胰島β細(xì)胞發(fā)育相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展

相 磊，袁記方，黃麗潔

(中國人民解放軍總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，北京 100853)

胰腺是人體內(nèi)唯一同時具有內(nèi)分泌與外分泌兩種分泌功能的器官。胰腺的內(nèi)分泌功能由Langerhans小島(即胰島)中的許多不同類型的內(nèi)分泌細(xì)胞完成，這些內(nèi)分泌細(xì)胞主要包括α細(xì)胞、β細(xì)胞、δ細(xì)胞和PP細(xì)胞等。內(nèi)分泌細(xì)胞在胰腺細(xì)胞總數(shù)中占較小的比例，研究顯示在成年大鼠中內(nèi)分泌細(xì)胞約占4%[1]。胰島β細(xì)胞主要具有分泌胰島素的功能，胰島素是調(diào)節(jié)血糖濃度、促進(jìn)合成代謝、調(diào)節(jié)細(xì)胞分化和生長發(fā)育的重要激素，體內(nèi)胰島素的絕對或相對不足，將導(dǎo)致糖尿病的發(fā)生。糖尿病目前在我國的發(fā)病率高達(dá)11.6%，已經(jīng)成為我國的一項嚴(yán)重公共健康問題。胚胎期胰腺的正常發(fā)育關(guān)系著成年期生物學(xué)功能的發(fā)揮，因此，對胰島β細(xì)胞發(fā)育的研究可以為糖尿病的臨床治療提供基礎(chǔ)資料。

1 胰腺β細(xì)胞的胚胎發(fā)育

胰腺起源于腸管內(nèi)胚層(gut endoderm)，它是脊椎動物原腸胚形成后三個胚層之一，經(jīng)過一系列的信號調(diào)節(jié)和逐級轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)最終發(fā)育為成熟的器官。大鼠的胰腺產(chǎn)生最早是在胚胎的E8～E8.5 d，在胚胎的第E13.5 d大部分分泌激素細(xì)胞(α、β、δ和PP細(xì)胞) 開始出現(xiàn)并組成內(nèi)分泌胰島[2]。胰腺β祖細(xì)胞的發(fā)育成熟需要經(jīng)過兩次的細(xì)胞躍遷，首先在Sox9、Sox4、NKx2.2、NKx6.1、GATA4、GATA6、Hlxb9、Pdx1、Ptf1α、Tcf2、Foxa2與HNF6等因子的調(diào)控下形成第一代胰腺祖細(xì)胞。繼而經(jīng)過Sox9、Sox4、GATA6、Pdx1、Tcf2、Foxa2與HNF6等轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控形成第二代胰腺祖細(xì)胞，第二代胰腺祖細(xì)胞在Ngn3、Pdx1、Arx、Pax4、Pax6、NKx2.2和NKx6.1的調(diào)控下發(fā)育為幼稚型的胰腺β細(xì)胞，最后幼稚型胰腺β細(xì)胞在Nkx6.1、Pdx1、ISI、MafA、Pbx1、Hlxb9等轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控下發(fā)育為成熟的胰腺β細(xì)胞。

2 胰腺β細(xì)胞的發(fā)育調(diào)控

2.1 Pdx1

Pdx1基因(pancreatic-duodenal homeobox 1 gene，Pdx1)中文譯名為胰十二指腸同源盒基因-1，是同源盒家族中的一員，Pdx1還有許多其它命名，如胰島素啟動子因子-1(IPF-1)、胰島/十二指腸同源盒-1(IDF-1)、生長激素抑制激素轉(zhuǎn)錄因子-1(STF-1)、胰島素上游因子-1(IUF-1)和葡萄糖敏感因子。

Pdx1在胚胎發(fā)育過程中促進(jìn)胰腺的早期發(fā)育和晚期β細(xì)胞分化，在成熟β細(xì)胞中，Pdx1具有維持β細(xì)胞的形態(tài)和正常功能，尤其是維持胰島素分泌基因的正常運(yùn)行。它也是胰腺發(fā)育必要的轉(zhuǎn)錄因子以及β細(xì)胞形成和成熟的標(biāo)志。Pdx1表達(dá)于小鼠胚胎E8～E9 d的前腸管上皮，在E9～E10 d胰腺前體與胰腺上皮細(xì)胞內(nèi)均有表達(dá)，人類在孕后3～4周Pdx1開始表達(dá)，7周有胰島素的產(chǎn)生，12～13周胰島生成。在Pdx1基因敲除的小鼠與其單基因突變的人中均表現(xiàn)為胰腺發(fā)育不良[3-4]。敲除Pdx1基因的模型胰腺，其向外生長和近十二指腸的分化完全消失，但仍有胰芽內(nèi)分泌α細(xì)胞的分化，而且對胰腺間質(zhì)不產(chǎn)生影響[5]。在妊娠中期無內(nèi)分泌細(xì)胞出現(xiàn)的時候，Pdx1呈現(xiàn)低水平的表達(dá)，但是在妊娠的中后期胰腺β細(xì)胞出現(xiàn)時，Pdx1呈現(xiàn)高水平的表達(dá)。這也證實(shí)了Pdx1在胰腺的形成與β細(xì)胞分化方面都起著重要的作用。此外，Pdx1還是胰腺β細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)葡糖糖反應(yīng)的重要因子，通常情況下低血糖可以抑制 Pdx1基因表達(dá)。短期的血糖升高可以一定程度地刺激Pdx1基因表達(dá)，但長期的高血糖則使Pdx1基因表達(dá)明顯受抑。

2.2 Ngn3

神經(jīng)元素3(neurogen in 3，Ngn3)是NOTCH信號通路下游的一種BHLH轉(zhuǎn)錄因子，在CNS和胰腺中都有表達(dá)，Ngn3是胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞分化的重要調(diào)控因子，研究證實(shí)胰腺所有內(nèi)分泌細(xì)胞的發(fā)育均需要Ngn3的調(diào)控。Ngn3缺失的小鼠出生后無胰島[6]。然而最近在斑馬魚的研究中胰腺與Ngn3缺失的胚胎中Asclb與Neuro1替代了Ngn3的功能，胰腺發(fā)育并不表現(xiàn)出缺陷，這提示在脊椎動物中存在其他內(nèi)分泌細(xì)胞分化調(diào)節(jié)因子[7]。Ngn3最早在小鼠胚胎中表達(dá)于E9 d，在E15 d時達(dá)到峰值，然而在E17.5 d時Ngn3在胰腺內(nèi)幾乎消失。Ngn3的表達(dá)受到Notch信號的抑制，Notch信號能夠促進(jìn)Sox9基因的表達(dá)，當(dāng)Sox9基因表達(dá)的時候能夠激活胰腺內(nèi)分泌前體細(xì)胞Ngn3基因的表達(dá)，然而當(dāng)Notch信號高水平表達(dá)的時候則會激活Sox9的抑制物HES-1D的表達(dá)從而終止Sox9基因的表達(dá)，進(jìn)而抑制了Ngn3的表達(dá)[8]。Ngn3調(diào)控著與胰島發(fā)育相關(guān)的3755個基因，其中有317個基因?qū)σ认賰?nèi)分泌細(xì)胞的發(fā)育起正向調(diào)節(jié)作用，175個基因起負(fù)向調(diào)節(jié)作用，757個基因在內(nèi)分泌細(xì)胞發(fā)育中是否具有表達(dá)還沒有確定[9]。

2.3 Pax

2.3.1 Pax4

胰島β細(xì)胞功能密切相關(guān)的胰島特異性轉(zhuǎn)錄因子-配對盒4(paired box4,Pax4)屬于編碼促進(jìn)胚胎細(xì)胞增殖、分化及存活的轉(zhuǎn)錄因子家族。這類因子參與細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的高級調(diào)控，在胚胎發(fā)育過程中對細(xì)胞分化、更新、凋亡等都起著十分重要的調(diào)控作用。Pax4生理條件下對胰島β細(xì)胞的生存和增殖具有至關(guān)重要的作用，同時Pax4基因的多態(tài)性與糖尿病的發(fā)生相關(guān)。

Pax4是早期內(nèi)分泌祖細(xì)胞的標(biāo)志，他主要指導(dǎo)β/δ系細(xì)胞的分化。胚胎發(fā)育過程中，Pax4轉(zhuǎn)錄最初在E9.5 d的胰腺胚芽中出現(xiàn)，胚胎E13.5～E15.5 d時達(dá)到高峰，然后下降至低表達(dá)水平。通過基因打靶技術(shù)提示，Pax4的缺乏可以導(dǎo)致胰島β細(xì)胞和δ細(xì)胞的成熟障礙和胰島α細(xì)胞的大量增加[10]。其中胰島α細(xì)胞的增加一方面由于胚胎時期被Pax4抑制的α細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子Arx的表達(dá)增加。另一方面，Pax4的缺乏可以促使成體β細(xì)胞向α細(xì)胞和PP細(xì)胞轉(zhuǎn)化。Pax4還能提高成熟β的數(shù)量，通過抑制Pax6減少α細(xì)胞分化從而減少胰高血糖素的分泌。

2.3.2 Pax6

Pax6在脊椎動物的眼、腦和胰腺的發(fā)育過程中起著重要的作用。在Pax6b缺失的斑馬魚研究中證實(shí)在胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞分化過程Pax6b缺失的胚胎中不會發(fā)育生成β細(xì)胞，δ細(xì)胞大量減少，ε細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的增多。對Pax6b功能不全的胚胎適度注射Pax6b嗎琳代能夠顯著提高α細(xì)胞的數(shù)量與胰高血糖素的水平[11]。在小鼠胚胎的E10 d，Pax6表達(dá)于內(nèi)分泌祖細(xì)胞，Pax6能夠調(diào)控內(nèi)分泌激素的轉(zhuǎn)錄，能夠刺激內(nèi)分泌細(xì)胞特別是α細(xì)胞的增值。此外Pax6還能夠抑制胃饑餓素的分泌。

2.4 Nkx

2.4.1 Nkx6.1與Nkx6.2

同源異性框基因Nkx6.1與Nkx6.2在胰腺β細(xì)胞的發(fā)育與功能執(zhí)行中發(fā)揮著重要的作用。研究顯示Pdx1與Ngn3雙陽性前體細(xì)胞是內(nèi)分泌細(xì)胞共同的前體細(xì)胞群,但缺少Nkx6.1在胚胎發(fā)育時期會導(dǎo)致β細(xì)胞形成異常,而不影響胰腺中其他細(xì)胞的分化與發(fā)育[12],該研究提示β細(xì)胞分化可能也需要Nkx6.1因子在Pdx1陽性前體細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)。Nkx6.1在成熟β細(xì)胞表達(dá)，以此維持著β細(xì)胞的正常功能，與此相比Nkx6.2僅表達(dá)于胰高血糖素與淀粉酶陽性細(xì)胞內(nèi)，在胚胎發(fā)育的E15.5 dNkx6.2的表達(dá)將會終止。在Nkx6.1缺失的突變體小鼠中胚胎發(fā)育E13 d后無胰島素陽性細(xì)胞產(chǎn)生，致使β細(xì)胞的形成降低了85%[13]。在Nkx6.1與Nkx6.2雙基因缺失的小鼠中95%的胰腺β細(xì)胞喪失，這充分的證實(shí)了Nkx6.1在胰腺β細(xì)胞發(fā)育中的作用，同時證實(shí)在胰腺祖細(xì)胞形成β細(xì)胞過程中Nkx6.2能夠代償部分Nkx6.1的功能。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)在Nkx6.1基因缺失的小鼠中在含有Pdx1啟動子而無Ngn3啟動子下表達(dá)Nkx6.1或Nkx6.2能夠有效的修復(fù)β細(xì)胞的的損失。該項研究也證實(shí)了Nkx6.2能夠代償Nkx6.1的功能[14]。

小鼠中研究證實(shí)Nkx6在胰腺α細(xì)胞與β細(xì)胞的分化中扮演著重要的角色。Binot等在斑馬魚中研究證實(shí)Nkx6.1與Nkx6.2共表達(dá)于胰腺初級內(nèi)分泌祖細(xì)胞內(nèi)，但是他們表達(dá)的層次不同，Nkx6.1主要表達(dá)于形成胰島的腹側(cè)，Nkx6.2主要表達(dá)與胰腺β細(xì)胞內(nèi)。在斑馬魚中敲除Nkx6.1或Nkx6.2則表現(xiàn)為α細(xì)胞的完全缺失，而對β細(xì)胞，δ細(xì)胞和ε細(xì)胞沒有產(chǎn)生影響。Nkx6.1或Nkx6.2全部敲除時則表現(xiàn)為β細(xì)胞會呈現(xiàn)劇烈的減少[15]。

Nkx6.1與Nkx6.2在胚胎的E9.5 d表達(dá)于所有的上皮細(xì)胞。E11-E13天Nkx6.1表達(dá)于所有Pdx1陽性細(xì)胞，但是Nkx6.2不表達(dá)。Nkx6.2在胚胎發(fā)育的E15 d表達(dá)于腺細(xì)胞與部分胰高血糖素素細(xì)胞內(nèi)。Pdx1陽性細(xì)胞在Nkx6.1與Nkx6.2調(diào)控下才能轉(zhuǎn)化為胰腺β細(xì)胞。Nkx6.1是β細(xì)胞成熟與增值必不可少的一個調(diào)控因子。在α細(xì)胞的發(fā)育過程中Nkx6.1與Nkx6.2也是必不可少的調(diào)控因子。

2.4.2 Nkx2.2

Nkx2.2最先表達(dá)于胚胎發(fā)育的E9.5 d，至E10.5 d半數(shù)胰腺上皮細(xì)胞均有Nkx2.2的表達(dá)，在以后的發(fā)育階段中Nkx2.2主要表達(dá)于除δ細(xì)胞的Ngn3陽性細(xì)胞內(nèi)。值得注意的是在Nkx2.2缺失的小鼠中無胰腺β細(xì)胞的產(chǎn)生，α細(xì)胞減少80%，PP細(xì)胞適量減少，δ細(xì)胞不能執(zhí)行正常生理功能[16]。有研究證實(shí)Nkx2.2能夠結(jié)合與激活MafA基因從而對胰腺β細(xì)胞的分化與形成起到重要的作用[17]。在斑馬魚研究中證實(shí)Nkx2.2能夠增強(qiáng)導(dǎo)管細(xì)胞的形成。

2.5 ArX

磺胺異二甲嘧啶相關(guān)同源異型盒(Arx)基因首先是在小鼠神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的。最初在E9.5 d胰腺上皮細(xì)胞中表達(dá)，Arx的表達(dá)限制了胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞的類型。如果Ngn3敲除則不會表達(dá)Arx，這證實(shí)Ngn3是位于Arx上游的基因。Arx在形成α、β、δ與pp細(xì)胞正常的比例中起到重要的作用。當(dāng)Arx基因缺失時，δ細(xì)胞數(shù)量會明顯增高，α細(xì)胞明顯減少[18]。Arx基因主要是促進(jìn)α細(xì)胞的分化并且抑制β與δ細(xì)胞的分化，Arx與Pax蛋白的相互抑制作用，在Arx基因缺失的突變小鼠中無α細(xì)胞的分化，α前體細(xì)胞傾向于轉(zhuǎn)化為β與δ細(xì)胞[19]。與此相反在Pdx1陽性細(xì)胞中Arx基因過表達(dá)則會使β與δ前體細(xì)胞傾向于轉(zhuǎn)化為α與PP細(xì)胞。

2.6 MafA與MafB

Maf蛋白屬于巨噬細(xì)胞激活因子(macrophage-activating factor, Maf)家族，是API家族在胚胎發(fā)育和腫瘤生成中發(fā)揮不同功能的一種基本的亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子(bZIP)。

MafA是v-maf原癌基因家族的成員,是唯一特異存在于胰島β細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子。在胚胎形成時期,MafA與MafB共同表達(dá)于胰島素陽性的β細(xì)胞,而在成人胰腺中,僅MafA表達(dá)于β細(xì)胞, 參與調(diào)節(jié)胰島素合成、分泌和糖代謝等相關(guān)基因的表達(dá)。MafA蛋白的分布和其他轉(zhuǎn)錄因子有所不同，它是β細(xì)胞胰島素基因活化轉(zhuǎn)錄因子，胰腺β細(xì)胞的成熟和功能的維持都有賴于MafA蛋白的正常表達(dá)。MafA不是β細(xì)胞形成所必須的一轉(zhuǎn)錄因子，但卻是β細(xì)胞作為胰島素調(diào)控基因功能的必需因子。MafA在血糖調(diào)節(jié)胰島素基因表達(dá)的過程中發(fā)揮著重要作用,葡萄糖濃度的變化可在多個水平調(diào)節(jié)MafA的表達(dá)水平及功能活性。在糖尿病狀態(tài)下,MafA 的表達(dá)和( 或 )活性減低,抑制了胰島素的生物合成和分泌。MafA與胰島素陽性細(xì)胞是從MafB與胰島素陽性祖細(xì)胞分化而來的[20]。在第二次細(xì)胞躍遷中MafA首先表達(dá)于胰島素陽性細(xì)胞內(nèi)。當(dāng)β細(xì)胞從未成熟狀態(tài)轉(zhuǎn)化為成熟的細(xì)胞后，MafB將終止表達(dá)。在MafB基因缺失的突變體中胰島素陽性細(xì)胞與胰高血糖素陽性細(xì)胞的發(fā)育將會延遲，并且這兩種細(xì)胞的數(shù)量將會減少50%，這些研究證實(shí)MafB是調(diào)控α、β細(xì)胞成熟的一個重要因子。

3 胰島β細(xì)胞發(fā)育相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的應(yīng)用

近年來，人們利用與胰島發(fā)育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子將胰腺干細(xì)胞定向分化為β細(xì)胞，或?qū)⒎且葝u素分泌細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為胰島素或類胰島素分泌細(xì)胞，這在糖尿病治療方面表現(xiàn)出了巨大的潛力。

構(gòu)建含有Pdx1基因的真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染介質(zhì)Superfect介導(dǎo)重組載體轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)，能增強(qiáng)大鼠MSCs體外分化為功能性胰島素分泌細(xì)胞的能力，對開展胰島移植治療1型糖尿病有重要價值[21]。經(jīng)Ngn3蛋白誘導(dǎo)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞聚集生長現(xiàn)象，并有形狀類似胰島β的細(xì)胞團(tuán)出現(xiàn)[22]。

胰島的發(fā)育是許多轉(zhuǎn)錄因子在時空上選擇性表達(dá)的結(jié)果, 通常用一種轉(zhuǎn)錄因子并不能將非β細(xì)胞很好地誘導(dǎo)分化為成熟的、能夠替代β細(xì)胞的胰島素分泌細(xì)胞, 因此, 目前的常用方法是將幾種關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子共轉(zhuǎn)染非β細(xì)胞, 使其定向分化為成熟的β細(xì)胞。如構(gòu)建含 Pdx1與Nkx6.1雙基因的重組腺病毒載體，用該載體分別感染人胎肝間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，并聯(lián)合相應(yīng)的細(xì)胞因子分步誘導(dǎo)，研究顯示誘導(dǎo)后的細(xì)胞能夠持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)胰島素。胰島β樣細(xì)胞移植能有效恢復(fù)STZ糖尿病小鼠的血糖正常水平,維持小鼠良好的生存狀態(tài)[23-24]。Pdx1與Ngn3協(xié)同作用誘導(dǎo)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞向胰腺β樣細(xì)胞分化，證實(shí)Pdx1與Ngn3雙基因聯(lián)合在誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為β樣細(xì)胞方面具有協(xié)同作用, 可啟動部分β細(xì)胞功能相關(guān)的基因表達(dá)，具體機(jī)制尚不清楚[25]。胰島素轉(zhuǎn)錄關(guān)鍵調(diào)控因子Pdx1，神經(jīng)分化因子1(NeuroD1)和MafA三者能協(xié)同作用使小鼠iPS細(xì)胞分化為具有顯著胰島素合成和分泌能力的胰島素分泌細(xì)胞[26]。Ngn3與Pax4對Pdx1誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向胰腺分泌細(xì)胞分化具有促進(jìn)作用[27]。

盡管通過廣泛的研究，已經(jīng)明確了胰腺發(fā)育的形態(tài)學(xué)標(biāo)志，但是我們只是剛剛才開始了解負(fù)責(zé)決定胰腺細(xì)胞命運(yùn)的眾多調(diào)節(jié)因子和細(xì)胞間信號分子。胰腺β細(xì)胞發(fā)育的基因轉(zhuǎn)錄是一個具有等級或級聯(lián)反應(yīng)的過程，每一個階段都不是單獨(dú)的基因在起作用，而是很多基因共同作用的結(jié)果。了解胰腺細(xì)胞的發(fā)育機(jī)制可以更好地控制其再生，更加準(zhǔn)確地誘導(dǎo)胰腺細(xì)胞的發(fā)育，從而應(yīng)用于胰腺組織的再生研究以及糖尿病的臨床治療。但要使誘導(dǎo)形成的胰島素分泌細(xì)胞達(dá)到臨床治療的要求，還需解決許多的問題。目前，利用轉(zhuǎn)錄因子將非β細(xì)胞誘導(dǎo)為胰島素分泌細(xì)胞的研究時間較短，其分子機(jī)制尚不清楚，誘導(dǎo)形成β細(xì)胞的比率低，且不成熟；人為導(dǎo)入這些轉(zhuǎn)錄因子，是否會引起細(xì)胞的其他癌變；誘導(dǎo)形成的胰島素分泌細(xì)胞是否同樣會遭到免疫攻擊，這類問題尚無定論。但隨著胰島β細(xì)胞發(fā)育相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子研究的深入，必將為糖尿病的治療提供更為廣闊前景。

參考文獻(xiàn)：

[1] 唐鵬，秦茂林.胰腺發(fā)育學(xué)研究進(jìn)展[J].局解手術(shù)學(xué)雜志.2005，14(4)：341-345.

[2] 王洪剛，馬玉珍.胰腺發(fā)育不同階段轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的研究進(jìn)展[J].解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報.2013，34(2)：194-196.

[3] Jonsson J, Carsson L, Edlund T,etal.Insulin promoter factor 1 is required for pancreas development in mice[J]. Nature 1994，317：606-609.

[4] Stoffers DA, Zinkin NT, Stanojevic V,etal. Pancreatic agenesis attributable to a single nucleotide deletion in the human IPF1 gene coding sequence[J]. Nat Genet. 1997,15(1):106-110.

[5] 吳軍德.胚胎胰腺發(fā)育調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展[J].國際分泌代謝雜志.2006，26(4):57-59.

[6] Gradwohl G, Dierich A, LeMeur M,etal. Neurogenin3 is required for the development of the four endocrine cell lineages of the pancreas[J]. Proc Natl Acad Sci USA. 2000,97(4):1067-1611.

[7] Flasse LC, Pirson JL, Stern DG,etal. Ascl1b and Neurod1, instead of Neurog3, control pancreatic endocrine cell fate in zebrafish[J]. BMC biology 2013(7),11:78.

[8] Shih HP, Kopp JL, Sandhu M,etal. A Notch-dependent molecular circuitry initiates pancreatic endocrine and ductal cell differentiation[J]. Development. 2012,139(14):2488-2499.

[9] Nagaraja P, Parashivamurthy K, Sidnal N,etal. Analysis of gene expression on ngn3 gene signaling pathway in endocrine pancreatic cancer[J]. Bioinformation 2013,9(14):739-747.

[10] Wang J, Elghazi L, Parker SE,etal. The concerted activities of Pax4 and NK2.2 are essential to initiate pancreatic β cell differentiation[J]. Dev Bio. 2004,266(1):178-199.

[11] Verbruggen V,EK O,Georlette D,etal. The Pax6b homeodomain is dispensable for pancreatic endocrine cell differentiation in zebrafish[J]. The Journal of biological chemistry. 2010,285(18):13863-13873.

[12] Hald J, Sprinkel AE, Ray M,etal. Generation and characterization of Ptf1a antiserum and localization of Ptf1a in relation to Nkx6.1 and Pdx1 during the earliest stages of mouse pancreas development[J]. J H istochem Cytochem. 2008,56(6):587-595.

[13] Sander M,Sussel L, Conners J,etal. Homeobox gene Nkx6.1 lies downstream of Nkx2.2 in the major pathway of β cell formation in the pancreas[J]. Development.2000,127(24):5533-5540.

[14] Nelson SB,Schaffer AE, Sander M.The transcription factors Nkx6.1 and Nkx6.2 possess equivalent activities in promoting β cell fate specification in Pdx1+ pancreatic progenitor cells[J].Development. 2007,134(13):2491-5000.

[15] Binot AC, Manfroid I, Flasse L,etal. Nkx6.1 and nkx6.2 regulate alpha- and beta-cell formation in zebrafish by acting on pancreatic endocrine progenitor cells[J]. Developmental biology. 2010,340(2):397-407.

[16] Sussel L, Kalamaras J, Hartigan-O’Connor DJ,etal. Mice lacking the homeodomain transcription factor Nkx2.2 have diabetes due to arrested differentiation of pancreatic β cells[J].Development. 1998,125(12):2213-2221.

[17] Raum JC, Gerrish K, Artner I,etal. FoxA2, Nkx2.2, and PDX-1 regulate islet β-cellspecific mafA expression through conserved sequences located between base pairs -8118 and-7750 upstream from the transcription start site[J]. Molecular and cellular biology.2006,26(15):5735-5743.

[18] Mastracci TL, Wilcox CL, Arnes L,etal. Nkx2.2 and Arx genetically interact to regulate pancreatic endocrine cell development and endocrine hormone expression[J].Developmental biology.2011,359(1):1-11.

[19] Collombat P, Hecksher-Sorensen J, Broccoli V,etal. The simultaneous loss of Arx and Pax4 genes promotes a somatostatin-producing cell fate specification at the expense of the alpha- and β-cell lineages in the mouse endocrine pancreas[J]. Development. 2005,132(13):2969-2980.

[20] Artner I, LeLay J, Hang Y,etal. MafB: an activator of the glucagon gene expressed in developing islet alpha- and β-cells[J]. Diabetes. 2006,55(2):297-304.

[21] 孫吉平，盧鐘，趙申.促進(jìn)大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞體外分化為胰島素分泌細(xì)胞[J].中國現(xiàn)代普通外科進(jìn)展.2009，12(1):12-17.

[22] 毋慧鈴，李戈，陳靜，等.神經(jīng)元素3蛋白(Ngn3)誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島素表達(dá)細(xì)胞分化的初步研究[J]. 復(fù)旦學(xué)報.2008，47(5):585-592.

[23] 唐小龍，張洹，朱康兒. PDX1聯(lián)合Nkx6.1促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為胰島β樣細(xì)胞[J].中國病理生理雜志.2009，25:1591-1599.

[24] 唐小龍，張榮波，汪雪峰. Nkx6.1協(xié)同PDX1誘導(dǎo)人胎肝間充質(zhì)干細(xì)胞分化為胰島β樣細(xì)胞[J]. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報.2010，31(3)：258-263.

[25] 郭敏，唐小龍，張 洹. Pdx1與Ngn3協(xié)同誘導(dǎo) LO2細(xì)胞分化為胰腺β樣細(xì)胞[J].暨南大學(xué)學(xué)報.2008，29(4)：351-356.

[26] 范向軍，王雷，陸玉華，等.多基因修飾小鼠誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞分化為胰島素分泌細(xì)胞[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報.2013，34(7)：700-707.

[27] 唐小龍，肖瑞，王云秀，等. 神經(jīng)元素3與成對盒基因4促進(jìn)胰腺十二指腸同源框蛋白1誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向胰腺分泌細(xì)胞分化[J].北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版).2011，43(3):421-426.