免疫比濁法測定尿微量白蛋白的分析

李彧敏，張曉霞

（靈臺縣人民醫(yī)院，甘肅 靈臺 744400）

免疫比濁法測定尿微量白蛋白（UmALB）是近年來檢測腎臟病變的早期指標，并能在某種程度上反映病變的嚴重程度，因此越來越受到臨床的重視。筆者對免疫比濁法測定尿微量白蛋白進行了探索，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本 2013年5月10日在我院門診進行健康體檢的小學六年級一班學生和我院兒科住院患兒的新鮮隨機尿液。

1.1.2 儀器 CS800全自動生化分析儀。

1.1.3 試劑 采用寧波瑞源生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑。

1.2 方法

1.2.1 標本處理 新鮮隨機尿液標本離心取上清液測定：穩(wěn)定性試驗取新鮮尿液離心后上清液分裝于4℃和-20℃保存，測定時取出平衡至室溫后，離心取上清液測定。

1.2.2 測定條件設置 采用免疫比濁法，用試劑盒提供的標準品及試劑，按照試劑盒的要求設置參數(shù)：雙波長，兩點終點法，定標方式為logit log 5p，定標液濃度分別為0.0，12.0，22.2，49.5，103.5，205.5mg/L，批號1335F。

1.3 統(tǒng)計方法

線性試驗數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS1.0統(tǒng)計軟件拋物線擬合處理。

2 結(jié)果

2.1 線性試驗

定標后以標準物濃度為自變量X，吸光度為因變量Y（吸光度值×104），通過拋物線擬合尿微量白蛋白標準曲線，并與實際標準曲線比較。曲線方程為Y=1 052.10+124.639X-0.114 3X2，確定系數(shù)R2=1.000，P=0.000。因此可認為擬合曲線與實際曲線符合性很好，檢出限為0～200mg/L。

2.2 重復性試驗

2.2.1 批內(nèi)重復試驗 取一新鮮尿液標本連續(xù)測定尿微量白蛋白20次，計算變異系數(shù)，結(jié)果見表1。

2.2.2 批間重復試驗 取一新鮮尿液標本分裝成10份，同日分3批次測定（第一批3份，第二批3份，第三批4份），每份標本均測定尿微量白蛋白兩次，取平均值計算變異系數(shù)，結(jié)果見表1。

表1 尿微量白蛋白重復性試驗結(jié)果（mg/L）

2.3 回收試驗

取一新鮮尿液標本連續(xù)測定3次尿微量白蛋白，計算平均值作為基礎濃度，分別加入3份不同濃度微量白蛋白標準物（49.5，103.9，205.5 mg/L）混勻后，測定混合物尿微量白蛋白濃度，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 尿微量白蛋白回收試驗結(jié)果（mg/L）

2.4 干擾試驗

2.4.1 血紅蛋白干擾試驗 取一肝素抗凝全血標本，3 000 r/min離心3分鐘棄去血漿，剩余的紅細胞以生理鹽水洗滌4次，通過機械攪拌和加入蒸餾水使其溶血，制成血紅蛋白液，測定其血紅蛋白濃度。將已知尿微量白蛋白量的尿液與血紅蛋白液以不同比例混勻，測定混合物尿微量白蛋白含量，計算干擾率，結(jié)果見表3。

表3 尿微量白蛋白血紅蛋白干擾試驗結(jié)果

2.4.2 膽紅素干擾試驗 取一膽紅素定位陽性，尿蛋白定性為陰性的新鮮尿液標本，以此標本作為膽紅素干擾液。另取一膽紅素定性為陰性的新鮮尿液標本，測定其尿微量白蛋白含量，以此標本作為基礎液。將基礎液與膽紅素干擾液以不同比例混勻，測定混合物尿微量白蛋白含量，計算干擾率，結(jié)果見表4。

表4 尿微量白蛋白膽紅素干擾試驗結(jié)果

3 討論

正常人的腎小球濾液中存在小分子的蛋白質(zhì)，在通過近曲小管時絕大部分被重吸收，因此終尿中總蛋白含量很少，僅為30～130mg/24 h。當尿中白蛋白排出量在3.2～22.6mg/mmol·Cr（30～200 mg/Cr）或排除率在20～200μg/min這一范圍內(nèi)即為微量白蛋白尿[1]。尿微量白蛋白不僅對糖尿病、腎病的早期診斷、治療和預后具有重要意義，而且在高血壓、心血管疾病、腎小球疾病等所致的腎損傷中具有舉足輕重的作用[1]。

尿微量白蛋白用磺基水楊酸法、加熱乙酸法及試帶法基本不能查出[2]。故國內(nèi)外多采用免疫化學技術(shù)進行測定。本試驗采用免疫比濁法測定尿微量白蛋白，檢出限為0～200mg/L，批內(nèi)CV為0.55%，平均CV為1.18%，平均回收率為101.9%，與文獻[3]報道的檢出限10～160mg/L，批內(nèi)CV6.3%，批間CV 6.47%，平均回收率96.2%比較，結(jié)果較為理想，該試驗方法有良好的精密度和準確性。

干擾試驗結(jié)果表明，血紅蛋白和膽紅素均會對尿微量白蛋白的測定產(chǎn)生負干擾，并且干擾物濃度越高，負干擾率也越大。從血紅蛋白干擾試驗結(jié)果分析，當血紅蛋白濃度在0.61 g/L以下時，對尿微量白蛋白的測定影響可以忽略（干擾率<-2.60%）；當血紅蛋白濃度超過2.59 g/L時，干擾率高達-15.61%，這時測定的尿微量白蛋白結(jié)果是不可以接受的，臨床上測定無意義。膽紅素干擾試驗表明，膽紅素濃度<1.03μmol/L時，對尿微量白蛋白的測定影響較小（干擾率<-1.99%），可以忽略；膽紅素濃度上升到5.18μmol/L時，干擾率為-7.19%，對尿微量白蛋白的測定影響較大；膽紅素濃度達12.97μmol/L時，干擾率高達-14.44%，這時測定的尿微量白蛋白結(jié)果不可以接受，臨床上測定無意義。

由于本試驗檢出限制為0～200mg/L，測定前可先將標本離心，取上清液做蛋白定性試驗，若陰性或弱陽性可直接測定尿微量白蛋白，若陽性以上需以生理鹽水適當稀釋后測定，以免造成尿微量白蛋白試劑不必要的浪費。

關于尿微量白蛋白測定結(jié)果的表示現(xiàn)在尚無統(tǒng)一單位。目前文獻所采用的表示方法有兩種：一是對定時尿樣品的測定結(jié)果根據(jù)分泌的蛋白以μg/min表示；二是對不定時尿樣品常用尿微量白蛋白/尿肌酐表示。

總之，應用免疫比濁法測定尿微量白蛋白準確性高、精密度好，適于常規(guī)實驗室采用。

[1]齊志宏，劉振元.尿微量白蛋白測定的臨床意義[J].現(xiàn)代診斷與治療，1999,10（6）：351-352.

[2]寇麗筠.臨床基礎檢驗學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997.

[3]馮葛苓，王兆成，劉晨梅.免疫濁度終點法檢測尿微量白蛋白[J].河北醫(yī)藥，1999（4）：295-297.■