芍藥苷對LPS 誘導(dǎo)H9C2 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用

李 金 唐其柱 劉 源 焦 蓉

芍藥苷是一種單萜類糖苷化合物，其藥理作用廣泛，不僅具有降低血液黏度、抗血小板聚集、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)及抗驚厥等多種生物學(xué)效應(yīng)，還有抗炎、抗氧自由基作用［1］。由此推測，芍藥苷可能對心肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷具有改善作用。有研究表明，LPS 侵入機(jī)體后不僅參與炎癥反應(yīng)，還可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生［2，3］。因此本實驗就嘗試LPS 刺激H9C2 細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷反應(yīng)，來探討芍藥苷對H9C2 細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷是否具有保護(hù)作用并初步探討其作用機(jī)制。

材料與方法

1.藥品及試劑:芍藥苷(上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，100mg，純度＞97%)、胰蛋白酶消化液(Gibco 公司)、新生牛血清(Gibco 公司)、DMEM 培養(yǎng)基(Corning Cellgro 公司)、雙抗(Hyclone 公司)、細(xì)胞計數(shù)儀(Invitrogen 公司)、流式細(xì)胞儀(美國BD FACScalibur 公司)、熒光酶標(biāo)儀(Synergy HT 公司)、DCFH-DA(碧云天生物技術(shù)研究所)。

2.H9C2 細(xì)胞的培養(yǎng):H9C2 細(xì)胞購自于中國科學(xué)院，用含10%胎牛血清，1%的青霉素(10000U/L)/鏈霉素(10000μg/ml)的DEME 培養(yǎng)基于37℃、5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。傳3 ～5 代，待狀態(tài)穩(wěn)定后用0.25%胰蛋白酶消化制成單細(xì)胞懸液，傳到96 孔培養(yǎng)板上，每次傳代時細(xì)胞密度控制在1 ×105/ml，每孔100μl，進(jìn)行分組實驗。

3.細(xì)胞培養(yǎng)分組及CCK8 檢測:(1)觀察不同濃度的芍藥苷藥物刺激對胞內(nèi)ROS 含量的影響:隨機(jī)分為正常對照組和LPS 刺激組。①正常對照組:細(xì)胞饑餓18h 后僅給予無血清的培養(yǎng)基處理(下同);②LPS 刺激組:細(xì)胞加藥前饑餓18h(下同)，加入10mg/ml 的LPS，處理2h;③芍藥苷組:細(xì)胞饑餓后加入50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml 不同濃度的芍藥苷預(yù)培養(yǎng)60min，棄去培養(yǎng)基后同時加入與對照組相同濃度的LPS及相對應(yīng)濃度的芍藥苷。……