腫瘤轉移相關分子與鼻咽癌轉移關系的研究進展

譚俞佳 綜述，江青山 審校(南華大學附屬第一醫院耳鼻喉科，湖南 衡陽 421001)

鼻咽癌(carcinoma of nasopharynx,NPC)是國內高發腫瘤之一，從流行病學調查資料顯示，廣東、廣西、湖南、福建、江西為世界鼻咽癌高發區；男性發病率約為女性的2～3倍，40～50歲是高發年齡組。鼻咽癌98%屬低分化鱗狀細胞癌，首選放射治療，放療5年生存率為50%左右[1]，局部復發與遠處轉移是主要死亡原因[2]，約60%的患者在確診鼻咽癌時已發生淋巴結轉移，導致治療的失敗。腫瘤的浸潤、轉移是連續而又復雜的過程，隨著人類基因組計劃的完成，吸引了眾多的研究者從基因組學和蛋白質組學方面突破對鼻咽癌的傳統認識，探索鼻咽癌轉移的相關分子及其機制，從而改變治療方式。

1 鼻咽癌轉移相關基因

1.1 CD44基因與鼻咽癌

CD44基因位于人類11號染色體短臂(11p13)，其編碼產生的單鏈糖蛋白是一種重要的細胞粘附分子，在多種生理及病理進程中均發揮作用。免疫學研究發現，CD44信號通路的激活會使細胞的形態發生變化，如出現偽足、使細胞運動能力增強等。近年來研究發現其與惡性腫瘤細胞的浸潤與轉移關系密切[3]。CD44在鼻咽癌組織中表達已得到證實。

王爽等[4]發現高轉移特性的鼻咽癌細胞中CD44的表達明顯高于低轉移特性的鼻咽癌細胞；利用帶有CD44基因的脂質體轉染低轉移特性的鼻咽癌細胞，發現其轉移能力明顯增強，進一步發現其間質標志物基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)的表達明顯增高，表明CD44與鼻咽癌轉移關系密切，且通過調控上皮細胞間質化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)進程影響鼻咽癌細胞的轉移能力。因此，臨床上檢測CD44的表達，可以預測鼻咽癌細胞轉移能力，從而預測患者的預后情況；通過靶向抑制CD44，可以抑制EMT的進程，從而降低鼻咽癌的轉移率，提高5年生存率。

1.2 EZH2與鼻咽癌

EZH2位于人染色體7q35，與胚胎發育、細胞分化、腫瘤干細胞的自我更新及多種惡性腫瘤的發病密切相關。其編碼的蛋白可通過催化DNA甲基化來阻止轉錄子與啟動子區結合，導致基因的沉默。多項研究表明其高表達可以促進癌細胞的浸潤和轉移。比較基因雜交技術(comparative genomic hybridization，CGH)證實此染色體區帶可能存在與鼻咽癌轉移相關的基因。

梁碧君等[5]收集臨床標本發現鼻咽癌組織中EZH2表達明顯高于炎性組織；在細胞實驗中發現具有高轉移特性的鼻咽癌細胞中EZH2表達明顯高于低轉移特性的鼻咽癌細胞；臨床隨訪資料分析發現高表達EZH2蛋白的鼻咽癌患者5年生存率明顯低于低表達者。進一步實驗證實EZH2的沉默使鼻咽癌細胞轉移能力減弱，且上皮標志物的表達增高、間質標志物表達降低；而高表達則明顯促進鼻咽癌細胞的轉移，且上皮間質標志物的表達呈現相反的結果，表明EZH2可通過調控EMT來影響鼻咽癌的轉移。因此，臨床上也可將EZH2作為預測鼻咽癌患者預后情況的指標。且抑制EZH2可降低鼻咽癌的轉移率。

1.3 THY1與鼻咽癌

THY1基因也稱白細胞分化抗原CD90，位于人染色體11q22～23區域，該區域與鼻咽癌密切相關。THY1編碼的蛋白質屬于免疫球蛋白超家族中的一員，是一種高度糖基化的細胞表面糖蛋白。THY1與機體免疫反應、細胞增殖、分化、細胞因子釋放、血管生成及凋亡等細胞功能有重要關聯。

Lung等[6]發現在鼻咽癌組織及細胞中THY1的表達明顯低于正常組織與細胞，且THY1表達的缺失可能與其啟動子高度甲基化有關。具有高轉移特性的鼻咽癌細胞在轉染THY1基因后，呈現出生長速度減慢及轉移率降低的特點，表明THY1基因能夠抑制鼻咽癌細胞的生長及轉移，可作為鼻咽癌的一個候選抑癌基因。

1.4 NGX6與鼻咽癌

鼻咽癌相關基因6(nasopharyngeal carcinoma associated gene 6,NGX6)是新的轉移相關抑癌基因，可抑制腫瘤的增殖、侵襲和轉移能力[7]。目前研究已證實NGX6基因的表達可抑制鼻咽癌的增殖，侵襲和轉移能力，其機制可能是通過調節多種腫瘤相關基因的表達，引起信號轉導通路分子改變，在調控腫瘤細胞周期，腫瘤細胞粘附遷移及腫瘤血管生成等環節發揮重要作用。

吳靜嫻等[8]發現在非轉移鼻咽癌組織中NGX6表達高于轉移鼻咽癌組織，其蛋白陽性表達率隨T分期、N分期的增高呈下降趨勢；NGX6蛋白的表達與鼻咽癌組織微淋巴管密度呈負相關性，由此推測NGX6抑制鼻咽癌組織淋巴管的生成而抑制其侵襲轉移。隨著抑癌基因NGX6在鼻咽癌發生發展，侵襲及轉移中作用機制的逐步明確，NGX6蛋白的檢測可能在輔助鼻咽癌淋巴結轉移的風險預測和預后判斷方面發揮作用，并可能成為鼻咽癌基因治療中新的重要靶點。

2 鼻咽癌轉移相關分子

2.1 LMP1與鼻咽癌

潛伏性膜蛋白1(latent membrane protein 1，LMP1)是EB病毒基因組中發現的第一個能改變細胞形態的癌基因，與鼻咽癌的侵襲和轉移密切相關。LMP1的基因位于EB病毒基因組U5-TR區的BNLF-1基因，由386個氨基酸殘基組成的跨膜蛋白[9]。

LMP1是EB病毒編碼的主要致瘤蛋白，其陽性表達是誘導鼻咽癌侵襲轉移的重要因素。李剛等[10]發現抑制LMP1的表達，則鼻咽癌細胞的增殖、轉移能力減弱。Wang等[11]發現LMP1可通過激活MEK/ERK1/2和JAK3信號傳導通路，活化STAT3結合位點，上調血管內皮生長因子的表達和分泌，為瘤細胞轉移提供血管基礎。還可通過激活JAK/STAT、AP-1、NF-κB、PI-PLC-PKC等多條細胞內信號傳導通路，促進鼻咽癌細胞的EMT進程，賦予鼻咽癌細胞高侵襲高轉移能力；Liu等[12]則發現LMP1可上調鼻咽癌細胞MMP9的活性，促進EMT進程；阻斷轉錄因子e-Jun和Ets1的表達，LMP1對MMP9活性的誘導降低，表明了e-Jun和Ets1調控鼻咽癌MMP9的表達。申志華等[13]研究認為EBV-LMP1可通過上調Ezrin的表達來介導對鼻咽癌轉移能力的影響，Ezrin蛋白可通過與CD44分子、E-鈣粘素、整合素等細胞表面分子形成復合體，調節細胞粘附，參與腫瘤細胞信號轉導。

2.2 VEGF與鼻咽癌

血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是血管內皮細胞特異性肝素結合生長因子，是目前已知的作用最強、特異性最高的促血管生成因子。腫瘤轉移與其誘導血管增生的能力關系密。腫瘤血管增生一方面促進了腫瘤組織生長，另一方面為腫瘤細胞轉移提供了重要通路。已有研究顯示VEGF與腫瘤的發生、發展、治療及預后關系密切。

姜武忠等[14]發現VEGF在鼻咽癌組織中的表達率高于炎性及正常鼻咽上皮組織；頸淋巴結轉移的鼻咽癌組織中表達高于未轉移組織；晚期鼻咽癌組織中表達顯著高于早期鼻咽癌組織，表明VEGF的高表達與鼻咽癌的浸潤發展及轉移密切相關。孫軍[15]比較鼻咽癌放療患者血清中VEGF發現，放療前VEGF量高于正常人，放療后VEGF減少，復發患者VEGF量較未復發者量多。它顯示檢測VEGF對預測鼻咽癌預后有一定的價值，可作為預后不良的指標之一。

2.3 PFK1與鼻咽癌

6-磷酸果糖激酶-1(6-phosphofructo-1-kinase,PFK1)是糖酵解途徑中的第二個限速酶，是糖酵解途徑三個限速酶中最重要的一個。近年來研究發現惡性腫瘤細胞中普遍存在糖酵解途徑的增強，而PFK1與惡性腫瘤關系密切,在很多腫瘤組織中，PFK1表達明顯增強，在腫瘤細胞的糖酵解和細胞增殖中起重要作用。

李爍等[16]發現PFK1在鼻咽癌組織中表達高于鼻咽部炎性組織；鼻咽癌淋巴結轉移組織中表達高于未轉移組織，說明PFK1與鼻咽癌轉移關系密切。PFK1表達的增高促進了腫瘤組織中糖酵解比例的增高，能夠為腫瘤的侵襲和轉移提供能量支持，而糖酵解產生的酸性代謝產物可以破壞正常的細胞基質，為侵襲和轉移提供有利的環境。因此，PFK1可能是鼻咽癌轉移的分子標志之一。

3 微小RNA與鼻咽癌

微小RNA(microRNA，miRNA)是一類編碼長度為17～25個核苷酸組成的非編碼單鏈RNA分子，參與基因表達調控，尤其在轉錄后調控中發揮重要作用。miRNA能與下游靶基因mRNA的3’UTR堿基配對，引導沉默復合物抑制mRNA的翻譯或降解mRNA，這種特性使其參與生物合成和腫瘤的發展過程。在已注解的miRNA分子中，有超過50%的miRNA定位于腫瘤相關基因位點，說明miRNA在腫瘤的發生發展中起著至關重要的作用。很多研究表明，miRNA在鼻咽癌組織和細胞中表達高于正常鼻咽上皮組織，扮演了抑癌基因或原癌基因的角色，并通過多種分子機制參與調控鼻咽癌的浸潤與轉移。它們極其可能成為未來鼻咽癌的生物標志物和治療靶點。

Luo等[17]發現miR-149在鼻咽癌細胞中的表達明顯高于正常鼻咽上皮細胞。miR-149過表達能增強鼻咽癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力；反之，抑制miR-149的表達則出現相反的結果。進一步實驗研究發現。miR-149能降低E-鈣粘蛋白的表達，說明其可通過調節EMT在鼻咽癌的侵襲轉移中發揮重要作用。

Li等[18]利用miRNA芯片篩選發現miR-18a在鼻咽癌組織中表達上調。Luo等[19]研究發現高表達miR-18a能促進鼻咽癌細胞的增殖、遷移和侵襲，反之則降低。進一步研究發現miR-18a通過Dicer1促進鼻咽癌的發展。Dicer1是miRNA合成酶的關鍵分子，在miRNA合成過程中，Dicer1控制成熟的miRNA合成。miR-18a下調Dicer1的合成，從而下調miR-200家族的表達，而miR-200家族能調節EMT標志分子物的改變，說明miR-18a的調控網絡中包括促進EMT進程，從而促進鼻咽癌的轉移。

Zhang等[20]發現miR-144在鼻咽癌組織中表達上調，實驗發現沉默miR-144可以減少鼻咽癌細胞的增殖、侵襲和轉移。進一步研究其作用機制發現，它主要通過抑制磷酸酶及張力蛋白同源性基因(phosphatase and tensin homolog,PTEN)這一抑癌基因來增加磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(pAKT)和周期素D1向G1期轉化，并且通過降低E-鈣粘素促進EMT進程。

綜上所述，多種鼻咽癌轉移相關分子參與了調控EMT進程，且調控機制多樣，各種相關分子相互協同或制約，構成錯綜復雜的調控網絡。鼻咽癌的侵襲轉移是一個復雜的過程，對其相關分子的不斷了解，為腫瘤標記物的篩選及藥物治療靶點的選擇成為可能；也為治療后轉移風險的預測提供了更多的科學依據。但目前研究發現的鼻咽癌轉移相關分子缺乏特異性，難以應用于臨床實踐。因此，進一步尋找特異性鼻咽癌轉移相關分子標志物，并深入探討其作用機制仍是未來鼻咽癌防治研究的重點。

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