苦參中黃酮類化合物的液質聯用研究*

李 琳，海麗娜，秦文杰，姚梅芬，白水朋，厲博文，張思巨，李安平

(1.北京振東光明藥物研究院有限公司，北京100120;2.中國中醫科學院中藥研究所，北京100700)

中藥苦參系豆科植物苦參Sophora flavescens Ait.的根，具有清熱燥濕、殺蟲、利尿等功效。苦參中主要含有生物堿類和黃酮類成分，其中黃酮類成分就有80 多種。隨著研究方法和科研水平的不斷提高，人們發現黃酮類成分具有明確的藥理活性［1］。隨著液質聯用技術和化學鑒定手段的廣泛應用，中藥有效成分快速、簡便的分析得以實現。本文采用HPLC/MS/MS(負離子模式)的方法，對苦參中主要的黃酮類化合物進行了指認和推斷，為苦參總黃酮物質基礎研究提供依據，并對其相關研究提供參考。

1 藥品、試劑與儀器

苦參采自山西省長治市，經山西振東道地藥材有限公司高級農藝師關扎根鑒定為苦參Sophora flavescens Ait.的根。三葉豆紫檀苷、苦參酮、降苦參酮為自制，含量在90% ～98%。Agilent 1200 高效液相色譜儀、Agilent 6410 質譜儀，均為Agilent 公司產品，含在線真空脫氣機、二極管陣列檢測器、四元梯度泵、柱溫箱、自動進樣器、電噴霧(ESI)離子源。色譜數據處理由Agilent 化學工作站完成。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

苦參經粗粉后，用乙醇提取，經聚酰胺柱層析，不同梯度洗脫液洗脫，得到數個部分，其中C 部分HCl-Mg 反應陽性，經TLC 和HPLC 分析，確認為總黃酮部分，供實驗用。

2.2 色譜條件

Agilent Eclipse XDB C18色譜柱(2.1 mm×150 mm，5 μm)。流動相A 為乙腈，B 為1 g/L 冰醋酸;0—30 min，6% ～32%A;30—70 min，32% ～70%A。柱溫35 ℃。流速1 mL/min。載氣溫度300 ℃;載氣流速10 L/min;霧化器壓力15 psi;毛細管電壓3 500 v。

2.3 結 果

2.3.1 總離子流圖及液相圖見圖1、圖2。

2.3.2 結果分析

液相圖和總離子流圖中，各峰的分離度較好。對總離子流圖中的12 個峰進行指認和推斷(見圖3、圖4)，具體分析結果如下。

圖1 總離子流圖(負離子模式)

圖2 HPLC 圖

圖3 總離子流圖(負離子模式)

圖4 化合物結構式

化合物1:M =446，m/z 491。與三葉豆紫檀苷(trifolirhizin)對照品液相色譜保留時間及質譜行為一致。負離子模式中，491 為［M +甲酸］-，二級質譜中283 為［M-葡萄糖基］-。正離子模式中，m/z 447 為［M+H］+。

化合物2:M =456，m/z 455。根據苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參醇(kurarinol)，其結構式如圖4 所示。二級質譜碎片峰:m/z 293，235，161，137。在二級質譜中，C 環斷裂(1 -2 位、4 -10 位斷裂)，得到m/z 293 的碎片。由于8 位的取代基容易失去H2O 而變成薰衣草基，因此二級質譜中會有m/z 137 的碎片。

化合物3:M =370，m/z 369。根據苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為(2S)-8 -異戊烯基-5 -甲氧基- 7，2＇，4＇ - 三羥基- 5 - 甲氧基二氫黃酮〔(2S)-8 - prenyl -5 - methoxy -7，2＇，4＇ - trihydroxy-5 - methoxy - flavanone〕，其結構式如圖4所示。在二級質譜中，m/z 207 為C 環斷裂得到的碎片，其裂解規律與化合物2 相似。

化合物4:M =442，m/z 441。根據苦參黃酮類化學成分檢索，分子量為442 的已知化合物只有苦參新醇Q(kushenol Q)，因此推斷其中有一個峰應該是苦參新醇Q，其結構式如圖4 所示。在二級質譜中，m/z 279 為C 環斷裂得到的碎片(1 -2 位、4 -10 位斷裂)，其裂解規律與化合物2 相似。

化合物5:M =454，m/z 453。根據苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參新醇I(kushenol I)、苦參醇N(kushenol N)或5 - 甲氧基苦參新醇C(5 -methylkushenol C)，其結構如圖4 所示。二級質譜碎片峰:m/z 275，177，149，139，137。在二級質譜中，C 環斷裂(1 -2 位、4 -10 位斷裂)，得到m/z 275，137(薰衣草基)兩個特征碎片。

化合物6:M =438，m/z 437。與苦參酮(kurarinone)對照品液相色譜保留時間及質譜行為一致。在二級質譜中，C 環斷裂(1 -2 位、4 -10 位斷裂)，得到m/z 275 的碎片，其裂解規律與化合物2 相似。

化合物7:M =440，m/z 439。根據苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參新醇C(kushenol C)或者苦參新醇X(kushenol X)，其結構式如圖4 所示。二級質譜碎片峰:m/z 261，217，193，177，137。在二級質譜中，C 環斷裂(1-2 位、4 -10 位斷裂)，得到m/z 261，193，137 的碎片峰。其裂解規律與化合物8 相似。因為有137 的碎片峰，所以排除苦參醇L。

化合物8:M = 424，m/z 423。與降苦參酮(norkurarinone)對照品液相色譜保留時間及質譜行為一致。其裂解規律與文獻［2］報道一致。二級質譜碎片峰:m/z 261，193，161，137，125。

化合物9:M =440，m/z 439。根據苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參新醇L(kushenol L)，結構式如圖4 所示。二級質譜碎片峰:m/z 261，193，177，149，124。二級質譜中，C 環斷裂，得到m/z 261，193 的碎片峰，未見m/z 137 的碎片峰，推斷不含有薰衣草基，因此排除苦參新醇C 和苦參新醇X。

化合物10:M=424，m/z 423。根據苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參新醇E(kushenol E)，結構式如圖4 所示。二級質譜碎片峰:m/z 261，193，192，161，124。二級質譜中，得到m/z 261、193 的特征峰，未見137 的碎片峰，可能不含有薰衣草基，由此推斷，化合物為苦參醇新E。其裂解規律與化合物9 相似。

化合物11:M =438，m/z 437。根據苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參啶(kuraridin)，結構式如圖4 所示。二級質譜碎片峰:m/z 275，191，161，139，137。二級質譜中，得到m/z 275、137 的特征峰。

化合物12:M=408，m/z 407。根據苦參黃酮類化學成分檢索，推斷為苦參新醇A(kushenol A)，結構式如圖4 所示。二級質譜中，得到m/z 261，193，137，125 的碎片峰，其裂解規律與化合物8 一致。

3 討 論

本研究結果顯示:苦參黃酮類成分大多含有薰衣草基側鏈，在電噴霧二級質譜中容易得到m/z137 的碎片峰。大多數黃酮類化合物ESI 質譜，容易在C 環斷裂(1—2 位、4—10 位斷裂)，得到A 環的特征峰。

因為對照品種類有限，本研究只初步推斷了二氫黃酮類成分和二氫異黃酮類成分的裂解規律，沒有得到苦參中黃酮醇類、查耳酮類、二氫黃酮醇類的單體化合物，所以此類型化合物的裂解規律及特征峰有待在以后的工作中驗證和完善。

對黃酮類化合物，筆者分別做了正、負離子兩種模式下的檢測，發現對于苦參中的黃酮類化合物在兩種離子模式下均能得到較好的結果［3-4］。筆者對正離子模式下得到的二級質譜與負離子模式進行了比較，兩者具有良好的一致性。

如果筆者推斷的化合物是正確的，那么二氫黃酮和二氫黃酮醇的裂解規律與文獻［2］所述有較大差異，文獻中二氫黃酮和二氫黃酮醇在裂解上有明顯的區別，有待得到二氫黃酮醇類的單體化合物加以驗證。化合物11 為查耳酮類化合物，初步推斷了查耳酮類化合物的裂解規律。

［1］趙慧娟，孫文基. 苦參中黃酮類化合物的化學成分及藥理研究進展［J］.中藥材，2005，28(3):247 -250.

［2］白玉，郭明全，宋鳳瑞，等. 苦參中黃酮類化合物的電噴霧質譜研究［J］. 高等學校化學學報，2004，25(2):284 -288.

［3］張瑞菊. 苦參中黃酮類有效成分的提取、檢測及相關性質的研究［D］.濟南:山東大學，2008:44 -57.

［4］朱麗君. 苦參有效部位化學研究［D］.北京:北京中醫藥大學，2007:67 -93.