Cripto—1在惡性卵巢上皮性腫瘤中的表達及意義

摘要：目的 分析惡性卵巢上皮性腫瘤 （Malignant ovarian epithelial tumors）組織中cripto-1的表達情況及其與惡性卵巢上皮性腫瘤臨床病理特征之間的關系。方法 采用免疫組化技術檢測50例的惡性卵巢上皮性腫瘤患者癌組織中的cripto-1表達情況，并分析其與臨床病理特征間的關系。結果 在50例標本中， cripto-1在癌組織中的表達顯著高于正常卵巢組織（χ2=41.302，P<0.01）；cripto-1的高表達分別與分化程度、TNM分期顯著有關（P<0.01）。結論 cripto-1的高表達在惡性卵巢上皮性腫瘤的發生發展中發揮重要作用。

關鍵詞：cripto-1； 惡性卵巢上皮性腫瘤 ； 臨床病理特征

卵巢癌是女性生殖系統三大惡性腫瘤之一，發病率是第三位，但死亡率卻是第一位 [1]，其轉移、擴散是惡性腫瘤的重要生物學特點，也是死亡的主要原因。近來，對卵巢惡性腫瘤早期診斷及治療的研究越來越多地注重在靶點問題上，而靶向治療是近年來研究的熱點，尋找一個有效的靶點日益成為科研工作者的一個目標，目前研究發現CR-1 在多種惡性腫瘤中呈高表達狀態，因此探討、研究其在惡性卵巢組織細胞中的表達及致癌機制，CR-1有望成為一個新的治療靶點。CR-1的生物學作用很多，包括胚胎發育中原腸胚的形成和胚層發育，哺乳動物乳腺發育和乳蛋白表達，血管內皮細胞增殖和血管生成等[2]。此外，它還與腫瘤有極高的相關性，成體內通常不表達，但卻過表達于75%～80%的乳腺癌[3]、結腸癌、肺癌以及50%～60%的卵巢癌、胃癌、胰腺癌及睪丸癌[4]。多項研究已表明從正常粘膜到癌前病變再到癌，CR-1基因的表達呈遞增趨勢，提示CR-1基因的存在可能代表著細胞生物學轉化的中間環節，CR-1陽性提示組織學尚正常的組織細胞存在癌變的可能[5] 。

1 實驗材料

1.1 病例資料 以 2006～2008年在江蘇大學附屬人民醫院婦產科手術治療，術后病理切片證實為卵巢腫瘤的患者石蠟標本為研究對象，分為三組①良性卵巢腫瘤20例（其中卵巢漿液性囊腺瘤12例，卵巢黏液性囊腺瘤8例）。②惡性卵巢上皮性腫瘤50例（其中卵巢漿液性囊腺癌36例，卵巢黏液性囊腺癌14例）。③對照組采用正常卵巢組織10例 （因子宮肌手術瘤切除的正常卵巢組織）。卵巢癌組織按國際婦產科聯盟（FIGO2OOO年 ）臨床分期及病理分級標準：臨床分期分為早期 （I～II期 ）22例，晚期（III～IV期）28例；組織學分級分為高分化20例，中、低分化30例；盆腔淋巴結轉移陽性者23例，未轉移者27例。50例腫瘤患者年齡24～77歲，平均50.5歲。

1.2主要試劑 Cripto-1抗體，兔抗人單克隆抗體 ，濃縮液 ，親和純化抗體。

其它：粘片劑（多聚賴氨酸）、二甲苯、無水乙醇、蘇木精、雙氧水、蒸餾水、中性樹膠等。

2 實驗方法

2.1.石蠟切片的制作 蠟塊修整后，用石蠟切片機連續切制成厚度為 4μm 石蠟切片 4 張。

2.2 HE 染色

2.3 免疫組化染色 采用免疫組化（二步法），按試劑盒提供的說明書進行。本實驗采用己知陽性的卵巢癌切片（試劑公司提供）作為陽性對照；陰性對照組選用 0.01M PBS 緩沖液代替一抗，其余步驟不變，以除外假陽性結果。

3 結果判斷標準

用低倍鏡和高倍鏡觀察切片，判斷標準：采用半定量積分法，按著色細胞百分數計分：著色細胞﹤10%為 0 分；≥10%但≤40%為 1 分；﹥40%但﹤70%為 2 分；≥70%為 3 分。按著色強度計分：無著色為 0 分；淡黃色為 1 分；棕黃色為 2 分。將著色細胞百分數計分與著色強度計分相乘作為總計分。總計分為 0 分為陰性（-）；1～3 分為弱陽性 （+）； 4 分以上為強陽性 （++）。最后統計時以 （-）判定為陰性，（+）和（++）判定為陽性。

4 數據處理

應用 SPSS13.0 統計軟件，進行 χ2檢驗和相關性分析用，以 P<0.05為差異有統計學意義，P<0.01 為差異具有顯著性。

5 結果

5.1不同類型卵巢組織中 Cr-1的表達（見表1） Cr-1的表達：Cr-1陽性表達均位于細胞漿，染色深度不等，為淡黃至棕黃色（見圖1～4）。在10例正常卵巢組織Cr-1不表達，在20例卵巢良性腫瘤中Cr-1的表達數為0例；在50例卵巢癌中Cr-1陽性表達數為37例（74.0%）。Cr-1在卵巢癌組的表達率均高于正常組、良性腫瘤組，差異具有顯著性（P<0.01 ）。

5.2 卵巢癌中 Cr-1表達與臨床病理參數的關系 （見表2） 在22例早期卵巢癌組織中，Cr-1陽性表達數分別為12例（54.55%）；28例晚期卵巢癌組織中， Cr-1陽性表達數分別為 25例（ 89.29%）。隨著臨床分期的增高，Cr-1陽性表達率升高，Cr-1的表達與臨床分期差異具有顯著性 （P<0.01）。在30例中低分化卵巢癌中，Cr-1蛋白陽性表達數為26 例 （86.67%） ； 20例高分化卵巢癌 中 ，Cr-1 蛋白陽性表達數為11例（ 55.00% ），提示分化越差， Cr-1的陽性表達率增加，陽性表達率差別具統計學意義（P<0.05） 。在14例黏液性癌中Cr-1陽性表達數為8例（57.14%）；36例漿液性癌陽性表達數為25例（80.56%），Cr-1的表達與組織分型差異無顯著性（P>0.05）。在23例已發生淋巴結轉移的卵巢癌組織中，Cr-1的陽性表達數為21例（91.30%）；27例未發生淋巴結轉移的卵巢癌組織中，Cr-1陽性表達數為16例（59.26%）。隨著淋巴結轉移的出現，Cr-1的陽性表達率明顯升高，兩組間表達差異有統計學意義（P<0.05）。

6 討論

Cripto-1基因有兩種表現形式，一種是由2kb mRNA編碼的原癌基因，包含6個外顯子。另一種是由2kb mRNA編碼的原癌基因，與其相比缺乏2個外顯子[6]。大量研究證實，CR-1 與腫瘤有極高的相關性，成體內通常不表達，但卻過表達于75%～80%的乳腺癌、結腸癌、肺癌以及50%～60%的卵巢癌、胃癌、胰腺癌及睪丸癌。此外在在宮頸上皮內瘤樣病變及乳腺導管原位癌等癌前病變中的表達水平亦顯著提高[8]。CR-1 蛋白內部具有標志性的 EGF-CFC 功能結構域，可與細胞表面多種受體結合行使功能。它既可以作為一種分泌因子，也可作為細胞表面組分調節Nodal、Vg1、GDF1 與 Activin 受體的結合，也可作為輔助因子參與TGF-β家族成員的多個細胞信號通路的傳遞過程，還參與活化多條控制細胞增殖與凋亡能力的信號通路。此外，Cripto-1在結腸腺瘤、胃腸上皮化生及乳腺導管原位癌等癌前病變中的表達也高于正常組織。多項研究已表明，從正常組織到癌前病變再到癌，Cripto-1的表達呈遞增趨勢，提示Cripto-1的存在可能是細胞生物學轉化的中間環節，Cripto-1陽性提示組織學尚正常的組織細胞存在有癌變的可能性。越來越多的研究證據表明，Cripto-1是一個潛在的靶抗原，其相關基因的檢測有助于惡性腫瘤的早期診斷、評估預后和療效預測，靶向干預Cripto-1活性在惡性腫瘤生物治療中具有良好應用前景。

本研究采用免疫組織化學技術分析惡性卵巢上皮性腫瘤 （Malignant ovarian epithelial tumors）組織中cripto-1的表達情況及其與惡性卵巢上皮性腫瘤臨床病理特征之間的關系[7]，發現了在惡性卵巢上皮性腫瘤中cripto-1的高表達情況與分化程度、淋巴結轉移、TNM分期相關，顯示的cripto-1表達量與惡性卵巢上皮性腫瘤病理特征具有重要的關系，為卵巢癌的治療尋找新的靶點。

綜上所述，本研究結果提示，cripto-1的異常高表達可能參與了惡性卵巢上皮性腫瘤的發生發展，這為進一步的功能學研究和擴大實驗提供了線索。也為尋找到新的惡性卵巢上皮性腫瘤治療靶點提供了一種新的思路。

參考文獻：

[1]Jemal A. Cancer statistics，2010[J].CA Cancer J Clin，2010，60（5）：277-300.

[2]Park JE. Annexin A. Is a Potential Angiogenic Mediator[J].Biochem Biophys Res Commun，2005，337（4）：1283-1287.

[3]Beddington RS. Axis development and early asymmetry in mammals Cell[J].1999，22，96（2）：195-209.

[4]Strizzi L. Prognostic Factors Affecting the Outcome of Nasopharyngeal Carcinoma[J].Jpn J Clin Oncol，2003，33（10）：501-508.

[5]Liu Q. Role of micro RNA let-7 and effect to HMGA2 in esophageal.

[6]Bosch FX. E-cadherin is a selective and strongly dominant prognostic factor in squamous cell carcinoma：a comparison of E-cadherin with desmosomal components [J].Int J Cancer，2005，146（5）：779-790.

[7]徐嶸嶸.Cripto-1在子宮頸癌中的表達及臨床意義[J].臨床與實驗病理學雜志，2010，08.

編輯/王敏