推拿治療對急性軟組織損傷家兔血清神經遞質表達影響的研究①

王宇峰 叢德毓 高 輝 楚云杰 (長春中醫藥大學附屬醫院，長春 130021)

急性軟組織損傷是臨床上的常見病和多發病，中醫推拿療法是治療該病的主要療法，具有操作簡便、療效確切等優勢。本研究通過觀察推拿療法對急性軟組織損傷家兔血清中5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)和β-內啡肽(β-EP)表達水平的影響，旨在分析推拿治療急性軟組織損傷疼痛的作用機制，促進推拿療法在急性軟組織損傷治療中的應用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物及分組 大耳白家兔30 只，雌雄各半，體重2.0～3.0 kg，由長春市億斯實驗動物技術有限責任公司提供，動物合格證號:SCXK(吉)2012-0002。根據隨機數字表，將家兔隨機分為空白對照組、模型對照組和推拿治療組，每組各10 只。

1.1.2 儀器與試劑 NE 酶聯免疫試劑盒，5-HT 酶聯免疫試劑盒，DA 酶聯免疫試劑盒，β-EP 酶聯免疫試劑盒(美國R＆D Systems Inc.公司);賀利氏臺式離心機(德國賀利氏公司);酶標儀(美國伯樂公司);MP120-1 型電子天平(上海第二天平儀器廠);FSH-ZA 型可調高速勻漿機(江蘇省金壇縣望華科教儀器廠);78-1 型電熱恒溫培養箱(湖北省黃石市醫療器械廠)。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 采用重物懸空墜落沖擊法［1］，建立急性軟組織損傷家兔模型，具體操作如下:實驗前用電動推剃除家兔右側臀部背毛，剃毛面積約5 cm × 5 cm。將動物左側臥位固定于實驗臺上，充分暴露脫毛區域，在動物臀部肌肉最豐滿的股二頭肌處標記。用長60 cm、直徑4 cm 不銹鋼導管的一端垂直對準標記部位，從導管另一端將重量為250 g的金屬重物沿導管呈自由落體落下，連續打擊6 次。損傷區域面積約3 cm × 3 cm，損傷后局部皮膚無破損，損傷區域明顯腫脹、瘀血，表明已完成該部位的急性軟組織損傷模型。

1.2.2 干預方法 (1)空白對照組:不予以任何處置，僅作對照觀察;(2)模型對照組:造模成功后，不予以任何處置，僅作對照觀察;(3)推拿治療組:造模成功后恢復24 h，予以推拿手法治療，具體操作如下:①三指摩法:食指、中指、無名指3 個手指自然伸直并攏，以3 個手指的指腹附著于家兔受傷的軟組織周圍采用輕柔的逆時針摩法，頻率為120 次/min，共操作5 min。②拇指推法:以拇指指腹附著于家兔傷側臀部，沿著家兔臀部的肌肉走形方向，施以拇指平推法，頻率為60 次/min，共操作5 min。③大魚際揉法:在家兔傷側的臀部，施以大魚際揉法，頻率為120 次/min，共操作5 min。上述治療15 min/次，1次/d，連續治療3 d。

1.2.3 標本采集與測定 分別在造模24 h 后，第1次推拿治療后30 min，以及第3 次推拿治療后30 min，對各組家兔進行耳緣靜脈采血，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定家兔血清中5-HT、DA、NE 和β-EP的表達水平，具體檢測方法按照試劑盒說明書操作。

1.3 統計學方法 采用SPSS18.0 統計軟件對實驗數據進行統計分析，計量資料用±s 表示，組間比較采用t 檢驗。

2 結果

2.1 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中5-HT 表達水平的影響 造模24 h 后，模型對照組家兔血清中5-HT 的表達水平顯著升高，與空白對照組比較具有顯著性差異(P＜0.001);在第1 次推拿治療后30 min 和第3 次治療后30 min，推拿治療組家兔血清中5-HT 的表達水平明顯降低，與模型對照組比較均具有顯著性差異(P＜0.01)，見表1。

2.2 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中DA 表達水平的影響 造模24 h 后，模型對照組家兔血清中DA 的表達水平明顯升高，與空白對照組比較具有顯著性差異(P＜0.001);在第1 次推拿治療后30 min 和第3 次治療后30 min，推拿治療組家兔血清中DA 的表達水平明顯降低，與模型對照組比較均具有顯著性差異(P＜0.001)，見表2。

2.3 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中NE 表達水平的影響 造模24 h 后，模型對照組家兔血清中NE 的表達水平明顯升高，與空白對照組比較具有顯著性差異(P＜0.001);在第1 次推拿治療后30 min和第3 次治療后30 min，推拿治療組家兔血清中NE的表達水平明顯降低，與模型對照組比較均具有顯著性差異(P＜0.01 和P＜0.001)，見表3。

表1 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中5-HT 表達水平的影響(ng/ml，±s，n=10)Tab.1 Massage of acute soft tissue injury were investi-gated effects of 5-HT expression level in serum(ng/ml，±s，n=10)

表1 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中5-HT 表達水平的影響(ng/ml，±s，n=10)Tab.1 Massage of acute soft tissue injury were investi-gated effects of 5-HT expression level in serum(ng/ml，±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.01，2)P＜0.001.

表2 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中DA 表達水平的影響(nmol/l，±s，n=10)Tab.2 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serum DA expression level of influence(nmol/L ±s，n=10)

表2 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中DA 表達水平的影響(nmol/l，±s，n=10)Tab.2 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serum DA expression level of influence(nmol/L ±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.001.

表3 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中NE 表達水平的影響(ng/ml，±s，n=10)Tab.3 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serumNE expression level influence(ng/ml，±s，n=10)

表3 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中NE 表達水平的影響(ng/ml，±s，n=10)Tab.3 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serumNE expression level influence(ng/ml，±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.01，2)P＜0.001.

表4 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中β-EP 表達水平的影響(nmol/l，±s，n=10)Tab.4 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serum β-EP expression level of influence (nmol/L，±s，n=10)

表4 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中β-EP 表達水平的影響(nmol/l，±s，n=10)Tab.4 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serum β-EP expression level of influence (nmol/L，±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.05，2)P＜0.01，3)P＜0.001.

2.4 推拿對急性軟組織損傷家兔血清中β-EP 表達水平的影響 造模24 h 后，模型對照組家兔血清中β-EP 的表達水平明顯降低，與空白對照組比較具有顯著性差異(P＜0.001);在第1 次推拿治療后30 min和第3 次治療后30 min，推拿治療組家兔血清中β-EP 的表達水平明顯升高，與模型對照組比較均具有顯著性差異(P＜0.001 和P＜0.05)，見表4。

3 討論

急性軟組織損傷多由外力作用于機體所致，造成損傷部位細胞變性壞死，正常的血液循環遭到破壞，引起急性無菌性炎癥［2］，局部出現腫脹及疼痛。推拿療法具有促進局部毛細血管擴張，改善血液循環和組織營養，促進肌肉的正常代謝，而起到止痛的作用。相關研究顯示，推拿療法具有明顯改善微循環障礙的作用［3］;還能促進局部的血液循環，加快局部病理產物的吸收［4］。

5-HT、DA、NE 和β-EP 等均屬于重要的神經遞質，與疼痛的發生關系密切。近年來，隨著推拿學科的發展進步，有學者研究發現5-HT、DA 在推拿鎮痛的過程中發揮了重要的作用［5，6］。本研究發現:①5-HT、DA、NE 和β-EP 等神經遞質與軟組織損傷關系密切，在導致急性軟組織損傷家兔疼痛的過程中具有重要作用;②推拿療法對5-HT、DA、NE和β-EP 等神經遞質具有良好的調整作用，可以通過調節5-HT、DA、NE 和β-EP 的表達水平而發揮其鎮痛作用。本研究初步揭示了推拿治療急性軟組織損傷疼痛的作用機制，并為推拿療法在急性軟組織損傷臨床治療中的應用提供了實驗依據。

［1］羅 麗，張 健，董 宇，等.大鼠骨骼肌纖維化形成過程中IGF-1，TGF-β1 的表達［J］.體育科學，2011，31(11):61-70.

［2］曾 平，廖小波，歐海玲，等.五方膏外敷治療大鼠急性軟組織損傷的實驗研究［J］.中醫正骨，2007，19(4):6-7.

［3］龔金德，樓惠軍，金惠銘，等.手外傷患者推拿前后甲皺微循環的變化［J］.上海中醫藥雜志，1984，5:34.

［4］宋 敏.推拿療法的作用機理及實驗研究［J］.甘肅中醫藥雜志，1994，7(24):43-45.

［5］周 軍，胡精超.推拿對延遲性肌肉酸痛作用機制的研究進展［J］.中國康復醫學雜志，2009，24(1):136-137.

［6］武云娟，唐 霄，蔣秋燕，等.穴位按摩法對產婦多巴胺水平影響及鎮痛作用的研究［J］.醫學研究雜志，2010，39(2):53-55.