雙重修飾的主動靶向脂質體研究進展

蔣 雯，田吉來，丁晨靜，鞠 安，顧 寧

（東南大學生物科學與醫學工程學院，江蘇南京211189）

·綜 述·

雙重修飾的主動靶向脂質體研究進展

蔣 雯，田吉來，丁晨靜，鞠 安，顧 寧

（東南大學生物科學與醫學工程學院，江蘇南京211189）

主動靶向脂質體是靶向遞藥體系的一個重要角色。由于傳統的單一基團修飾的主動靶向脂質體存在靶向效率不高、細胞攝取率不高等缺點，人們不斷探索采用兩種或多種不同識別分子或其他協同分子共同修飾脂質體。本文擬針對雙重修飾脂質體技術的研究進展進行綜述。通過對兩種特異性配體或抗體共同修飾、特異性配體與細胞穿透肽共同修飾、兩種細胞穿透肽共同修飾等不同類型的雙重修飾脂質體的綜述分析，我們發現雙重修飾技術具有提高靶向準確性和靶向效率，提高藥物攝取，提高對靶點的黏附能力和血流穩定性等優勢，尤其在跨膜穿越屏障系統的應用中凸顯作用。

脂質體；雙重修飾；主動靶向

脂質體（liposome）是指由磷脂分子分散在水中形成的一個具有雙分子層結構的包封一部分水相的類球狀微型囊泡。脂質體以磷脂為膜材，具有很好的生物相容性，是一種具有廣闊應用前景的載藥體系。但需要注意的是，由于脂質體在體內循環過程中容易被網狀內皮系統（reticuloendothelial system，RES）識別為外來物質并吞噬，常常難以達到理想效果。為克服這種障礙，須在脂質體表面添加一層親水的惰性聚合物（如聚乙二醇［1］、泊洛沙姆［2］、殼聚糖［3］等），以減少血漿蛋白和脂質體的調理作用，阻止脂質體的凝集和聚合，避免網狀內皮系統的吞噬，延長脂質體在體內的循環時間，達到長循環的效果，如目前效果較好且已經實現市場化的聚乙二醇（PEG）化長循環脂質體［4］。

為了實現脂質體更高的靶向效率，通常會在其表面修飾識別基團和特定的靶細胞相作用，從而促進脂質體或者藥物內化，達到“主動靶向”的效果。常用的修飾基團有單克隆抗體（mAb）、多肽、糖蛋白、維生素、碳水化合物等。利用靶細胞特異性表達某些物質，將識別該物質的配體修飾在脂質體表面，就可以達到靶向定位的效果，將載藥脂質體帶到特定的部位，從而使釋放的藥物更具針對性。這是常見的主動靶向脂質體原理［5］。然而常常事與愿違，常用配體的受體都不只在一種細胞上表達，這也就意味著在脂質體長循環過程中，不僅會在靶細胞處積累，也有可能在其他非靶細胞處（off－target cells）積累并造成傷害。單靶頭修飾的主動靶向載體也存在一些問題，如受體下調造成靶向效率下降［6］。為了提高靶向效率，人們又對原先的單一基團修飾的脂質體進行了改進，采用兩種不同類型的基團修飾主動靶向的脂質體。本文就近些年來雙重修飾脂質體的進展進行綜述。

1 雙重修飾的主動靶向脂質體類型

1.1 兩種特異性配體（specific ligand）修飾脂質體 根據靶細胞通常不只特異性表達一種物質，則可以從概率學角度進行篩選，利用多種特異性配體識別定位靶細胞，以減少對非靶細胞的識別。目前嘗試的多是用兩種特異性配體進行修飾［7，8］。

Laginha等［9］采用Alexa Fluor350和532熒光團標記單克隆抗體（mAb），利用熒光測定法定量確定脂質體表面抗體密度。根據B淋巴瘤細胞過度表達CD19和CD20，研究分4實驗組進行：表面具有相同單抗密度的僅anti－CD19－mAb修飾的脂質體，僅anti－CD20－mAb修飾的脂質體，anti－CD19－mAb和anti－CD20－mAb共同修飾的脂質體，以及anti－CD19－mAb修飾和anti－CD20－mAb修飾按照1∶1組成的脂質體混合物。體外結果表明：后兩組的細胞結合和攝取量相似，均比前兩組僅用一種抗體修飾的脂質體的多。細胞毒性實驗則表明，包封有阿霉素（DXR）的第三組雙重修飾脂質體比第四組混合脂質體的細胞毒性更高。綜合結果說明雙重修飾的脂質體能實現最佳的藥效。

Saul等［10］利用KB細胞過度表達葉酸受體（folate receptor，FR）和表皮生長因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR）以及利用葉酸和anti－EGFR－mAb（mAb225）同時修飾脂質體，并包封阿霉素（DXR）以根據細胞毒性確定脂質體的靶向選擇性。為了模擬體內環境中存在的非靶細胞，將細胞表面的相應的受體飽和而失去作用，實驗事先利用過量葉酸、過量mAb225和兩種混合物分別培養出3組KB細胞，并連同正常的KB細胞組，分別和雙重修飾脂質體共同培養。實驗表明雙重修飾的脂質體只能靶向兩種受體都開放的靶細胞（正常KB細胞組），這就有力地證明了雙重修飾的脂質體具有極高的靶向選擇性，實現的是靶向受體“交集”的效果，而非“并集”，也就降低了對其他非靶向細胞的作用。

但是上述實驗均在體外細胞實驗中獲得，通常排除了脂質體在體內循環中遇到的調理作用等復雜情況，并忽略了體內其他未知的非靶細胞對于脂質體靶向的影響，而更多地只是關注靶細胞處的作用機理。所以后續又開展了很多體內實驗，并且進一步驗證了體外實驗的結論。

Ying等［11］利用甘露醇和轉鐵蛋白同時修飾脂質體，在體外血腦屏障（blood brain barrier，BBB）模型和動物體內實驗中都實現了相比單一修飾脂質體更好的細胞攝取率、靶向能力、抑制癌細胞增殖作用和抑制腫瘤生長作用，同時還成功地穿越了血腦屏障。該實驗既展現了用以修飾脂質體的配體的更多可能，又在體內水平證明了兩種特異性配體修飾脂質體的優越性。

Murase等［12］在探究抗新生血管療法時（antineovascular therapy，ANET），通過PRD和NGR這兩種特異性結合的配體分別修飾和共同修飾的脂質體在體外和體內的對比試驗發現，這三種脂質體均比未加修飾的長循環脂質體靶向新生血管效果更好，而雙重修飾的脂質體又比單一修飾的脂質體結合量更高，定位效果更好。相比于NGR單一修飾的脂質體容易在脾臟中積累，雙重修飾的脂質體更易于在血流中循環運行，從而進行對新生血管的靶向。所以雙重修飾的脂質體對HUVEC的生長和增殖的抑制效果最佳，抗腫瘤效果最好。

以上的配體連在PEG長鏈上再連結在脂質體上，是一種靶向和長循環加和的作用，兩種配體或抗體，相當于脂質體同時伸出的兩只爪子，將靶細胞抓得更牢固，抓的對象也更富選擇性，實現了脂質體載藥的高效性和準確性。

對特異性靶細胞受體的選擇通常考慮的因素有：受體在靶點處的過度表達程度或特異性表達程度；促進細胞內化的能力；脫落的可能性等［6］。而對雙重修飾的脂質體，除了以上考慮之外，還應該考慮不同受體和不同修飾配體之間的相互作用。比如，當兩種靶細胞受體通過相同的內吞途徑時，靶細胞對脂質體的聯結和攝取能力應當是協同增強的；而當兩種靶細胞受體介導的是不同的細胞攝取途徑時，靶細胞對脂質體的攝取能力則可能是加和作用或者拮抗作用。又如，兩種配體同時修飾靶向同一種細胞表面受體時，就會存在競爭關系，并且由于細胞表面受體密度未變，其結合存在飽和性，使得雙重修飾并不能提高靶向效率。再如，兩種受體在生物體內分布的交叉性，是否足以更準確地指向目標細胞。還有靶細胞表面兩種受體的空間關系，是否會因為距離過近而存在空間位阻導致結合脂質體的困難，或者導致脂質體的共價結合（即一個脂質體結合兩個或多個受體）從而減少脂質體的攝入量。這些考慮都讓雙重修飾脂質體的靶向受體和修飾配體的選擇變得更加復雜和值得推敲。

1.2 特異性配體和細胞穿透肽（CPP）修飾脂質體 細胞穿透肽（cell penetrating peptide，CPP），也稱為蛋白轉導域（protein transduction domain，PTD），是帶有正電荷的肽段，通常少于30個氨基酸，能在不對細胞造成傷害的情況下攜帶大分子進入細胞，所以常運用在靶向載藥體系中。而且由于CPP帶正電荷，所以能夠通過靜電相互作用而與細胞結合，但不具備特異性，不屬于特異性配體［13，14］。

Sharma等［15］將轉鐵蛋白和一種PR的CPP分別修飾在PEG鏈的末端，再連接到脂質體表面，包裹質粒DNA，結果顯示了其較未經修飾的長循環脂質體和僅用轉鐵蛋白修飾的長循環脂質體具有更高的穿越血腦屏障的效率和DNA轉染率，可見細胞穿透肽發揮了重要的作用。Tanga等［16］類似地運用轉鐵蛋白和TAT的CPP分別修飾在PEG鏈的末端，在連接到脂質體上，同時提高了靶向準確性和細胞攝取量。

由于CPP攜帶正電荷，其非特異性作用使其更容易在體內循環過程中被吞噬，不利于長循環的效果，同時陽離子聚合物也會與陰離子表面的細胞膜作用造成紅細胞裂解和血紅蛋白的釋放，所以更理想的是CPP可以被連有特異性配體的親水長鏈掩蔽隱藏。上述實驗中Sharma定量控制了CPP的用量，且轉鐵蛋白和PEG的負電荷已經超過了CPP的中和量，所以不會造成溶血現象。而Tang的實驗中則額外控制了PEG的不同長度，使CPP同樣能夠被更長鏈的PEG隱藏。

Takara等［17］將一種STR－R4的CPP包裹在脂質體表面，再連上末端有NGR修飾肽的PEG鏈，NGR能夠識別腫瘤細胞過度表達的CD13。該脂質體在多種腫瘤細胞的體內外實驗中都展現了很優越的靶向作用和細胞攝取。Kibra等［18］也類似地將STR－R8這種CPP修飾在了RGD－PEG－Liposome的表面，CPP的引入使得原來單一靶向的脂質體的細胞膜穴樣內陷胞吞途徑，向網格蛋白介導的胞吞途徑轉變，并增加了細胞攝取量和準確性。而Jiang等［19］將一種人工改造合成的R6H4的CPP包被在脂質體表面，再連結上透明質酸（HA），構成雙重修飾的脂質體。HA一方面具有和PEG類似的功能，中性條件下帶負電荷，有親水性，可以實現脂質體的長循環；另一方面一些惡性腫瘤細胞表面有HA的受體如CD44和RAHMM，可以實現靶向；再者，腫瘤的微酸性環境中廣泛分布著透明質酸酶，可以幫助水解去除HA的包裹從而暴露CPP。Jiang的實驗也表明了這種雙重修飾方式具有協同作用，提高了脂質體的細胞攝取量和藥效。實驗中的CPP要保證能夠被PEG或HA親水層盾護，所以在設計選擇時對大小有一定要求，方便親水層的空間位阻發揮作用。此外，Jiang的實驗還著重研究了人工合成的CPP在不同pH下的作用，發現該脂質體能在pH＝6.4的條件下比pH＝7.4發揮出更好的藥效，這也符合腫瘤微環境微酸性的特性。

另外，還由于CPP的正電荷而更利于外源DNA的轉染［15］。CPP可以利用蛋白質工程的手段，根據需求反向設計其結構和氨基酸序列，人工合成篩選達到更加理想的效果。

在這一類型的雙重修飾主動靶向脂質體中，特異性配體首先實現對細胞的靶向，而CPP則進一步幫助細胞攝取藥物，達到協同效果，藥效更顯著。其優勢主要表現在以下幾個方面：其一，特異性配體與靶細胞表面的受體結合具有飽和性，而CPP的靜電作用不存在飽和性；其二，CPP具有正電荷，已經有研究表明帶陽離子的脂質體比中性脂質體在腫瘤區域積累更多、更深、更久［20］；再者，CPP幫助跨越細胞膜，使得脂質體能夠在胞內釋放藥物。

特異性配體和CPP雙重修飾的脂質體是層層遞進發揮效用的，與加和作用不同。加和作用往往會因為兩種配體同時靶向，造成細胞表面黏附的脂質體擁擠的狀況，而協同作用不存在這種問題。但CPP修飾的脂質體雖跨越細胞膜能力增強，但是由于其非特異性結合，所以并未帶來靶向準確性的大幅度提高，而這一點在兩種特異性配體修飾的脂質體中是可以實現的。上面Sharma的實驗中，脂質體穿越血腦屏障的能力增強、在腦部積累量增加的同時，在其他身體器官內的積累也相應增強，如脾臟、心臟、肺等，這就會使包封的質粒DNA在非靶細胞處也能轉染、表達和發揮作用，可能會帶來未知的副作用。歸結起來，CPP的修飾會“盲目”地增強脂質體的藥效，而特異性配體能夠為其指明方向。

1.3 兩種細胞穿透肽（CPP）修飾脂質體 KYND作為一種較新的CPP，通過網格蛋白介導的內吞作用幫助細胞攝取大分子。而同時KYND又是一種腫瘤表皮標記物（tumor endothelialmarker 8，TEM 8）的配體，具有一定的主動靶向效果。所以Kibria等［21］利用R8的CPP包被脂質體后，連上有KYND末端的PEG長鏈，制成的雙重修飾脂質體比用單個CPP修飾的脂質體具有更好的攝取率和準確度，所以也被視為有前景的載藥體系。

其實該種脂質體和上一類型的脂質體作用類似，都是靶向和細胞穿透的協同作用，不同的是第一層靶向的同時就兼具了細胞穿透的效果。而這一實驗再次向我們展示了CPP多樣的功能，帶給我們更多期待和想象力。

2 雙重修飾的主動靶向脂質體的尺寸研究

在采用化學藥物治療癌癥腫瘤時，腫瘤細胞（tumor cell，TC）往往容易產生抗藥性。而腫瘤表面的新生血管內皮細胞（tumor endothelial cell，TEC）則對藥物更敏感，所以設計載藥體系針對TEC發揮藥效會達到更好的抗癌效果［22］。而由于實體瘤的高通透性和滯留效應（EPR effect）［23］，所以尺寸較小的脂質體會被動靶向到腫瘤細胞，但這對于具有高抗藥性的腫瘤細胞起不到好的藥效。Takara等［24］嘗試利用大尺寸的脂質體靶向TEC，而不受EPR效應的影響靶向TC。實驗選擇了具有極強抗藥性的腎癌（renal cancer carcinoma，RCC），并通過對載瘤小鼠進行尾靜脈注射脂質體進行研究。實驗先對比了100 nm和300 nm的PEG化脂質體分布情況，發現100 nm的脂質體因EPR效應在腫瘤區分布更多，但距離血管較深，而300 nm的則分布量少，但主要分布在了血管附近。又對300 nm的脂質體，分成僅用PEG修飾、NGR（可以特異性靶向到RCC的TEC上的CD13）連結PEG修飾、R4的CPP修飾和NGR／CPP雙修飾四組的體內分布情況對比，結果顯示前三者在腫瘤血管區分布均較少，而雙重修飾的則大量分布。經過包封抗癌藥物DXR后，大尺寸的雙重修飾的脂質體比兩種單修飾的脂質體抑癌作用大大提高。最后實驗將包封有DXR的300 nm的雙重修飾的脂質體和100 nm的普通脂質體（一種常用脂質體類藥物，Doxil）對比得出前者更加優越的抑制腫瘤生長的作用。實驗層層遞進向我們展示了雙重修飾在大尺寸脂質體這個平臺上的重要應用。類比我們聯想到雙重修飾的脂質體將會更能抵抗流體的剪切力作用進行靶向結合，配合大尺寸的更大吸附面積發揮作用。如果沒有雙重修飾，大尺寸的脂質體即使有更大的表面吸附面積，也較難抵抗血流沖擊而靶向吸附在血管內皮細胞，進而將其破壞裂解發揮抗癌作用。同時，看似“離經叛道”的大尺寸脂質體，不符合EPR效應的要求，但可以另辟蹊徑解決腫瘤抗藥性的問題，靶向結合到對藥物更加敏感的新生血管發揮作用，是雙重修飾的重要應用方向。可見，大尺寸脂質體搭配上雙重修飾才能發揮出更理想的效果。

3 雙重修飾的主動靶向脂質體的膜流動性研究

由于修飾的配體連結在脂質體的流動膜表面從而與靶細胞作用，所以不難推測，對于雙重修飾的脂質體，脂質體膜的流動性對于兩種不同的配體如何與細胞膜接觸、相互作用以及兩種配體之間的關系有著重要意義。Gunawan等［25］用兩種抗體anti－ICAM和anti－ELAM同時修飾脂質體，而脂質體的膜則用DOPC和DPPC這兩種有著不同物理性質的磷脂分別制成進行對比實驗。在37℃的條件下，DOPC呈液態，DPPC呈凝膠態，兩者具有不同的流動性。而實驗結果也顯示了DOPC脂質體與靶細胞聯結得更好，說明膜流動性越大，雙靶向脂質體靶向越緊密。盡管靶向過程中脂質體膜表面的兩種抗體究竟是如何分布、如何作用仍舊不明朗，但這也帶給我們新的啟迪，不僅僅要將目光放在修飾的配體上，也要關注脂質體本身的性狀，其膜流動性、膜的結構特征、連接配體的方式等眾多微觀上的性質都可能會對脂質體效用的發揮產生影響，而目前的研究還十分有限。

4 雙修飾的靶向脂質體在穿屏障系統中的應用

雙重修飾的主動靶向脂質體的一個重大應用就在于穿越血腦屏障（blood brain barrier，BBB）。血腦屏障是指腦毛細血管壁與神經膠質細胞形成的血漿與腦細胞之間的屏障和由脈絡叢形成的血漿和腦脊液之間的屏障，這些屏障能夠阻止某些物質（多半是有害的）由血液進入腦組織，但這也給載藥體系進入腦部帶來困難。但是BBB也有載體轉運系統，用以腦組織和外界進行物質交換，這就是修飾脂質體的特異性配體發揮作用的依據［26］。如轉鐵蛋白（transferrin，Tf）既可以通過轉鐵蛋白受體高效穿過BBB，又可以靶向過度表達的腫瘤細胞；MAN甘露糖既可以通過BBB上的糖類轉運蛋白GLUT穿過，也可以靶向過度表達的腫瘤細胞；CPP可以幫助穿過細胞從而跨越BBB，又可以通過靜電作用對腫瘤細胞產生危害。這些配體相互配合可以起到加和或協同作用實現更好的藥效。

Gao等［27］利用Tf和葉酸（folate，F）共同修飾脂質體，Tf可以對抗ABC運輸蛋白（ATP－Binding－Cassette transporter）的作用，減少對藥物的外泵，并且幫助通過BBB，進入腦組織后，葉酸則靶向到膠質瘤細胞上，包封的DOX發揮藥效。該脂質體比單一修飾的脂質體展現了更好的穿越屏障系統的能力，并且減少了藥物在心臟的積累降低了毒副作用。Ying等［11］利用Tf和MAN共同修飾，同樣獲得了優越的穿越BBB和靶向神經膠質瘤細胞的雙重的效果。穿越BBB時，MAN起主導作用，Tf輔助；靶向目標細胞時，Tf起主導作用，MAN輔助，兩種配體一直相互配合發揮作用。Sharma等［15］利用Tf和PR這種CPP共同修飾脂質體，較之單一修飾的脂質體在腦組織區獲得了更高的積累量。眾多實驗都證明了雙重修飾的脂質體是極具價值的腦部載藥體系。一般的單一修飾脂質體在面對血腦屏障這種復雜的系統時往往顯得力量單薄，而此時雙重修飾的脂質體的加和作用或協同作用就體現出了穿越屏障系統的價值，同時能夠實現穿越后的靶向給藥作用。

5 總結與展望

雙重修飾的遞送載體具有提高靶向準確性［28］，提高靶向效率，提高藥物攝取，提高對靶點的黏附能力和血流穩定性［24］，跨膜穿越組織屏障等優勢作用，引起人們廣泛關注。雙重修飾的主動靶向脂質體在修飾配體的選擇和搭配上更具多樣性，能夠發揮加和或協同作用。

采用兩種特異性配體修飾的脂質體能夠利用受體分布的交叉特性更準確地篩選出靶向細胞，但在細胞攝取上優勢不明顯。而采用特異性配體和CPP這種非特異性配體搭配修飾的脂質體的優勢更多體現在穿透進入細胞，卻在靶向性上難有顯著提高。當然，CPP自身廣泛多樣的性質又提供了更多的可能，所以也會有像KYND這種具有靶向性的CPP出現。而且由于CPP作為小分子肽，未來隨著蛋白質工程的發展，我們就可以更多地依據我們的需求人為設計出兼具多種功能的CPP，以作為配體修飾脂質體。

此外，除了關注修飾配體本身之外，對于脂質體親水護盾材料的選擇也會在PEG之外有更多可能。如透明質酸（HA）就具有親水性的同時又具有靶向性，并且很容易水解，是一種理想的長循環保護材料。再如泊洛沙姆，其除了本身的親水－疏水－親水三嵌段結構之外，還具有一定的對抗多樣耐藥性的作用［29］，所以也是一種可以發展的多功能的親水護盾。而且未來會有更多的人工合成的多功能聚合物出現，提供更優質的修飾配體連結材料和脂質體長循環親水護盾。

我們期待今后雙重修飾的主動靶向脂質體發展分為宏觀和微觀兩個方向。宏觀上，脂質體在體內長循環過程的控制。一方面，配體連結在親水大分子末端再插入脂質體，這在一定程度上降低了親水大分子的保護作用，所以需要更好地把握修飾配體的量來實現親水護盾和靶向結合之間的平衡。另一方面，脂質體在長循環過程中在非靶細胞處的積累可能會帶來一定的副作用，如穿越血腦屏障的困難使得脂質體在外周器官中有著大量的積累，所以需要更精準地控制其集中到目標區域。微觀上，對于脂質體和靶細胞結合時的具體細節的掌握將能夠幫助我們設計出更加理想的載藥體系。如靶向結合時脂質體和細胞膜的流動性影響，修飾配體之間和配體受體之間的相互作用，靶向結合在生物環境下如血流條件下對力的對抗，靶向結合的穩定性，脂質體親水層對于藥物釋放的影響等等，都值得進一步研究。如在低速條件下，雙重修飾的微型囊泡和單一修飾的微型囊泡黏附能力沒有太大區別，而在高速條件下，雙重修飾的囊泡盡管也有減少，但明顯比單一修飾的囊泡的結合能力要好［24］。又如Chytil等［30］探究納米顆粒（nano particles，NP）中藥物聚合物隔層對于藥物釋放速度的影響，以及不同的藥物釋放速度達到的不同療效，這對脂質體研究同樣具有一定的指導價值。

未來的脂質體藥物將會更多地向病人導向發展，進行個體化設計。在Yu等［31］的研究中，就針對個體病人的細胞采用抗體微陣列技術，選擇出恰當的抗體對脂質體進行雙重修飾，實現了很好的靶向性收和很好的療效。所以，脂質體載藥體系的發展將會與眾多其他生物技術相結合，如基因工程、蛋白質工程等，實現更個性化、人性化的醫療體驗。

我們期待著未來更多的修飾配體的發現和應用，期待著這些配體以更加巧妙的搭配組合和共同作用不會引起在血流中的清除，增加血流中的穩定性，可以很好的接近靶點，可以精準靶向和內化等，也期待更深入的生物技術的發展，這些都將幫助我們建立更加新穎的靶向載藥體系。

［1］ 閻家麒，王悅，王九一.紫杉醇隱形脂質體的制備及在小鼠體內的組織分布［J］.藥學學報，2000，35（9）：706－709.

［2］Tian JL，Ke X，Chen Z，et al.Melittin liposomes surface modified with poloxamer 188：in vitro characterization and in vivo evaluation［J］.Pharmazie，2011，66（5）：362－367.

［3］ 帥武平，張幸國，陳金亮，等.殼聚糖修飾脂質體的制備和性質研究［J］.中國藥學雜志，2007，42（15）：1159－1163.

［4］ 田浤，姚文兵.聚乙二醇化技術在藥物轉運系統中的研究進展［J］.中國藥科大學學報，2008，39（4）：379－384.

［5］Noble GT，Stefanick JF，Ashley JD，et al.Ligand－targeted liposome design：challenges and fundamental considerations［J］.Trends Biotechnol，2014，32（1）：32－45.

［6］Sawant RR，Torchilin VP.Challenges in development of targeted liposomal therapeutics［J］.AAPS J，2012，14（2）：303－315.

［7］ 莫方芬，鄧盛齊.新型藥物載體免疫脂質體的研究進展［J］.中國抗生素雜志，2011，36（4）：249－254.

［8］ 溫悅，畢曉婷.主動靶向脂質體藥物的研究進展［J］.醫藥導報，2010，29（6）：754－757.

［9］Laginha K，Mumbengegwi D，Allen T.Liposomes targeted via two different antibodies：assay，B－cell binding and cytotoxicity［J］.Biochim Biophys Acta，2005，1711（1）：25－32.

［10］Saul JM，Annapragada AV，Bellamkonda RV.A dual－ligand approach for enhancing targeting selectivity of therapeutic nanocarriers［J］.JControl Release，2006，114（3）：277－287.

［11］Ying X，Wen H，Lu WL，etal.Dual－targeting daunorubicin liposomes improve the therapeutic efficacy of brain glioma in animals［J］.JControl Release，2010，141（2）：183－192.

［12］Murase Y，Asai T，Katanasaka Y，etal.A novel DDSstrategy，＂dual－targeting＂，and its application for antineovascular therapy［J］.Cancer Lett，2010，287（2）：165－171.

［13］吳學萍，王馳.多肽修飾脂質體靶向藥物遞送系統研究進展［J］.中國現代應用藥學，2010，27（8）：681－684.

［14］黃發珍.Gell肽介導的靶向脂質體抗腫瘤作用及其攝取機制的研究［D］.蘇州：蘇州大學：2013.

［15］Sharma G，Modgil A，Layek B，etal.Cell penetrating peptide tethered bi－ligand liposomes for delivery to brain in vivo：Biodistribution and transfection［J］.J Control Release，2013，167（1）：1－10.

［16］Tang J，Zhang L，Liu Y，etal.Synergistic targeted delivery of payload into tumor cells by dual－ligand liposomes co－modified with cholesterol anchored transferrin and TAT［J］.Int JPharm，2013，454（1）：31－40.

［17］Takara K，Hatakeyama H，Ohga N，et al.Design of a dual－ligand system using a specific ligand and cell penetrating peptide，resulting in a synergistic effect on selectivity and cellular uptake［J］.Int JPharm，2010，396（1－2）：143－148.

［18］Kibria G.，Hatakeyama H，Ohga N，et al.Dual－ligand modification of PEGylated liposomes shows better cell selectivity and efficient gene delivery［J］.J Control Release，2011，153（2）：141－148.

［19］Jiang T，Zhang Z，Zhang Y，et al.Dual－functional liposomes based on pH－responsive cell－penetrating peptide and hyaluronic acid for tumor－targeted anticancer drug delivery［J］.Biomaterials，2012，33（36）：9246－9258.

［20］Abu Lila AS，Kizuki S，Doi Y，et al.Oxaliplatin encapsulated in PEG－coated cationic liposomes induces significant tumor growth suppression via a dual－targeting approach in a murine solid tumor model［J］.JControl Release，2009，137（1）：8－14.

［21］Kibria G，Hatakeyama H，Harashima H.A new peptide motif present in the protective antigen of anthrax toxin exerts its efficiency on the cellular uptake of liposomes and applications for a dual－ligand system［J］.Int JPharm，2011，412（1－2）：106－114.

［22］Takara K，Hatakeyama H，Kibria G，et al.Size－controlled，dual－ligand modified liposomes that target the tumor vasculature show promise for use in drug－resistant cancer therapy［J］.JControl Release，2012，162（1）：225－232.

［23］李魯申，蔡進，王鵬.靶向脂質體藥物研究進展［R］.中國藥學大會，2012.

［24］Ferrante EA，Pickard JE，Rychak J，et al.Dual targeting improvesmicrobubble contrastagentadhesion to VCAM－1 and P－selectin under flow［J］.J Control Release，2009，140（2）：100－107.

［25］Gunawan RC，Auguste DT.The role of antibody synergy and membrane fluidity in the vascular targeting of immunoliposomes［J］.Biomaterials，2010，31（5）：900－907.

［26］黃向華，徐維平，陸楊，等.腦靶向脂質體的研究進展［J］.中國藥業，2012，21（20）：15－17.

［27］Gao JQ，Lv Q，Li LM，et al.Glioma targeting and bloodbrain barrier penetration by dual－targeting doxorubincin liposomes［J］.Biomaterials，2013，34（22）：5628－5639.

［28］Kluza E，Jacobs I，Hectors SJ，et al.Dual－targeting of αvβ3 and galectin－1 improves the specificity of paramagnetic／fluorescent liposomes to tumor endothelium in vivo［J］.JControl Release，2012，158（2）：207－214.

［29］Zhang X，Guo S，Fan R，et al.Dual－functional liposome for tumor targeting and overcomingmultidrug resistance in hepatocellular carcinoma cells［J］.Biomaterials，2012，33（29）：7103－7114.

［30］Chytil P，Hoffmann S，Schindler L，et al.Dual fluorescent HPMA copolymers for passive tumor targeting with pH－sensitive drug release II：Impact of release rate on biodistribution［J］.J Control Release，2013，172（2）：504－512.

［31］Yu B，Mao Y，Yuan Y，et al.Targeted drug delivery and cross－linking induced apoptosis with anti－CD37 based dual－ligand immunoliposomes in B chronic lymphocytic leukemia cells［J］.Biomaterials，2013，34（26）：6185－6193.

Research progress on dually modified active targeting liposomes

JIANGWen，TIAN Ji-lai，DING Chen-jing，JU An，GU Ning
（School of Biological Science and Biomedical engineer，Southeast University，Nanjing 211189，China）

Active targeting liposomes play important roles in targeted drug delivery system.However，conventional singly modified active targeting liposomes have some disadvantages，such as unsatisfied targeting efficiency and low cellular uptake.Researchers are exploring liposomesmodified with different two ormore kinds of targetingmolecules and other synergistic molecules.This article reviewed the research progress of dually modified targeted liposomes，which were divided into three groups：dual ligandsmodified liposomes，specific ligand and cell penetrating peptide co－modified liposomes，and dual cell penetrating peptidesmodified liposomes.According to the analysis，we concluded that duallymodified liposomal therapeutics had superiority in targeting specificity，targeting efficiency，drug uptake，cohesion to the target，stability in blood flow，and distinguishing effects in crossing barrier systems.

Liposomes；Duallymodification；Active targeting

R944

A

2095－5375（2014）08－0469－006

國家重大科技專項重大項目（No.2011CB933500）、國家自然科學基金（No.81302730）、東南大學大學生創新實踐項目（No.T14112002）

蔣雯，女，研究方向：生物醫學工程，E－mail：vivianchiang＠126.com

顧寧，男，教授，博士生導師，研究方向：納米材料及其在生物醫（藥）學中的應用，Tel：025－83272476，E－mail：guning＠seu.edu.cn