脂肪組織，用手術鑷輕輕牽出脂肪組織，完全暴露卵巢，在卵巢基部（卵巢動靜脈的后方），鈍性穿過兩根手術縫合線，分別將卵巢兩側血管全部結扎，然后用剪刀將結扎中間部分包括卵巢全部剪掉，確定卵巢剪切干凈、無活動性出血后，將卵巢周圍脂肪送回腹腔，然后關閉腹腔，在切口下方與肌層之間涂抹青霉素粉末，縫合皮膚?？p合完畢后再于傷口處涂上青霉素，預防感染，同樣方法行右側卵巢切除。在術中及術后將小鼠置于白熾燈下保溫直至蘇醒。

1.2.7正式試驗 正常組與肝損傷組分別給予1%戊巴比妥鈉80mg/kg、10mg/kg腹腔注射后行雙側卵巢切除術。記錄此過程中小鼠進入深度麻醉起效時間（從麻醉劑注射完畢，至動物皮膚疼痛反應消失、眼瞼刺激無反應、肌肉松弛、呼吸平順的這段時間為起效時間） [4]、麻醉復蘇時間（從注射麻醉劑到胡須自主運動為標準）、手術時間及麻醉效果。若術中麻醉過淺，追加原總劑量的1/4。

1.3統計學處理 實驗數據經SPSS1.1統計軟件分析，計量資料采用雙側t檢驗，數據以平均值±標準差表示，P<0.05為有統計學差異。

2結果

2.1 麻醉效果觀察 正常組與肝損傷組最佳安全麻醉劑量分別為80mg/kg、10mg/kg，與正常組相比，肝損傷組戊巴比妥鈉劑量大幅度降低，見表1，表2；正常組、肝損傷組分別在上述麻醉劑量下實施雙側卵巢切除術獲得了滿意麻醉效果，見表3，保障了手術順利進行。因本手術操作時間短，術中未追加麻醉劑。復蘇后2h兩組小鼠均能自由向前爬行。

2.2 麻醉起效及復蘇時間觀察 與正常組相比，肝損傷組中戊巴比妥鈉麻醉起效時間明顯縮短，麻醉持續作用時間明顯延長，見表4，說明在肝損狀態下戊巴比妥鈉在肝內代謝出現障礙，所需麻醉劑量明顯降低，動物復蘇較慢。

2.3 手術情況 由表4可知，無論是在正常組還是肝損傷組手術持續時間約22min，動物在手術期間沒有躁動及蘇醒。手術切口較小，對動物預后較好，卵巢切除時，對卵巢周圍血管進行結扎，減少動物術后出血，縫合時在皮下及傷口表面涂抹青霉素粉末，預防感染，術中術后在白熾燈下保溫，可促進動物體循環，加快蘇醒。術后無小鼠死亡及并發感染。

3 討論

在動物實驗中實驗動物的麻醉是關鍵環節，麻醉效果的維持直接影響手術質量，進而影響實驗結果的準確性[2]。由于動物品種、品系不同，麻醉劑用量亦不同，麻醉效果和麻醉維持時間存在差異[5]。良好的麻醉效果可使動物保持制動及全身肌肉松弛，方便手術，縮短手術時間，減少術中并發癥。戊巴比妥鈉藥性相對穩定，起效快，安全劑量下不良反應較少[6]，小鼠蘇醒后活動自如。本實驗觀察發現，正常組中當戊巴比妥鈉達100mg/kg時小鼠開始出現死亡；而40mg/kg時大多達不到手術要求，劑量為80mg/kg時能滿足手術所需麻醉深度；肝損傷組中，最佳麻醉劑量為正常組的1/8，且麻醉起效時間早于正常組，麻醉維持時間較正常組明顯延長。本手術操作時間較短，正常組、肝損傷組分別在80mg/kg、10mg/kg麻醉劑量下保持了良好麻醉狀態，保證了手術的順利進行，術后均正常復蘇。小鼠在肝損傷情況下，戊巴比妥鈉的麻醉劑量大大降低，究其原因，考慮戊巴比妥鈉主要由肝微粒體細胞色素P450 （CYP）代謝而失去活性，少量以藥物原形經腎排泄[7]，在肝損狀態下其代謝發生現障礙，在血中維持較高血藥濃度。手術縫合時，在皮下、切口表面涂摸青霉素，是預防動物術后發生感染的重要手段。在本實驗中，術后沒有動物發生切口滲液、化膿等感染現象，切口均達一期愈合.動物麻醉后體溫逐漸下降[1]，在術中術后采用保溫手段，可以明顯縮短深度麻醉和麻醉后恢復自主期的時間[8]，提高成活率，本實驗中無小鼠死亡現象。卵巢切除術在研究骨質疏松癥、非酒精性脂肪肝等研究中廣泛應用[9-10]，因此對此手術進行改良探究，為動物模型構建提供技術支撐。

綜上所述，在肝功正常情況下，使用常規劑量的戊巴比妥鈉進行麻醉是安全的，而在肝功損傷情況下，戊巴比妥鈉麻醉劑量大大降低，小劑量即可達到麻醉效果，但應慎用，或者選擇其它的非肝臟代謝途徑代謝的麻醉劑。本實驗為戊巴比妥鈉在對生理及病理狀態小鼠實施麻醉時的安全有效劑量提供了參考，并改良了圍手術期處理，大大提高了動物術后存活率，為與卵巢切除相關的動物模型奠定了基礎。

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