紅瘰疣螈外周血細胞組織學觀察

宋紹萍，楊國輝

（大理學院農學與生物科學學院，云南大理 671003）

血液是動物體內循環系統中重要的組成部分，血細胞的形態及組成具有一定的特異性，可作為反映物種特性及生理狀態的指標，同時也為動物的分類、生理及系統演化等提供重要依據。為此，許多學者對脊椎動物血細胞進行過研究〔1-8〕，對于兩棲類，至今已經完成十多種動物的血液組織學研究。紅瘰疣螈Tylototriton shanjingNussbaum，BrodieetYang 1995 屬于兩棲綱，有尾目，蠑螈科，疣螈屬的一類國家二級重點保護野生動物〔9〕，目前有關紅瘰疣螈的研究主要集中在繁殖、生態、染色體、皮膚結構及幼體形態發育等方面〔10-14〕，而有關紅瘰疣螈血細胞組織學的研究尚未見報道。本研究采用傳統的常規血涂片，姬姆薩（Giemsa）染色與血細胞計數法觀察并統計紅瘰疣螈全血細胞的形態特征及其數量比例，旨在為紅瘰疣螈的血液形態學、細胞免疫以及進化等方面的研究提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料實驗用紅瘰疣螈6 只均采自云南大理點蒼山地區，海拔1 800～2 300 m 之間，經模擬野外環境進行人工養殖7～350 d不等。見表1。

表1 紅瘰疣螈標本的測量值

1.2 方法乙醚麻醉后自心臟取血，制成血涂片，瑞氏-姬姆薩染色，奧林帕斯顯微鏡（BX51）成像系統觀察、拍照、測量，每個樣本統計5 片。細胞的大小取30 個細胞的平均值，血細胞計數用Neubauer計數板進行。白細胞比例的計算，取不重復視野中1 000個白細胞的記數，再算出百分比。

2 結果

2.1 血細胞分類計數對6個紅瘰疣螈個體，分別制作血涂片，對不同的個體進行血細胞分類計數，再算出平均數，結果見表2～3。結果顯示：紅細胞數量為1.48×105個/mm3，白細胞數量為0.17×105個/mm3，其中淋巴細胞占43%，單核細胞數占14%，中性粒細胞占19%，嗜酸性粒細胞占16%，嗜堿性粒細胞占8%。

表2 紅瘰疣螈6個個體紅細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞參數

表3 紅瘰疣螈6個個體嗜堿性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞參數

2.2 血細胞的形態及大小通過顯微鏡觀察，紅瘰疣螈中橢圓形的紅細胞較多，占90%以上，白細胞近圓形，常單個分散或多個聚集于紅細胞間。

2.2.1 紅細胞 對6只紅瘰疣螈外周血中的紅細胞進行測量，得出平均值，其紅細胞長徑為（28.71±2.31）μm、短徑（15.92±1.22）μm、細胞核長（10.17±0.89）μm、短徑（6.11±0.49）μm。成熟紅細胞表面光滑，有核，多數為橢圓形，少數梨形；除成熟紅細胞外，偶爾可見少量未成熟紅細胞、無核紅細胞和衰老的紅細胞。見圖1。與成熟紅細胞相比，未成熟紅細胞體積稍小，近圓形，核質比較大，核圓形，染色質結構較疏松，著色較淺，而衰老紅細胞的胞質內有顆粒狀物質，細胞核固縮，核結構模糊不清，染色加深；無核紅細胞的質著色較淺。

圖1 紅瘰疣螈血細胞形態

2.2.2 白細胞 白細胞多近圓形，根據其細胞質內有無特殊顆粒可分為有粒白細胞和無粒白細胞。有粒白細胞根據其嗜色性可分為嗜酸性粒細胞、嗜中性粒細胞和嗜堿性粒細胞。無粒白細胞則包括淋巴細胞和單核細胞，各種細胞的大小見表4。

表4 紅瘰疣螈白細胞的形態學參數（±s，μm）

表4 紅瘰疣螈白細胞的形態學參數（±s，μm）

項目細胞長徑細胞短徑嗜中性粒細胞27.27±1.92 23.53±2.50嗜酸性粒細胞27.15±0.91 26.27±0.83嗜堿性粒細胞25.58±2.94 23.51±3.71單核細胞26.58±3.17 23.52±3.72淋巴細胞14.79±0.69 12.11±0.93

根據圖1 可看出，嗜中性粒細胞多呈近圓形或馬蹄形，也有少量呈不規則形。核質之間明顯，細胞核較大，核有單葉核和分葉核，單葉核呈腎形、馬蹄形和半圓形，分葉核多為2～3 葉，少數為4～6 葉。嗜酸性粒細胞呈近圓形，細胞核常橢圓形，位于一側，細胞質被染成紫紅色。嗜堿性細胞呈近圓形，細胞質內顆粒較分散，被染成深紫藍色。淋巴細胞多成近圓形，細胞核位于細胞中央，所占比例很大，淋巴細胞的核被染成深藍色，胞質少且被染成淺藍色。單核細胞多呈近圓形，細胞核較大，核多馬蹄形或腎形，位于細胞中央，被染成藍紫色。細胞質被染成淡灰藍色。血栓細胞多數呈不規則形，常數個聚在一起，也偶有單個分散或3～4個連在一起，呈帶狀。細胞核較大，被染成深藍色。細胞質較少，呈淺藍色。

3 討論

紅瘰疣螈和其他兩棲類一樣，外周血中含有紅細胞和白細胞，但其數量和大小與其他兩棲類動物有明顯差異，在實驗中發現6 個個體間血細胞參數沒有明顯差異。見表2。人工飼養對其血細胞參數是否有影響還有待于進一步的研究。

3.1 紅細胞紅細胞是脊椎動物血液的主要有形成分，在機體內主要運輸O2和CO2，并對機體產生的酸、堿物質起緩沖作用，維持一定的酸堿平衡。動物紅細胞的形態、大小、數量與動物的進化和生態適應有一定的關系，動物越高等，紅細胞的數量越多，而體積越小。就兩棲綱而言，紅瘰疣螈的橢圓形紅細胞大?。?8.71±2.31）μm×（15.92±1.22）μm，介于無足目的版納魚螈Ichthyophis bannanica（32.30±5.08）μm×（18.17±2.71）μm 和無尾目中華蟾蜍Bufo gargarizans（15.48～21.94）μm×（10.32～14.19）μm 之間，在蠑螈科中紅瘰疣螈的橢圓形紅細胞又大于東方蠑螈Cynops orientalis（22.4×14.8）μm，表明紅瘰疣螈所屬的有尾目進化地位處于無足目和無尾目之間，所屬的疣螈屬比蠑螈屬低等，符合分子研究結果〔15〕。紅瘰疣螈紅細胞數量（1.48×105個/mm3）均低于中華蟾蜍（7.67×105個/mm3）和藍尾蠑螈Cynops cyanurus（7.74×105個/mm3），這可能與紅瘰疣螈行動緩慢、運動量小，代謝率較低等生活習性有關。

觀察紅瘰疣螈血涂片紅細胞時，還觀察到無核紅細胞和梨形紅細胞，無核紅細胞染色與紅細胞一致，認為無核紅細胞屬于血液中正常有形成分，可能是其原生質的脫水收縮，細胞核固縮，是細胞衰老的表現。梨形紅細胞的染色、結構與橢圓形紅細胞一致，也屬于血液中正常有形成分，在北方山溪鯢、黑斑蛙和新疆北鯢外周血細胞觀察中也發現有梨形紅細胞，估計這是由未成熟紅細胞直接分裂形成的，是兩棲類紅細胞的增殖補充的一種方式〔16〕，究竟什么原因引起未成熟紅細胞的直接分裂，還有待于進一步研究。

3.2 白細胞白細胞是動物機體防御和保護功能的重要組成成分，不同動物的各種白細胞的組成比例、大小有差異。就兩棲類而言，紅瘰疣螈外周血液中白細胞數量最多的是淋巴細胞，占43%，與其他兩棲綱動物一致，這可能與兩棲類的生境有關，一般兩棲類生活在清澈的山間溪流中，對水質要求較高，而淋巴細胞是機體特異性免疫反應的主要物質，所以在兩棲類外周血中白細胞數量最多的是淋巴細胞。

嗜中性粒細胞具有活躍的變形能力，高度的趨化性和很強的吞噬及消化細菌的能力，是吞噬外來微生物和異物的主要成分。紅瘰疣螈白細胞中嗜中性粒細胞含量（19%）與同科的東方蠑螈（22%）和藍尾蠑螈（20%）相似，與無足目的版納魚螈（15%）、有尾目的新疆北鯢（19%）與商城肥鯢（12%）和牛蛙（19%）接近，但與東北小鯢（1%）、北方山溪鯢（9%）、黑龍江林蛙（1%）差異較大，推斷這可能與兩棲動物生活習性、環境有關，不存在科屬間的差異。

嗜堿性粒細胞不具有吞噬能力，但可增加毛細血管通透性和釋放肝素、組胺等多種生物活性物質。在不同的脊椎動物中其含量存在明顯的差異，對于兩棲類動物它在白細胞中含量最少，紅瘰疣螈白細胞中僅占8%，新疆北鯢（1%）、東北小鯢（3%）、商城肥鯢（8%）、北方山溪鯢（6%），而有的種血液中就沒有嗜堿性粒細胞，如已經報道的東方蠑螈、藍尾蠑螈、黑龍江林蛙、東北林蛙，而有的含量又很高如版納魚螈（11%），究其原因，目前還不清楚，有待于進一步的探討〔17-22〕。

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