2009～2011年大慶地區(qū)感染人輪狀病毒G血清型鑒定

文 程 王 薇 何旭輝

輪狀病毒(rotavirus，RV)屬于呼腸孤病毒科、輪狀病毒屬，是引起人類急性腹瀉的主要病原體之一，并具有極強(qiáng)的傳染性。尤其A組RV是導(dǎo)致嬰幼兒腹瀉最常見的原因，全世界每年因輪狀病毒感染導(dǎo)致腹瀉的患兒大約有1．11億，其中死亡人數(shù)約有50萬左右［1］。VP7蛋白是位于RV外殼的主要結(jié)構(gòu)蛋白之一，可誘導(dǎo)人體產(chǎn)生中和抗體。根據(jù)RVVP7蛋白的特異性不同，可將RV分為不同的G血清型，至今已發(fā)現(xiàn)14個(gè) G 血清型(G1～G14)［2］。因此，對某一地區(qū)流行的RV進(jìn)行G血清型鑒定，對了解當(dāng)?shù)豏V流行病學(xué)特征以及RV感染性腹瀉的預(yù)防與診治有非常重要的指導(dǎo)意義。現(xiàn)對2009～2011年大慶市區(qū)各二級(jí)及以上醫(yī)院采集的288例腹瀉患者(其中兒童197例，成人91例)的腹瀉標(biāo)本進(jìn)行RV陽性鑒定，將鑒定為RV陽性的標(biāo)本利用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行RVG血清型鑒定，以期通過了解大慶市RV的血清學(xué)特征，能為當(dāng)?shù)豏V的流行病學(xué)調(diào)查、RV感染性腹瀉的診治以及RV疫苗的選用起到指導(dǎo)作用。

材料與方法

1．主要試劑:膠回收試劑盒，小量質(zhì)粒提取試劑盒和RNA提取試劑盒、ExTaq DNA聚合酶、DNA marker DL 2000、DMSO、IPTG、pGEM-T Easy Vector，反轉(zhuǎn)錄酶AMV和dNTP購自大連寶生物公司;A組輪狀病毒ELISA檢測試劑盒購自O(shè)XOID公司。

2．輪狀病毒的ELISA檢測:將288例腹瀉標(biāo)本反復(fù)凍融3次后，用A組輪狀病毒ELISA試劑盒的稀釋液將腹瀉標(biāo)本稀釋成10%的懸液，10000r/min離心5min，利用A組輪狀病毒ELISA檢測試劑盒進(jìn)行RV陽性檢測。

3．一步多重RT-PCR鑒定RV血清型:①取處理過的標(biāo)本上清液200μl，按照Trizol Reagent試劑說明書提取輪狀病毒dsRNA;②參照GenBank上發(fā)表的各血清型人源RVVP7蛋白的基因序列，利用Oligo 6．0軟……