Hedgehog信號通路分子Shh、Ptch和Smo在化學誘導小鼠肝癌模型過程中的動態表達

李韻秋 匡志鵬 吳繼寧 孔 娜 楊 帆

原發性肝細胞肝癌(primary human hepatocellular，HCC)是現今常見的惡性腫瘤之一，其發生率在我國有明顯增加趨勢，比歐美國家高5～10倍，是全球發生率最高的國家［1，2］。有研究顯示，肝癌的發生、發展是肝癌細胞無限增殖與凋亡減少的結果，信號轉導通路在其中扮演著重要角色，隨著對肝癌信號轉導通路研究的不斷深入，人們發現肝癌細胞內部的某些信號轉導通路的激活或抑制與肝癌的發生、發展等有著緊密的聯系。近幾年來，Hedgehog信號通路在肝癌發生、發展變化中的作用進行了初步的探索，大多數報道結果為肝癌發生與Hedgehog信號通路關系密切，并且是最近探討肝癌機制研究的熱點，但是具體作用尚不清楚［3］。本研究通過觀察HH信號通路成員Shh、Ptch和Smo在化學誘發小鼠肝癌模型中的動態表達情況，探討Hedgehog信號通路與肝癌發生、發展的關系。

材料與方法

1．主要試劑與藥品:免疫組織化學用Shh、Ptch和Smo兔抗鼠多克隆抗體(博奧森生物技術有限公司)。SP試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)。總RNA提取試劑Trizol(美國Invitrogen公司)。M-MuLV反轉錄試劑盒(加拿大MBI Fermentas公司)。引物由上海生工生物有限公司合成。Real-Master Mix(SYBR Green)(Takara公司)。定量PCR儀為美國MJR公司產品。組織蛋白裂解液及發光底物試劑盒(上海碧云天Beyotime公司)，蛋白質印跡檢測用Shh和Ptch兔抗鼠多克隆抗體(美國Millipore公司)，Smo兔抗鼠多克隆抗體(美國Abcam公司)，GAPDH單克隆抗體和羊抗兔二抗(美國CST公司)。

2．C57BL/6J小鼠肝癌模型制備:小鼠造模階段已在前期實驗中獲得成功，簡要過程如下:選取……