中國云南地區(qū)恒河猴群MHC-DRB部分等位基因的調(diào)查

和占龍 禹文海 楊鳳梅 趙 遠(yuǎn) 魯帥堯 王俊斌 陳麗雄 乞素冬 李艷艷 劉龍丁

恒河猴(Rhesus monkey，Macaca mulatta)，屬靈長目(Primates)、類人猿亞目(Anthropoidea)、猴科(Cercopithecidae)、獼猴屬(Macaca)，屬于國家二級保護(hù)動物。其適應(yīng)性強(qiáng)，容易馴養(yǎng)繁殖，生理上與人類較接近，因此是人類醫(yī)學(xué)科研究工作中比較理想的實(shí)驗(yàn)動物，主要應(yīng)用于傳染病學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)、行為學(xué)、老年病、器官移植、內(nèi)分泌病、腫瘤學(xué)等方面研究。恒河猴MHC又稱為RhLA(rhesus macque leukocyteantigen)，其MHC基因命名時(shí)加前綴Mamu(Macaca mulatta)，習(xí)慣上直接使用為Mamu。根據(jù)Mamu基因產(chǎn)物功能和結(jié)構(gòu)的不同，又將其分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ類基因。恒河猴的Mamu-Ⅱ類分子與人類一樣，也有3個(gè)典型的亞區(qū) DR、DQ、DP［1，2］。與 DQ、DP 相比，DR在細(xì)胞表面有較高的濃度，在免疫反應(yīng)中具有重要作用。恒河猴DRB位點(diǎn)的多態(tài)性之高，是人類和其他靈長類動物中所沒有的，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的恒河猴DRB位點(diǎn)的等位基因有126個(gè)［3～6］。本研究以來源清晰的云南地區(qū)恒河猴為研究對象，應(yīng)用PCR技術(shù)對部分MHC-DRB等位基因進(jìn)行分析，為今后開展恒河猴群遺傳資源保護(hù)及相關(guān)動物實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。

材料與方法

1．樣品采集和DNA提取:實(shí)驗(yàn)采集云南地區(qū)普通級恒河猴全血共195份，其中昆明自繁猴123份、寧蒗縣26份、景東縣27份和鎮(zhèn)沅縣19份。均來源于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所全國醫(yī)學(xué)靈長類研究中心［實(shí)驗(yàn)動物許可證號:SCXK(滇)2010-0006］。靜脈抽取全血2ml，EDTA抗凝。采用AXYGEN DNA提取試劑盒提取基因組DNA，詳細(xì)操作步驟見說明書。

2．PCR擴(kuò)增及測序:參考相關(guān)文獻(xiàn)［7］選取引物對，引物序列見表1。由生工生物工程(上海)有限公司合成。在PCR儀(Bio-Rad C1000)中進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體積為10μl，上游引物和下游引物各(20μmol/L)0．5μl，模板 DNA 0．5μl，2 ×PCR Master Mix 5μl，ddH2O 3．5μl。……