急性支氣管肺炎患兒血漿HNP1-3水平及其臨床意義

朱銀燕　華春珍　吳光聲　李珊

急性支氣管肺炎患兒血漿HNP1-3水平及其臨床意義

朱銀燕華春珍吳光聲李珊

【 摘要 】目的了解急性支氣管肺炎患兒血漿人中性粒細胞多肽1-3（HNP 1-3）水平及其在病原判斷中的參考價值。 方法88例急性支氣管肺炎患兒，分離其急性期和恢復期血漿，應用ELISA法檢測HNP 1-3、白細胞計數、中性粒細胞計數和hs-CRP，并進行比較。 結果急性期血漿HNP1-3為（257.0±150.6）ng/ml，明顯高于恢復期的（215.6±104.5）ng/ml（t=2.12，P＜0.05），且血漿HNP1-3水平與白細胞總數、中性粒細胞計數和hs-CRP均明顯相關（r=0.283、0.275、0.273，均P＜0.01）。 結論88例急性支氣管肺炎患兒急性期血漿HNP1-3水平明顯升高，且與白細胞總數、中性粒細胞總數和hs-CRP相關，可能對細菌性感染的診斷有參考價值。

【關鍵詞】支氣管肺炎人中性粒細胞多肽兒童

急性支氣管肺炎是我國兒童最常罹患的疾病之一，引起小兒肺炎的病原有細菌、病毒、支原體等，正確判斷病原是有效治療的前提。在發展中國家，小兒肺炎以細菌感染多見[1]，但細菌培養時間較長，門診患兒深部痰液采集依從性差，且抗生素的廣泛使用明顯影響病原菌的檢出率，故血常規和hs-CRP測定就成了輔助病原判斷的重要參考。人中性粒細胞多肽（human neutrophil peptides，HNP）是一類可殺滅細菌的α-防御素，是天然免疫的重要組分，共有6種，其中HNP 1-3主要存在于中性粒細胞的嗜天青顆粒中，其基礎水平的高低反映了抗感染作用的強弱[2]。正常情況下血漿HNP水平很低；而急性感染時則向胞外分泌大幅度增加[3]。本研究旨在探索急性支氣管肺炎患兒血漿HNP水平的變化，分析其在病原判斷中的可能參考價值。

1　對象和方法

1.1對象2012-01—03我院住院的部分急性支氣管肺炎患兒，共88例，其中男53例，占60.2%，女35例，占39.8%；年齡3～97（29.4±17.2）個月；均經痰液支原體DNA檢測和雙份血清支原體抗體IgG檢測排除支原體感染。所有患兒肺部均可聞及細濕啰音，X線胸片均見斑片狀或較大片陰影。所有患兒進行痰培養檢查，其中7例培養到致病菌，占8.0%，包括肺炎鏈球菌2例，肺炎克雷伯桿菌2例，大腸埃希菌1例，卡他莫拉氏菌1例、金黃色葡萄球菌1例。

1.2試劑和儀器EDTA抗凝管購自浙江友利醫學科技有限公司，人HNP 1-3試劑盒購自荷蘭Hycult Biotch公司，VERSA max microplate reader酶標儀為美國Molecular Devices公司產品。

1.3標本的采集和分離患兒分別于入院時以及恢復期（臨床癥狀和體征明顯好轉后），檢查臨床血液指標，檢查時抽取全血標本1ml，標本以EDTA抗凝，冰浴靜置數分鐘后4℃低溫低速離心分離血漿200μl并分裝2管，每管100μl，置-80℃冰箱保存待用。

1.4血漿HNP濃度的測定將-80℃保存的血漿室溫復溫，采用人HNP 1-3試劑盒，以ELISA法測定血漿樣本的HNP水平，采用復孔檢測結合陰性和零孔對照，保證結果準確可靠。整個操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.5統計學處理采用SPSS16.0統計軟件，測得計量資料采用表示，兩兩比較采用獨立樣本t檢驗，相關性采用Pearson相關分析。

2　結果

2.1一般情況急性期88例患兒均進行血常規檢查，其中50例白細胞計數高于正常參考值，占56.8%，中性粒細胞計數57例高于正常，占64.8%；84例同時檢測了hs-CRP，34例患兒hs-CRP高于正常（10mg/L），占40.5%；恢復期69例患兒進行了血常規和hs-CRP復查，其中白細胞計數8例高于正常，占9.1%，2例中性粒細胞計數高于正常，占2.3%，11例患兒hs-CRP高于正常，占12.5%。

2.2急性期和恢復期血漿HNP 1-3、白細胞計數、中性粒細胞計數和hs-CRP比較見表1。

表1　急性期和恢復期血漿HNP 1-3、白細胞計數、中性粒細胞計數和hs-CRP比較

由表1可見，88例患兒急性期血漿白細胞計數、中性粒細胞計數、hs-CRP水平、HNP 1-3水平均明顯高于恢復期（P＜0.05或0.01）。

2.3血漿HNP1-3水平、白細胞和中性粒細胞計數和hs-CRP水平相關性分析見表2。

由表2可見，血漿HNP 1-3水平與白細胞計數、中性粒細胞計數和hs-CRP水平均明顯相關（均P＜0.01）。

表2　血漿HNP1-3水平、白細胞和中性粒細胞計數和hs-CRP水平相關性分析

3　討論

本組資料顯示，88例患兒中半數以上的患兒急性期白細胞計數和中性粒細胞計數高于正常同齡兒，40.5%的患兒hs-CRP高于正常，符合細菌感染的表現，但深部痰液細菌培養陽性率較低，僅8.0%，分析原因，考慮與多數患兒入院前已用過抗生素有關，采集的痰液標本是否合格以及標本是否及時接種對結果也有一定影響。本組痰液細菌培養陽性的8例患兒和血常規和hs-CRP符合細菌感染的表現，所有患兒均使用過抗菌藥物，經治療后白細胞總數、中性粒細胞計數和hs-CRP水平明顯下降，臨床治愈，提示治療有效，但有為數不少的患兒缺乏細菌感染的充分依據依舊預防性使用了抗菌藥物，提示抗菌藥物的過度應用在臨床依舊存在，應強調避免抗菌藥物濫用。

國內外關于HNP與疾病相關性的研究相對較少。HNP屬于一類抗微生物多肽，HNP1和HNP3分別由30個氨基酸組成，兩者的區別在于N端第一個氨基酸。而HNP 2由29個氨基酸殘基組成，只在N端比HNP1和HNP3少一個氨基酸，因此HNP1-3多肽抗原性一致[5]，可通過ELISA法檢測血漿HNP 1-3濃度的總和。HNP 1-3作為一類抗菌肽，可有效地殺傷多種病原微生物，尤其是細菌[3，6－8]。Panyutich等[3]報道細菌性腦膜炎和敗血癥患者血漿HNP水平分別為120~910ng/ ml和900~170 000ng/ml，敗血癥患兒血漿HNP水平高于化膿性腦膜炎患者，但兩者血漿HNP水平又明顯高于健康對照組。Ihi等[8]研究發現感染性疾病患者的血漿HNP水平明顯高于健康對照組，感染者中細菌感染者血漿HNP水平明顯高于非細菌感染者。本組急性支氣管肺炎患兒急性期血漿HNP水平明顯高于恢復期水平，提示HNP參與了機體的抗感染免疫。HNP可通過與病原菌抗原結合，抑制病原菌在黏膜上皮細胞黏附增殖[9－10]，同時可增強病原抗原的免疫原性，促進抗原遞呈細胞的遞呈加工而發揮抗感染作用[9-10]。本組血漿HNP1-3水平與白細胞總數和中性粒細胞計數明顯相關，提示患兒受感染時白細胞總數尤其是中性粒細胞計數增高是血漿HNP釋放增加的原因，與文獻報道一致[3，8]。HNP在抗病毒感染中的作用相對不確定，國內王永杰等[11]研究發現HNP對冠狀病毒沒有抑制和殺滅作用，與本研究通過HNP高低判斷患者的病原種類這一結論吻合。國外Jendeberg等[12]曾研究社區獲得性肺炎患兒血清抗微生物肽水平，發現患者血漿HNP并未較健康對照組增加，分析原因，可能與對方研究中肺炎的病原以非細菌病原感染為主有關。

CRP增高作為急性感染的指標已在臨床上廣泛應用，hs-CRP作為對CRP超敏感的檢測方法，能檢測出較血液中低濃度時的CRP變化。本研究顯示血漿HNP1-3水平不僅與白細胞計數和中性粒細胞計數明顯相關，還與hs-CRP上升一致，顯示血漿HNP1-3水平可作為兒童急性支氣管肺炎病原判斷的輔助指標，若HNP增高提示感染的存在，若明顯增高提示細菌感染。HNP有抗感染的重要免疫功能，但HNP1-3同時具有一定的細胞毒性。有研究顯示，HNP1-3釋放到細胞外可引起組織損傷，高濃度的HNPs（＞20μg/ml）對氣道上皮細胞有細胞毒性[6]，因此，過強的HNP釋放在殺滅病原的同時也引起自身組織細胞損傷。

值得注意的是，由于HNP 1-3主要從中性粒細胞中釋放，若標本采集后未能及時分離血漿和白細胞，或處理不當致白細胞破壞，均可導致血漿HNP水平明顯升高，因此采集的標本經EDTA抗凝后必須及時冰浴靜置和4℃低溫離心，以期達到減少白細胞破壞的目的。此外，本組研究對象為經呼吸道標本DNA檢測和雙份血清肺炎支原體抗體檢測排除肺炎支原體肺炎的患兒，支原體肺炎患兒存在免疫功能紊亂，補體系統可能被激活[1]，而HNP抑制補體激活的經典途徑和凝集素途徑[13]，因此本研究預測HNP與肺炎支原體肺炎的發生可能無直接相關，故將肺炎支原體肺炎患兒排除，至于支原體肺炎是否存在HNP表達低下，有待進一步研究。

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（本文編輯：沈昱平）

收稿日期：（2014-01-14）

基金項目：浙江省醫藥衛生科技計劃項目（2012KYA155）

作者單位：310015杭州師范大學附屬醫院兒科

Serum human neutrophil peptides levels in children with bronchopneumonia

ZHU Yinyan，HUA Chunzhen，WU Guangsheng，et al.Department of Pediatrics，the Affiliated Hospital of Hangzhou Normal University，Hangzhou 310015,China

【 Abstract】ObjectiveTo investigate the serum human neutrophil peptides 1-3(HNP 1-3)levels in children with bronchopneumonia and its value for etiological diagnosis.MethodsPlasma samples were collected from 88 children with bronchopneumonia admitted between January and December 2012.Plasma HNP 1-3 levels were detected by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)at acute and convalescent stages of the patients.Independent sample t test was used to compare SA levels or iron levels between groups and Pearson correlation analysis was used to analyze correlation.ResultsEighty-eight children with bronchopneumonia，including 53 males(60.2%)and 35 females(39.8%)were included in the study.The mean HNP 1-3 level at the acute stage was 257.0±150.6 ng/ml,which was significant higher than that at the convalescent stage(215.6± 104.5mg/ml,t=2.12,P=0.036).Furthermore,plasma HNP1-3 levels were correlated with white blood cell(r=0.283,P＜0.001)，neutrophil(r=0.275,P=0.001)and HS-CRP(r=0.273,P=0.001).ConclusionPlasma HNP 1-3 level is significant higher at the acute stage than that in convalescent stage in children with bronchopneumonia and can be helpful in diagnosis of bacterial infection.

【Key words】BronchopneumoniahumanNeutrophil peptidesChildren