一株產油酵母菌搖瓶產油發酵條件的優化

馬勇+陳秀莉+劉曉光

摘要：以產油酵母突變菌株Y1m為試驗菌株，通過單因素試驗對突變菌株Y1m發酵條件進行了優化。結果表明，該突變菌株最適發酵產脂條件為發酵時間5 d，100 mL搖瓶裝液量20 mL，發酵液初始pH 6.0，種子液接種量為10%，溫度27 ℃，產脂培養基中硫酸鋅含量為0.5 mg/L，氯化鈣含量為0.3 g/L，氯化鐵含量為0.5 mg/L，硫酸銅含量為0.05 mg/L時，突變菌株Y1m在上述條件下油脂產量最高。

關鍵詞：產油酵母；產脂發酵；金屬離子；優化

中圖分類號：TQ920.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）01-0025-03

Optimizing Fermentation Conditions for Oil Production from A Strain of Oleaginous Yeast with Shake Flask

MA Yong，CHEN Xiu-li，LIU Xiao-guang

（Department of Biological Sciences and Technology， Baotou Teachers College， Baotou 014030， Inner Mongolia， China）

Abstract： Using the oleaginous yeast mutant strain Y1m as material， conditions for its lipid fermentation were optimized with single factor experiment. The results showed that the optimum fermentation conditions were as follows： 5 d， 20 mL volume of 100 mL shake flask， 100% seed inoculation of liquid，pH 6.0， 27 ℃， lipid fermentation with the concentration of ZnSO4， CaCl2， FeCl3， CuSO4 being 0.5 mg/L， 0.3 g/L， 0.5 mg/L， 0.05 mg/L， respectively.

Key words： oleaginous yeast； lipid fermentation； metal ion； optimization

收稿日期：2013-05-10

基金項目：包頭師范學院青年科學研究基金項目（BSYKJ2011-17）

作者簡介：馬 勇（1980-），男，遼寧臺安人，實驗師，在讀博士研究生，主要從事微生物油脂及植物生理與農作物基因工程方面研究，（電話）

13684725880（電子信箱）besbandon@126.com；通訊作者，劉曉光（1963-），男，內蒙古海拉爾人，教授，碩士生導師，主要從事動物

組織生物學研究，（電子信箱）besbandon@126.com。

中國人均石化資源儲量十分有限，而能源需求量卻與日俱增。微生物油脂是石化能源替代品生物柴油的潛在油源。由微生物生產富含多種生理功能的不飽和脂肪酸油脂已引起國內外的廣泛重視。因此，微生物油脂的研究與利用將成為新世紀油脂工業的一個發展方向[1-3]。微生物油脂又稱單細胞油脂，是由酵母、霉菌和細菌等微生物在一定的條件下利用碳水化合物、碳氫化合物和普通油脂作為碳源，在菌體內產生的油脂[4]。自然界中一些產油微生物在碳源充足而其他營養成分（通常為氮源）缺乏的情況下，可以在胞內大量積累油脂，甚至達到自身干重的60%以上[5]。產油真菌積累油脂過程中可在胞內形成一個或多個油脂顆粒[5-7]。與傳統油脂生產相比，微生物油脂生產具有許多優點：能連續規模化生產，周期短，所需原料豐富、價格便宜，并可利用工農業廢棄物，不受季節、氣候變化限制，可利用細胞誘變、融合及基因工程等技術改良菌種等[1]。

本試驗考察不同發酵條件、不同金屬離子對產油酵母突變菌株Y1m發酵產脂的影響，給產油酵母產脂發酵后期菌體內油脂積累條件提供基本配方參考，以期為合理利用許多廉價原料及大規模發酵生產微生物油脂奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 產油酵母突變菌株Y1m由包頭師范學院生物科學與技術學院試驗中心保藏。

1.1.2 培養基與試劑 麥芽汁培養基：糖度為10～12°Bé的麥芽汁，pH自然；液體種子培養基（g/L）：葡萄糖 20，（NH4）2SO4 5，KH2PO4 1， 酵母粉0.5，MgSO4·7H2O 0.5；基礎發酵產脂培養基（g/L）：葡萄糖30，蛋白胨1.5，KH2PO4 2，MgSO4·7H2O 0.5，（NH4）2SO4 0.5，pH自然。

1.2 方法

將產油酵母突變菌株Y1m接種在12°Bé麥芽汁固體斜面培養基上，于28 ℃靜置活化培養72 h。

1.2.1 誘變后菌株種子液制備 將活化后的突變菌株Y1m接一環于液體種子培養基中，160 r/min、28 ℃恒溫振蕩培養24 h。

1.2.2 誘變后菌株的初始發酵 在發酵產脂培養基中接種已培養24 h的液體種子，接種量10%，160 r/min、28 ℃恒溫振蕩培養72 h。

1.2.3 菌體生物量測定 將上述發酵培養液振蕩均勻后，取50 mL發酵培養液置于已知重量的100 mL離心管內，5 000 r/min離心5 min收集菌體，用生理鹽水洗滌2～3次，再次5 000 r/min離心5 min收集菌體，棄上清后，將含有濕菌體的已知重量的離心管置于65 ℃下干燥至恒重，冷卻至室溫后準確稱取離心管重量，以離心管前后重量的差值與發酵液體積的比值作為菌體生物量（mg/mL）。

1.2.4 油脂含量測定 每克干菌體加入4 mol/L HCl 6 mL，振蕩混勻，室溫下放置30 min后，沸水浴 3 min，-20 ℃速冷，加入10 mL氯仿與甲醇的混合試劑（氯仿與甲醇的體積比為1∶1），充分振蕩后， 4 500 r/min離心15 min，取氯仿層，加入等體積0.1%氯化鈉溶液，混勻，4 500 r/min離心15 min，用已知重量的蒸餾瓶收集氯仿層，用旋轉蒸發器揮發除去氯仿，稱重，計算油脂產量和菌體含油量（油脂得率）。

油脂產量=油脂質量/所用發酵液體積

油脂含量=（油脂質量/干菌體質量）×100%

2 結果與分析

2.1 突變菌株Y1m發酵條件優化

2.1.1 發酵培養時間對突變菌株Y1m產油脂的影響 培養時間對油脂的合成很重要。培養時間不足，菌體總數達不到最大而影響油脂產量；培養時間過長，微生物個體變形、自溶形成的油脂進入培養基難以收集[8]。在固定其他發酵條件下，采用發酵培養時間分別為2、3、4、5、6 d的發酵產脂培養基進行接種發酵72 h，測定發酵結果見表1。表1結果表明，發酵時間為5 d時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.92 g/L。隨著培養時間的增加，油脂產量有所下降，此時菌體開始利用所積累的油脂維持代謝。

2.1.2 溶氧量對突變菌株Y1m產油脂的影響 溶氧量是影響菌體細胞油脂含量的因素之一，產油微生物利用糖類物質合成油脂時需要氧氣參與。固定其他發酵條件不變，設置發酵產脂培養基的100 mL三角瓶裝液量分別為三角瓶容量的1/10、1/5、 3/10、2/5進行接種發酵72 h，測定發酵結果見表2。表2結果表明，產脂發酵時裝液量為搖瓶容量的1/5時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.75 g/L，隨著裝液量的增加油脂產量下降。

2.1.3 發酵產脂培養基初始pH對突變菌株Y1m產油脂的影響 培養基的初始pH不僅影響菌體的生長，而且影響菌體內部油脂的積累[9]。固定其他發酵條件不變，采用初始pH分別為5.0、5.8、6.0、7.0、8.0的發酵產脂培養基接種發酵72 h，測定發酵結果見表3。表3結果表明，當發酵液的初始pH 6.0時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.03 g/L。

2.1.4 接種量對突變菌株Y1m產油脂的影響 接種量的大小決定了菌種在搖瓶培養基中的生長繁殖速度[10]，固定其他發酵條件不變，取發酵液體積5%、10%、20%、30%的種子液，離心后分別制成等體積不同細胞數的菌懸液，接種菌懸液后發酵72 h，測定發酵結果（表4）表明，當種子液的接種量為10%時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.32 g/L。

2.1.5 溫度對突變菌株Y1m產油脂的影響 適宜的溫度促進產油微生物油脂的合成，固定其他發酵條件不變，分別在溫度為15、25、27、30、35 ℃條件下進行接種發酵，在不同發酵溫度下油脂產量最高時刻的測定結果見表5。表5結果表明，當發酵產脂溫度為27 ℃時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.21 g/L。

2.1.6 金屬離子對突變菌株Y1m產油脂的影響 金屬離子是菌體胞內酶的激活劑，發酵產脂培養基中它們含量的多少能夠影響到油脂的產量[11，12]。分別以硫酸鋅0.3 mg/L、氯化鈣0.5 g/L、氯化鐵1.0 mg/L、硫酸銅0.08 mg/L作為單因素試驗梯度中間值，固定其他發酵條件不變，加入不同含量的金屬鹽進行發酵培養，試驗結果見表6至表9。表6結果表明，當發酵產脂培養基中硫酸鋅含量為0.5 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.89 g/L。表7結果表明，當發酵產脂培養基中氯化鈣含量為0.3 g/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.06 g/L。表8結果表明，當發酵產脂培養基中氯化鐵含量為0.5 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.63 g/L。表9結果表明，當發酵產脂培養基中硫酸銅含量為0.05 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.10 g/L。

3 結論

通過對突變菌株Y1m發酵條件單因素優化后可知，發酵時間為5 d時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.92 g/L。隨著培養時間的增加，油脂產量有所下降，此時菌體開始利用所積累的油脂維持代謝。100 mL三角瓶裝液量為其容量的1/5時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.75 g/L，隨著裝液量的增加油脂產量下降。當發酵液的初始pH 6.0時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.03 g/L。當種子液的接種量為10%時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.32 g/L。當發酵產脂溫度為27 ℃時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.21 g/L。當發酵產脂培養基中硫酸鋅含量為0.5 mg/L，氯化鈣含量為0.3 g/L，氯化鐵含量為0.5 mg/L，硫酸銅含量為0.05 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，含量過高或者過低都不能夠促進油脂的積累。

參考文獻：

[1] 薛飛燕，張 栩，譚天偉.微生物油脂的研究進展及展望[J].生物加工過程，2005，3（1）：23-27.

[2] 趙宗保，華艷艷，劉 波.中國如何突破生物柴油產業的原料瓶頸[J].中國生物工程雜志，2005，25（11）：1-6.

[3] 咸 漠，甄 明，康亦兼，等.深黃被孢霉生物轉化十六醇合成油脂的研究[J].高等學校化學學報，2000，21（7）：1108-1109.

[4] 邢大輝，潘安龍，薛冬樺，等.深黃被孢霉利用不同碳源產油脂比較[J].生物工程學報，2010，26（2）：189-193.

[5] MENG X， YANG J M， XU X， et al. Biodiesel production from oleaginous microorganisms[J].Renew Energ，2009，34（1）：1-5.

[6] KAMISAKA Y， NODA N， SAKAI T， et al. Lipid bodies and lipid body formation in an oleaginous fungus， Mortierella ramanniana var. angulispora[J]. Biochimica et Biophysica Acta （BBA）-Molecular and Cell Biology of Lipids，1999，1438（2）：185-198.

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[8] 趙豐麗，余 蕓，張 弘，等.產脂酵母產脂培養條件研究及脂肪檢測方法初探[J].生物技術，2006，16（5）：47-50.

[9] 張 玲，李植峰，譚亞芳，等.一種簡便、快速的真菌油脂提取方法[J].生物技術，1999，9（6）：43-44.

[10] 陳朝洋.面包酵母誘變株M413的選育及發酵培養基的優選[J].福州大學學報（自然科學版），1997，25（5）：107-110.

[11] 王 華，李 靜，王冬梅，等.金屬離子對斯達油脂酵母發酵產油脂的影響[J].中國食品學報，2010，10（2）：67-73.

[12] 王 莉，孫玉梅，王培忠，等.金屬離子對發酵性絲孢酵母發酵產油脂的影響[J].大連輕工業學院學報，2005，24（4）：259-262.

（責任編輯 鄭 威）

1.2.4 油脂含量測定 每克干菌體加入4 mol/L HCl 6 mL，振蕩混勻，室溫下放置30 min后，沸水浴 3 min，-20 ℃速冷，加入10 mL氯仿與甲醇的混合試劑（氯仿與甲醇的體積比為1∶1），充分振蕩后， 4 500 r/min離心15 min，取氯仿層，加入等體積0.1%氯化鈉溶液，混勻，4 500 r/min離心15 min，用已知重量的蒸餾瓶收集氯仿層，用旋轉蒸發器揮發除去氯仿，稱重，計算油脂產量和菌體含油量（油脂得率）。

油脂產量=油脂質量/所用發酵液體積

油脂含量=（油脂質量/干菌體質量）×100%

2 結果與分析

2.1 突變菌株Y1m發酵條件優化

2.1.1 發酵培養時間對突變菌株Y1m產油脂的影響 培養時間對油脂的合成很重要。培養時間不足，菌體總數達不到最大而影響油脂產量；培養時間過長，微生物個體變形、自溶形成的油脂進入培養基難以收集[8]。在固定其他發酵條件下，采用發酵培養時間分別為2、3、4、5、6 d的發酵產脂培養基進行接種發酵72 h，測定發酵結果見表1。表1結果表明，發酵時間為5 d時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.92 g/L。隨著培養時間的增加，油脂產量有所下降，此時菌體開始利用所積累的油脂維持代謝。

2.1.2 溶氧量對突變菌株Y1m產油脂的影響 溶氧量是影響菌體細胞油脂含量的因素之一，產油微生物利用糖類物質合成油脂時需要氧氣參與。固定其他發酵條件不變，設置發酵產脂培養基的100 mL三角瓶裝液量分別為三角瓶容量的1/10、1/5、 3/10、2/5進行接種發酵72 h，測定發酵結果見表2。表2結果表明，產脂發酵時裝液量為搖瓶容量的1/5時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.75 g/L，隨著裝液量的增加油脂產量下降。

2.1.3 發酵產脂培養基初始pH對突變菌株Y1m產油脂的影響 培養基的初始pH不僅影響菌體的生長，而且影響菌體內部油脂的積累[9]。固定其他發酵條件不變，采用初始pH分別為5.0、5.8、6.0、7.0、8.0的發酵產脂培養基接種發酵72 h，測定發酵結果見表3。表3結果表明，當發酵液的初始pH 6.0時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.03 g/L。

2.1.4 接種量對突變菌株Y1m產油脂的影響 接種量的大小決定了菌種在搖瓶培養基中的生長繁殖速度[10]，固定其他發酵條件不變，取發酵液體積5%、10%、20%、30%的種子液，離心后分別制成等體積不同細胞數的菌懸液，接種菌懸液后發酵72 h，測定發酵結果（表4）表明，當種子液的接種量為10%時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.32 g/L。

2.1.5 溫度對突變菌株Y1m產油脂的影響 適宜的溫度促進產油微生物油脂的合成，固定其他發酵條件不變，分別在溫度為15、25、27、30、35 ℃條件下進行接種發酵，在不同發酵溫度下油脂產量最高時刻的測定結果見表5。表5結果表明，當發酵產脂溫度為27 ℃時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.21 g/L。

2.1.6 金屬離子對突變菌株Y1m產油脂的影響 金屬離子是菌體胞內酶的激活劑，發酵產脂培養基中它們含量的多少能夠影響到油脂的產量[11，12]。分別以硫酸鋅0.3 mg/L、氯化鈣0.5 g/L、氯化鐵1.0 mg/L、硫酸銅0.08 mg/L作為單因素試驗梯度中間值，固定其他發酵條件不變，加入不同含量的金屬鹽進行發酵培養，試驗結果見表6至表9。表6結果表明，當發酵產脂培養基中硫酸鋅含量為0.5 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.89 g/L。表7結果表明，當發酵產脂培養基中氯化鈣含量為0.3 g/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.06 g/L。表8結果表明，當發酵產脂培養基中氯化鐵含量為0.5 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.63 g/L。表9結果表明，當發酵產脂培養基中硫酸銅含量為0.05 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.10 g/L。

3 結論

通過對突變菌株Y1m發酵條件單因素優化后可知，發酵時間為5 d時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.92 g/L。隨著培養時間的增加，油脂產量有所下降，此時菌體開始利用所積累的油脂維持代謝。100 mL三角瓶裝液量為其容量的1/5時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.75 g/L，隨著裝液量的增加油脂產量下降。當發酵液的初始pH 6.0時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.03 g/L。當種子液的接種量為10%時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.32 g/L。當發酵產脂溫度為27 ℃時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.21 g/L。當發酵產脂培養基中硫酸鋅含量為0.5 mg/L，氯化鈣含量為0.3 g/L，氯化鐵含量為0.5 mg/L，硫酸銅含量為0.05 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，含量過高或者過低都不能夠促進油脂的積累。

參考文獻：

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[4] 邢大輝，潘安龍，薛冬樺，等.深黃被孢霉利用不同碳源產油脂比較[J].生物工程學報，2010，26（2）：189-193.

[5] MENG X， YANG J M， XU X， et al. Biodiesel production from oleaginous microorganisms[J].Renew Energ，2009，34（1）：1-5.

[6] KAMISAKA Y， NODA N， SAKAI T， et al. Lipid bodies and lipid body formation in an oleaginous fungus， Mortierella ramanniana var. angulispora[J]. Biochimica et Biophysica Acta （BBA）-Molecular and Cell Biology of Lipids，1999，1438（2）：185-198.

[7] MURPHY D J， VANCE J. Mechanisms of lipid body formation[J]. Trends Biochem Sci，1999，24（3）：109-115.

[8] 趙豐麗，余 蕓，張 弘，等.產脂酵母產脂培養條件研究及脂肪檢測方法初探[J].生物技術，2006，16（5）：47-50.

[9] 張 玲，李植峰，譚亞芳，等.一種簡便、快速的真菌油脂提取方法[J].生物技術，1999，9（6）：43-44.

[10] 陳朝洋.面包酵母誘變株M413的選育及發酵培養基的優選[J].福州大學學報（自然科學版），1997，25（5）：107-110.

[11] 王 華，李 靜，王冬梅，等.金屬離子對斯達油脂酵母發酵產油脂的影響[J].中國食品學報，2010，10（2）：67-73.

[12] 王 莉，孫玉梅，王培忠，等.金屬離子對發酵性絲孢酵母發酵產油脂的影響[J].大連輕工業學院學報，2005，24（4）：259-262.

（責任編輯 鄭 威）

1.2.4 油脂含量測定 每克干菌體加入4 mol/L HCl 6 mL，振蕩混勻，室溫下放置30 min后，沸水浴 3 min，-20 ℃速冷，加入10 mL氯仿與甲醇的混合試劑（氯仿與甲醇的體積比為1∶1），充分振蕩后， 4 500 r/min離心15 min，取氯仿層，加入等體積0.1%氯化鈉溶液，混勻，4 500 r/min離心15 min，用已知重量的蒸餾瓶收集氯仿層，用旋轉蒸發器揮發除去氯仿，稱重，計算油脂產量和菌體含油量（油脂得率）。

油脂產量=油脂質量/所用發酵液體積

油脂含量=（油脂質量/干菌體質量）×100%

2 結果與分析

2.1 突變菌株Y1m發酵條件優化

2.1.1 發酵培養時間對突變菌株Y1m產油脂的影響 培養時間對油脂的合成很重要。培養時間不足，菌體總數達不到最大而影響油脂產量；培養時間過長，微生物個體變形、自溶形成的油脂進入培養基難以收集[8]。在固定其他發酵條件下，采用發酵培養時間分別為2、3、4、5、6 d的發酵產脂培養基進行接種發酵72 h，測定發酵結果見表1。表1結果表明，發酵時間為5 d時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.92 g/L。隨著培養時間的增加，油脂產量有所下降，此時菌體開始利用所積累的油脂維持代謝。

2.1.2 溶氧量對突變菌株Y1m產油脂的影響 溶氧量是影響菌體細胞油脂含量的因素之一，產油微生物利用糖類物質合成油脂時需要氧氣參與。固定其他發酵條件不變，設置發酵產脂培養基的100 mL三角瓶裝液量分別為三角瓶容量的1/10、1/5、 3/10、2/5進行接種發酵72 h，測定發酵結果見表2。表2結果表明，產脂發酵時裝液量為搖瓶容量的1/5時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.75 g/L，隨著裝液量的增加油脂產量下降。

2.1.3 發酵產脂培養基初始pH對突變菌株Y1m產油脂的影響 培養基的初始pH不僅影響菌體的生長，而且影響菌體內部油脂的積累[9]。固定其他發酵條件不變，采用初始pH分別為5.0、5.8、6.0、7.0、8.0的發酵產脂培養基接種發酵72 h，測定發酵結果見表3。表3結果表明，當發酵液的初始pH 6.0時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.03 g/L。

2.1.4 接種量對突變菌株Y1m產油脂的影響 接種量的大小決定了菌種在搖瓶培養基中的生長繁殖速度[10]，固定其他發酵條件不變，取發酵液體積5%、10%、20%、30%的種子液，離心后分別制成等體積不同細胞數的菌懸液，接種菌懸液后發酵72 h，測定發酵結果（表4）表明，當種子液的接種量為10%時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.32 g/L。

2.1.5 溫度對突變菌株Y1m產油脂的影響 適宜的溫度促進產油微生物油脂的合成，固定其他發酵條件不變，分別在溫度為15、25、27、30、35 ℃條件下進行接種發酵，在不同發酵溫度下油脂產量最高時刻的測定結果見表5。表5結果表明，當發酵產脂溫度為27 ℃時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.21 g/L。

2.1.6 金屬離子對突變菌株Y1m產油脂的影響 金屬離子是菌體胞內酶的激活劑，發酵產脂培養基中它們含量的多少能夠影響到油脂的產量[11，12]。分別以硫酸鋅0.3 mg/L、氯化鈣0.5 g/L、氯化鐵1.0 mg/L、硫酸銅0.08 mg/L作為單因素試驗梯度中間值，固定其他發酵條件不變，加入不同含量的金屬鹽進行發酵培養，試驗結果見表6至表9。表6結果表明，當發酵產脂培養基中硫酸鋅含量為0.5 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.89 g/L。表7結果表明，當發酵產脂培養基中氯化鈣含量為0.3 g/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.06 g/L。表8結果表明，當發酵產脂培養基中氯化鐵含量為0.5 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.63 g/L。表9結果表明，當發酵產脂培養基中硫酸銅含量為0.05 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.10 g/L。

3 結論

通過對突變菌株Y1m發酵條件單因素優化后可知，發酵時間為5 d時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.92 g/L。隨著培養時間的增加，油脂產量有所下降，此時菌體開始利用所積累的油脂維持代謝。100 mL三角瓶裝液量為其容量的1/5時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為3.75 g/L，隨著裝液量的增加油脂產量下降。當發酵液的初始pH 6.0時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.03 g/L。當種子液的接種量為10%時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.32 g/L。當發酵產脂溫度為27 ℃時，突變菌株Y1m油脂產量最高，為4.21 g/L。當發酵產脂培養基中硫酸鋅含量為0.5 mg/L，氯化鈣含量為0.3 g/L，氯化鐵含量為0.5 mg/L，硫酸銅含量為0.05 mg/L時，突變菌株Y1m油脂產量最高，含量過高或者過低都不能夠促進油脂的積累。

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（責任編輯 鄭 威）