化學發光參與的免疫測定在臨床中的應用

麻志慧

（赤峰學院第二附屬醫院，內蒙古 赤峰 024000）

1 引言

化學發光免疫測定分析技術是指通過化學發光劑對抗體或抗原進行標記，并利用試劑的這種發光特性進行檢測的一種分析技術，可以進行有效定量或定性，現在已經被廣泛應用在了臨床診斷的許多領域.現綜述及展望如下.

2 化學發光免疫分析技術

2.1 起源

化學發光免疫測定分析技術最早應用在上世紀七十年代，當時只限于作為示蹤信號，而且儀器發展水平有限，其靈敏度差，且發光時長不足，依賴手工操作，無法實現試驗條件的即時控制，應用領域嚴重受限.后來發展到八十年代中期，辣根過氧化物酶標記技術的出現，使信號強度及發光時間明顯提高，解決了技術難題，從而得到迅猛發展和廣泛應用.

2.2 原理

2.2.1 發光原理

基于化學發光的免疫測定，首先是把化學發光物或酶標記物標記在抗體或抗原上，促使其相互之間發生免疫反應，即抗體與抗原進行特異性結合成復合物，之后把氧化劑或者化學發光劑加入生成的復合物，使其發光.之后再通過儀器檢測發光強度，進一步換算待測物的濃度.

能夠作為化學發光物的多為有機化合物，通過氧化反應出現發光現象，這是由于反應過程中的中間體能量釋放而發光.

2.2.2 檢測原理

處于激發態的分子在釋放的多余能量部分以光能釋放，從而發出波長一定的光子，而被檢測出，由于是否能夠的光子是微量的，在檢測的過程中往往加入微量倍增技術，從而提高顆粒磁粉的吸附量，加快反應速度，從而利于檢出.

2.3 分類

根據發光原理及試劑的不同，化學發光免疫技術被分為三種主要類型，發光物免疫測定、發光酶免疫測定及發光輔助因子免疫測定等.

3 臨床應用

3.1 對病毒的檢測

3.1.1 對梅毒螺旋體的檢測

對于梅毒的篩查，臨床常用的方法為檢測患者體內的非密螺旋體特異性抗體，然后進行確證檢測而確診.而常用的梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗、血凝試驗等人工檢測方法，操作繁瑣，耗時長但準確率低，無法滿足臨床，而廣州中醫藥大學第一附屬醫院檢驗科的何惠[1]等采用化學發光免疫測定法，可以利用全自動免疫化學發光分析儀，通過兩步法定性檢測，明顯降低了假陽性率，符合臨床需求.

3.1.2 對乙肝病毒標志物HBsAg的測定

乙型肝炎是一種傳染性強、流行廣泛且具有嚴重危害性的病毒性肝炎，傳統的檢測多采用ELISA法進行定性，但不能滿足臨床定量的要求.目前，多以HBsAg作為判斷病毒感染的標志，可以采用化學發光免疫測定法，對乙肝HBsAg抗原進行測定，既能定性，又可定量，靈敏度可以達到100%，特異性和符合率可分別高達96.15%及97.50%，各指標均能符合臨床診斷及治療的需求.焦梅[2]等通過化學發光免疫分析技術進行乙肝HBsAg的測定，發現其在較大范圍內線性較好.

3.1.3 艾滋病的預防

獲得性免疫缺陷綜合征，即艾滋病（AIDS），是由HIV病毒（人類免疫缺陷病毒）引起的，迄今為止沒有有效的治療手段，因此切斷感染途徑是重要措施.研究發現，可以通過化學發光免疫測定法進行對需要檢查的血清、儀器等樣本進行HIV抗原檢測，可不受黃疸、酯血及溶血的影響，降低了假陽性率，提高了檢測準確度.

3.2 對腫瘤標志物的檢測

在腫瘤患者細胞中，腫瘤標志物存在于其細胞及組織中，腫瘤標志物主要有蛋白質、癌基因產物、酶、激素等等.現在國內外許多學者通過化學發光免疫測定法對腫瘤標志物進行了檢測，對腫瘤的早期體外診斷及術后監測均提供了重要而有效的方法.例如Mac等通過化學發光免疫測定法檢測了血清中鱗狀細胞癌抗原、癌胚抗原以及cy-fra21-1的濃度，從而進行了食管癌的診斷和病情監測，效果顯著.

3.3 對心臟疾病的診斷

有學者通過試驗，進行了心臟疾病患者的心肌損傷標記物cTnT肌酸激酶同工酶CK-MB以及肌紅蛋白之間的相關系數分析，證實三者之間具有良好的相關性，因此可以利用化學發光免疫對這些指標進行臨床測定，用于臨床標本的檢測，有助于心臟類疾病的及時、有效、準確地診斷與病情監測.而且臨床的檢測技術已經相對成熟.例如，戶雪冬[3]等通過電化學光免疫法對患者的血清心肌損傷標志物進行了分析，有效檢出和確診了心肌梗死病例，比傳統的診斷方法準確而方便.

3.4 自身免疫性疾病的診治

3.4.1 系統性紅斑狼瘡（SLE）的診治

SLE是一種累及全身的自身免疫亢進類疾病，臨床癥狀多樣化，容易造成誤診及延期診斷，造成疾病治療的延誤.但是傳統的診斷方法僅從臨床表現很難取得正確的結果，有效的實驗室檢查被迫切需求.有同仁對SLE患者進行了分析，發現其dsDNA抗體與補體C3、C4呈負相關，而與疾病活動指數、血沉等成正相關，說明dsDNA抗體水平對SLE的診斷及病情發展判斷有良好的指示價值，可以通過化學發光免疫測定法測定dsDNA抗體的水平，從而幫助進行SLE疾病的判斷.但需要指出的是，dsDNA抗體的濃度與SLE病情的危重程度沒有直接相關性.

3.4.2 類風濕性關節炎的診治

類風濕性關節炎也是一種自身免疫系統疾病，常累及多個關節，可以通過血清學標志物的檢測進行診斷及監測.有學者采用化學發光免疫測定法檢測類風濕性關節炎患者的血清抗環瓜氨酸肽抗體，取得了較其他方法精密度更高，特異性更好的結果，而且整個檢測過程僅用了20分鐘，能夠較好地滿足臨床檢驗需求，對該疾病的治療具有良好的應用價值.

3.5 其他

化學發光免疫測定技術的應用領域還涵蓋了婦產科，如診斷早孕及滋養體細胞疾病；內分泌科，如甲狀腺疾病；血液科，如貧血等科別領域.

4 討論與展望

4.1 提高分析方法的靈敏度

能夠有效滿足疾病標記的抗原畢竟是少量的，因此，應該充分優化檢測方法，有效實現分析結果的放大，提高放大倍數，延長檢測下限，提高分析方法的靈敏度，使化學發光免疫測定應用范圍更加廣范，發揮更大價值.

4.2 提高分析儀器的準確性

任何分析和檢測，以準確性為最終目的，而凡是使用儀器的分析以提高儀器的準確性為根本.化學發光的免疫測定方法越來越廣泛地被應用，但是也有其相應的局限，進一步的改進工作，應以提高分析儀器的準確性、使儀器向小型化及智能化方向轉變為首要任務.

4.3 發掘新型發光物和高效催化劑

化學發光的免疫測定方法依賴于發光物的生成及高效催化劑的放大作用，為了擴大應用范圍、提高檢測的靈敏度，發掘新型發光物和高效催化劑是問題的重點.而且在這個基礎上和過程中，可以進一步研究新的分析方法.

4.4 修飾和增強化學發光反應效果

修飾和增強化學發光反應效果與發掘新型發光物及高效催化劑是相輔相成的，應該兩方面同時進行研究和改進.有利于擴大化學發光的免疫測定方法的應用領域和范圍，并且提高檢測靈敏度，提升檢測準確度.

5 結語

化學發光免疫分析技術靈敏度高、特異性好、分析方法簡單快速、能夠穩定地與標志物結合而無污染，不受檢測樣本的破壞，如溶血等的影響，在對病毒的檢測、腫瘤標志物的檢測、心臟疾病的診治以及免疫系統疾病的診斷等各方面應用效果好、但是相比放射性分析方法，尚在儀器的準確性、檢測方法的靈敏性方面有一定差距，應充分發掘新型的發光物和高效催化劑、修飾和增強化學發光效果，提高其檢測準確度，擴大其臨床應用范圍.

〔1〕何惠,周迎春,劉基鐸,等.化學發光免疫測定在梅毒螺旋體抗體檢測中的臨床應用[J].國際檢驗醫學雜志,2011,32(13):1469-1471.

〔2〕焦梅,李明.化學發光免疫技術定量測定HBsAg的評價[J].實用醫技雜志,2003,10(6):598-599.

〔3〕戶雪冬,戶秋冬,劉陽貴.電化學發免疫法檢測血清心肌損傷標志物及心肌酶學在心肌梗死中的應用[J].中國誤診學雜志,2009,6(23)：4545-4546.

〔4〕施麗娟.化學發光免疫分析技術及在臨床檢驗中的應用[J].檢驗醫學與臨床，2012,9（4）：454-456.