廣東菲牛蛭中有效抗凝物質的分離純化

盧舒凡 李慶國 許淑芹

水蛭是我國傳統中藥，早在《神農本草經》中就有記載。同時，水蛭也是一味世界性的動物藥，許多國家如埃及、歐洲都有外用活水蛭治病的傳統。直到1884年，才由Haycraft發現醫蛭提取物具有抗凝活性，拉開了水蛭素應用研究的序幕［1］。目前，我國對水蛭的研究主要側重水蛭的各種療效和藥理作用，而對有效成分的研究遠遠滯后于國外，除氨基酸和抗凝活性成分測定外，國內大部分蛭類均未見有效成分的報道。在水蛭研究方面，目前存在的兩大問題是物種來源混亂、有效成分不清晰。本研究以廣東菲牛蛭(俗稱“金邊螞蟥”)為材料，分離純化其有效抗凝物質，為后續的結構分析、藥理藥效研究、劑型研制及應用打下基礎。

材料與方法

1．儀器:JJ-2組織勻漿搗碎機(江蘇金壇環宇科學儀器廠生產)，SHZ-82恒溫振蕩器(江蘇金壇富華儀器有限公司生產)，TGL-16B高速臺式離心機(上海安亭科技儀器廠生產)，中低壓層析柱(上海楚定生產)，MSC050杯式超濾器(上海摩速有限公司生產)，電泳儀(北京伯樂科學公司生產)。

2．試驗藥品:廣東菲牛蛭(廣州水蛭生物科技有限公司生產)，DEAE-Sepharose F．F．(Amersham 公司)，SP-120-40/60-ODS-BP(Daiso公司)，凝血酶，纖維蛋白原，蛋白標準marker(均為Sigma公司生產)，BCA試劑盒(廣州美津生物技術公司生產)。

3．凝血酶滴定法［2］:在 37．0 ±0．5℃恒溫條件下，吸取樣品20μl，置反應板孔中，加入含0．5%牛纖維蛋白原的三羥甲基氨基烷鹽緩沖液200μl，混合均勻，恒溫5min，滴加每1ml中50單位的凝血酶溶液(每分鐘滴加1次，每次5μl，邊滴加邊攪勻)至凝固，記錄消耗……