心肌特異性啟動(dòng)子引導(dǎo)的rNIS基因的攝碘動(dòng)力學(xué)研究

劉 影 于 濤 林 偉 鄔恒夫

心肌梗死發(fā)生率和病死率呈逐年上升的趨勢(shì)，盡管各種治療方法在不斷發(fā)展，由心肌梗死導(dǎo)致的難以治療的心力衰竭及死亡仍然是全球面臨的難題。近年出現(xiàn)的干細(xì)胞治療心肌梗死成為研究的熱點(diǎn)，各種監(jiān)測(cè)干細(xì)胞轉(zhuǎn)歸的方法中又以核素的報(bào)告基因顯像最有發(fā)展前途。

鈉/碘轉(zhuǎn)運(yùn)體(sodium/iodide symporter，NIS)是正常甲狀腺細(xì)胞的一種跨膜糖蛋白，介導(dǎo)碘的主動(dòng)攝取，成為目前報(bào)告基因顯像研究中最有發(fā)展前景的報(bào)告基因。已有大量研究以NIS作為報(bào)告基因的心臟干細(xì)胞顯像研究，其存在的主要問(wèn)題是轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞后表達(dá)量較低，應(yīng)用于臨床實(shí)踐受到限制，其中改善的主要方法包括應(yīng)用組織特異性啟動(dòng)子來(lái)增加心肌組織靶向調(diào)控NIS基因的表達(dá)。肌凝蛋白輕鏈蛋白-2(myosin light chain-2，MLC-2p)為心肌特異性啟動(dòng)子。本研究構(gòu)建了MLC-2p啟動(dòng)子調(diào)控的rNIS基因重組腺相關(guān)病毒(recombinant adenoassociated virus，rAAV)并感染心肌細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞水平的碘攝取實(shí)驗(yàn)，在體外證實(shí)NIS作為報(bào)告基因的可行性，為下一步的MLC-2p啟動(dòng)子調(diào)控的rNIS基因介導(dǎo)干細(xì)胞治療心肌梗死的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)，現(xiàn)報(bào)道如下。

材料與方法

1．材料:載體質(zhì)粒 pAAV-IRES-ZsGreen，JM109 感受態(tài)及HET kit(深圳百恩維生物科技有限公司)，乳腺癌細(xì)胞株MCF-7由本實(shí)驗(yàn)室保存，小量質(zhì)粒抽提試劑盒及Trans2K PlusⅡ DNA Marker(北京全式金生物公司)，瓊脂糖凝膠回收試劑盒(Omega公司)，DNA引物合成及測(cè)序，DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清FBS，胰蛋白酶Trypsin 0．25%EDTA(美國(guó)Invitrogen公司)，限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ，MluⅠ，SpeⅠ及T4 DNA Ligase(美國(guó)NEB公司)，大規(guī)模質(zhì)粒抽提試劑盒(德國(guó)Qiagen公司)，Bio-Rad DNA電泳系統(tǒng)……