miR—185在卵巢癌組織中的表達及其臨床意義

摘要：目的 探討miR-185（Homo sapiens miR-185，miR-185）在卵巢癌組織中的表達及其臨床意義。方法 運用qRT-PCR檢測miR-185在卵巢癌及癌旁組織中的表達情況，分析其表達與卵巢癌臨床分期及淋巴結轉移間的關系。結果 qRT-PCR檢測顯示，在37例卵巢癌組織中miR-185的表達值為（0.57±0.06），與癌旁對照組（1.02±0.11）相比，差異有統計學意義（P<0.01）；miR-185在卵巢癌臨床Ⅲ/Ⅳ期、Ⅰ/Ⅱ期表達值分別為（0.22±0.02）、（0.74±0.09），差異有統計學意義（P<0.01）；淋巴結轉移的與無淋巴結轉移miR-185表達值分別為（0.38±0.05）、（0.64±0.08），有淋巴結轉移的miR-185表達水平低于無淋巴結轉移，二者差異有統計學意義（P<0.01）。miR-185的表達隨著卵巢癌臨床分期演進而降低。結論 miR-185與卵巢癌的發生、臨床進展、轉移密切相關，其可能成為卵巢癌治療、預后判斷的潛在生物學指標。

關鍵詞：miR-185；卵巢癌；生長與侵襲

miRNAs是一組長度約為22個核苷酸的非編碼單鏈RNA，其作為基因表達的一個重要調控因子，通過對靶基因的翻譯抑制和mRNA降解從而在轉錄后水平調控基因的表達。miRNA參與多種細胞生物學過程，包括細胞的分化、增殖、遷移、代謝、以及調亡。以前的研究已經證實miRNA在腫瘤中的潛在作用，并指出miRNA的表達異常與腫瘤的發生發展相明顯相關。miRNA通過調控腫瘤相關基因以及不同的通路在癌癥的發病機理中起重要作用[1-2]。

miR-185位于染色體22q11.21，是一個具有抑癌特性的miRNAs。研究報道miR-185在很多癌癥中表達下調，包括前列腺癌、膠質瘤、卵巢癌以及肺癌等[3-5]。這說明miR-185表達下調可能在腫瘤的發生發展中具有重要作用。本研究通過采用qRT-PCR研究檢測miR-185在卵巢癌組織中的表達，分析其表達與臨床分期及淋巴結轉移間的關系，探討卵巢癌發病的分子機制和尋找更有效的治療方法提供實驗依據。

1資料與方法

1.1標本收集 標本均取自于本院2009年7月～2012年10月卵巢癌和癌旁正常組織標本46例，組織立即放于液氮保存。所有組織標本活檢后均經病理學診斷確認。

1.2逆轉錄 常規Trizol試劑（Invitrogen公司）抽提組織總RNA。紫外分光光度計測定RNA純度和濃度。逆轉錄按轉錄miRNA逆轉錄試劑盒（吉瑪生物公司）說明書進行。反應體系：5×RT緩沖液4 μL、10 mmol/L dNTP 0.75 μL、25 mmol/L鎂離子3 μL、1 μmol/L miRNA特異性RT引物1.2 μL、40 U/μl RNA酶抑制劑 0.25 μL、200 U/μL MMLV逆轉錄酶0.2 μL、RNA 1 μg，無酶水補至20 μL。反應條件：16℃ 30 min，42℃ 30 min，再以85℃ 10 min。產物-20 ℃凍存備用。

1.3 qPCR檢測 采用Biorad公司的定量PCR儀 IQ5進行定量PCR反應。反應體系（20 μL）：2×PCR緩沖液10 μL、RT產物1μl、5 μmol/L miRNA特異性PCR引物0.4 μL、5 U/μL Taq酶 0.2 μl、無酶水加至20 μL。反應條件： 先95℃ 3 min，然后95℃ 12 s、62℃ 35 s，共40個循環。miR-185的相對表達量通過公式2-△Ct計算，其中， Ct=miR-185平均Ct值-U6平均Ct值。

1.4 統計學分析 采用統計軟件SPSS 13.0進行統計學分析，結果以（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗。當分析miR-185的表達水平與患者預后關系，采用Kaplan-Meier生存曲線分析。P<0.05被認為差異具有統計學意義。

2結果

2.1 miR-185在卵巢癌組織中的表達情況 提取37例卵巢癌組織以及相應對照正常組織總RNA，運用qRT-PCR檢測miR-185正常正常組織和卵巢癌組織中的表達情況，在目的基因與內參照基因擴增效率相同的情況下，測定循環閾值（Ct值），2-△Ct表示miR-185的相對表達量。結果顯示，與對照正常上皮組織相比，miR-185在卵巢癌組織表達普遍下調。卵巢癌組織中miR-185平均表達量明顯低于對照正常組織，分別為（0.22±0.02）、（0.74±0.09），差異具有統計學意義（P<0.01）。

2.2 miR-185表達水平與卵巢癌臨床病理參數之間的關系 miR-185在卵巢癌臨床Ⅲ/Ⅳ期、Ⅰ/Ⅱ期表達值分別為（0.22±0.02）、（0.74±0.09），差異有統計學意義（P<0.01）；淋巴結轉移的與無淋巴結轉移miR-185表達值分別為（0.38±0.05）、（0.64±0.08），有淋巴結轉移的miR-185表達水平低于無淋巴結轉移，二者差異有統計學意義（P<0.01）。miR-185的表達隨著卵巢癌臨床分期演進而降低。

3討論

卵巢癌在女性生殖腫瘤中的發病率居第6位，每年大約有230 000例新發病例[6]。卵巢癌的早期生存率很高，但是由于大多數患者就診時已是晚期，而且大部分患者對目前的化療案產生耐藥，所以化療藥物對卵巢癌患者的治療成功率很低[7]。每年約有140 000位患者死于卵巢癌，嚴重威脅著人民的生命健康[6]。

近來miRNAs成為分子生物學研究的焦點，研究表明很多miRNAs在腫瘤中表達異常并且特異性miRNA表達的改變在腫瘤的發生和發展中發揮重要的作用。研究表明，在前列腺癌中，miR-185通過直接靶向AR抑制癌細胞的增殖，遷移，侵襲以及致瘤活性[3]。在膠質瘤中，高表達miR-185可抑制癌細胞的侵襲，抑癌基因LRRC4表達的改變是導致miR-185表達失調的重要原因，且LRRC4和 miR-185低表達與膠質瘤患者預后差相關[4]。本文運用qRT-PCR首次檢測miR-185在卵巢癌組織中的表達情況，并分析其臨床意義。結果顯示與對照正常上皮組織相比，miR-185在卵巢癌組織表達明顯下調，差異具有統計學意義（P<0.05）；此外，miR-185隨著卵巢癌的臨床分期進展而表達降低，且有淋巴結轉移的卵巢癌表達明顯低于無淋巴結轉移的卵巢癌，差異有統計學意義（P<0.01）。

我們的結果顯示miR-185在卵巢癌與對照正常組織存在表達差異，具其表達水平與患者臨床進展和淋巴結轉移相關，這表明miR-185可能作為癌基因參與卵巢癌的發生發展，并且可能成為卵巢癌診斷和預后判斷新一代腫瘤分子標志物及卵巢癌治療靶點。當然日后仍需大量實驗進行驗證。

參考文獻：

[1]Tang H， Deng M， Tang Y， et al. miR-200b and miR-200c as prognostic factors and mediators of gastric cancer cell progression.Clin Cancer Res. 2013； 19（20）：5602-5612.

[2]Tang H， Kong Y， Guo J， et al. Diallyl disulfide suppresses proliferation and induces apoptosis in human gastric cancer through Wnt-1 signaling pathway by up-regulation of miR-200b and miR-22. Cancer Lett. 2013； 340（1）：72-81.

[3]Qu F， Cui X， Hong Y， et al. MicroRNA-185 suppresses proliferation， invasion， migration， and tumorigenicity of human prostate cancer cells through targeting androgen receptor. Mol Cell Biochem. 2013；377（1-2）：121-130.

[4]Tang H， Wang Z， Liu X， et al. LRRC4 inhibits glioma cell growth and invasion through a miR-185-dependent pathway. Curr Cancer Drug Targets. 2012；12（8）：1032-1042.

[5]Ak？akaya P， Ekelund S， Kolosenko I， et al. miR-185 and miR-133b deregulation is associated with overall survival and metastasis in colorectal cancer. Int J Oncol. 2011；39（2）：311-318.

[6]Wright JD， Shah M， Mathew L， et al. Fertility preservation in young women with epithelial ovarian cancer. Cancer. 2009；115（18）：4118-4126.

編輯/肖慧