CD151和整合素α3在結腸癌中的表達及臨床意義

周譽 魏建國 戈立東

●論 著

CD151和整合素α3在結腸癌中的表達及臨床意義

周譽 魏建國 戈立東

目的 探討CD151和整合素α3在結腸癌中的表達及臨床意義。 方法 采用免疫組化SP法檢測40例結腸炎組織、96例結腸癌組織中CD151及整合素α3的表達，并分析其相關性。 結果 結腸炎組織和結腸癌組織中CD151表達陽性率分別為0、88．5%；有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組中CD151表達陽性率分別為100%、63．3%；遠處轉移組和無遠處轉移組中CD151表達陽性率分別為100%、78．0%，差異均有統計學意義（均P＜0．05）；在結腸炎組織和結腸癌中整合素α3表達陽性率分別為0、87．5%；有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組表達陽性率分別為100%、60．0%；遠處轉移組和無遠處轉移組中表達陽性率分別為100%、76．0%，差異均有統計學意義（均P＜0．05）。CD151和整合素α3的表達陽性率在結腸癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、組織學分型及分化程度中的差異均無統計學意義（均P＞0．05），而在有無淋巴結轉移和遠處轉移中的差異有統計學意義（P＜0．05）。 結論CD151和整合素α3的高表達與結腸癌的發生和轉移有關，檢測CD151和整合素α3的表達可能為結腸癌的診斷、預后判斷及治療提供參考依據。

結腸癌 CD151 整合素α3 免疫組化法

目前全球范圍內結腸癌仍然是消化道常見的惡性腫瘤之一，極易發生局部及遠處轉移，甚至部分患者早期即可發生淋巴結轉移[1]?；颊叩念A后與腫瘤轉移密切相關，抑制結腸癌轉移是提高患者生存率的重要途徑，因此，闡明結腸癌發生和轉移的機制是根治的關鍵。CD151是4次跨膜蛋白超家族(TM4SF)中的新成員，也是TM4SF中唯一的癌基因，其高表達與多種惡性腫瘤的進展及預后密切相關[2]。CD151可與多種整合素相結合，其中與整合素α3最為密切，兩者結合形成的復合物與細胞黏附和遷移轉移相關[3-4]。目前，在結腸癌中CD151和整合素α3的表達及其臨床意義國內尚未見相關報道。因此，筆者利用免疫組化法研究結腸癌組織中CD151和整合素α3的表達，并結合臨床病理資料探討其在結腸癌發生和進展過程中的作用，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 收集2008-01—2011-06在中國人民解放軍第169醫院手術切除并經病理確診為結腸癌標本96例，其中患者男63例，女33例；年齡35～74歲，平均（54.0±0.3）歲。大體類型：潰瘍型33例，腫塊型45例，浸潤型18例。組織學分型及分化程度：高分化腺癌15例，中分化腺癌46例，低分化腺癌26例，黏液腺癌9例。腫瘤直徑1.5～5.5cm，其中＜3.5cm者45例，≥3.5cm者51例。有淋巴結轉移者66例，無淋巴結轉移者30例；發生遠處轉移者46例（其中23例轉移到肺，10例轉移到肝臟，5例轉移到腦，5例轉移到骨，3例轉移到前列腺），無遠處轉移者50例。另選取2010-01—2011-01在中國人民解放軍第169醫院經腸鏡活檢證實為結腸炎的組織標本40例作為對照組，其中患者男25例，女15例，年齡32～77歲，平均（48.0±0.2）歲。本組患者術前均無化療、放療及免疫治療史。所有標本均經10%中性甲醛溶液固定，常規石蠟包埋，4μm厚連續切片。

1.2 試劑和檢測方法 鼠抗人CD151單克隆抗體和整合素α3單克隆抗體均購自美國Santa Cruz公司，免疫組化SP法試劑盒及DA月顯色液均購自福州邁新生物技術公司。采用免疫組化SP法，參照試劑盒說明書進行，陽性組織切片作為陽性對照，而陰性對照采用P月S代替鼠抗人CD151單克隆抗體和整合素α3單克隆抗體。按照免疫組化試劑盒說明書，每張切片加入過氧化酶阻斷劑50μl在室溫下孵育10min；P月S沖洗3次，3min/次；在每張切片再加入非免疫性動物血清50μl，室溫孵育5min；注意此步驟不沖洗，甩去多余的液體即可；于每張切片上再加入一抗50μl，放置于40C冰箱中孵育過夜；第2天用P月S沖洗3次，3min/次；每張切片再加入生物素標記的二抗50μl，室溫下孵育大約10min，P月S沖洗3次，3min/次；每張切片再加鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化酶溶液50μl，室溫孵育10min；P月S沖洗3次，3min/次；于每張切片加入100μl新鮮配制的DA月溶液，在顯微鏡下觀察顯色情況，然后決定停止顯色；自來水沖洗，蘇木素復染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3 結果判斷 CD151及整合素α3蛋白陽性定位于細胞膜和（或）細胞質，呈棕褐色顆粒，采用半定量積分法判定結果：顯色度按細胞著色深淺計分：0分基本無色，1分淺黃色，2分淺棕色，3分深棕色。再根據陽性細胞所占百分比計分,無陽性細胞為0分；陽性細胞＜10%為1分，10%～50%為2分，50%～75%為3分，＞75%為4分。顯色強度與陽性細胞百分比的乘積≥3分為陽性，＜3分為陰性。

1.4 統計學處理 采用SPSS13.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗；各指標間相關性采用Spearman等級相關分析。

2 結果

2.1 兩組中CD151及整合素α3的表達 CD151與整合素α3在陰性對照切片中均無陽性表達。CD151和整合素α3在結腸癌中的陽性表達率分別為88.5%和87.5%，而在結腸炎組織標本中均無表達，見表1。

表1 兩組中CD151、整合素α3的表達[例（%）]

2.2 CD151及整合素α3表達與結腸癌臨床病理特征的關系 在96例結腸癌組織中，CD151及整合素α3表達陽性率在患者的年齡、性別、腫瘤大小、組織學分型及分化程度中的差異均無統計學意義（均P＞0.05），而CD151在有淋巴結轉移組和遠處轉移組中的表達陽性率分別高于無淋巴結轉移組和無遠處轉移組，整合素α3在有淋巴結轉移組和遠處轉移組中的表達陽性率分別高于無淋巴結轉移組和無遠處轉移組（均P＜0.05），詳見表2。

2.3 CD151和整合素α3表達的相關性 CD151和整合素α3在結腸炎組織中均呈陰性表達；而在96例結腸癌患者中，85例CD151呈陽性表達，其有74例患者同時表達整合素α3。CD151和整合素α3在結腸炎癥組織和結腸癌中的表達經Spearman等級相關分析，結果表明CD151和整合素α3在結腸癌患者中的表達呈正相關（r=0.443，P＜0.01)。

3 討論

結腸癌是我國常見的惡性腫瘤，侵襲和轉移是影響患者預后及生存的主要原因之一，而侵襲和轉移是一個多因素參與、復雜的生物學過程，幾乎是所有惡性腫瘤所特有的本性，而細胞的遷徙運動參與了腫瘤轉移的整個過程。CD151基因是最近發現的癌基因，能夠與整合素特異性的結合從而形成復合體，進一步參與調控腫瘤細胞的增殖、黏附、遷移及血管形成等過程[5-6]。最新研究表明，CD151在許多惡性腫瘤中表達均較高，如前列腺癌[7]、膀胱癌[8]、甲狀腺癌[9]、結腸癌[10]、肝癌[11]等，其高表達與惡性腫瘤的進展及預后密切相關。整合素α3可以通過與其配體蛋白的相互作用，從而調節細胞內外信號的轉導，最終影響細胞遷移轉移的特性。細胞遷移信號從細胞外向細胞內傳遞的關鍵環節之一是整合素-CD151復合體的形成[12]，而作為跨膜連接器的CD151在該信號傳導過程中起非常重要的作用，并且與整合素α3最為密切相關，整合素α3-CD151復合體的形成與細胞的增殖、黏附及遷移密切相關。

本研究結果發現，CD151和整合素α3在結腸癌組織中的表達水平明顯高于對照組，并且CD151與整合素α3的表達呈正相關，進一步提示CD151和整合素α3的結合可能在結腸癌的發生和遷移中起協同作用。國外有研究報道，細胞遷移信號從細胞外向細胞內傳遞的關鍵環節之一就是CD151-整合素復合體的形成[12]。Yauch等[13]發現CD151-整合素復合體形成后的白細胞在纖維粘連蛋白上的連接約減少90%，同樣表明CD151-整合素復合體的形成在細胞遷移過程中起關鍵的作用。另外，我們通過分析96例結腸癌患者臨床資料發現：CD151和整合素α3的表達陽性率在結腸癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、組織學分型及分化程度中的差異均無統計意義（均P＞0.05），而在有無淋巴結轉移和遠處轉移的差異有統計學意義（P＜0.05），進一步說明CD151和整合素α3參與了結腸癌細胞的侵襲和轉移，可能是評估結腸癌侵襲和轉移能力的一種新指標，并且可能為結腸癌靶向治療提供新的分子靶點。因此，聯合檢測CD151和整合素α3的表達水平，能夠為評估腫瘤的轉移潛能及判斷患者預后提供理論依據。CD151能否作為一個恰當的關鍵點從而被用于腫瘤的分子靶向治療，還有待于基礎和臨床的進一步研究。

表2 不同臨床病理特征結腸癌患者CD151和整合素α3表達陽性率的比較[例（%）]

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Expression of CD151 and integrin α3 in colorectal carcinoma and its clinicopathological significance

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of CD151 and integrin α3 in colorectal carcinoma and its clinicopathological significance．Methods The expressions of CD151 and integrin α3 were examined by using immunohistochemistry in tissue sections from 40 cases of colonitis and 96 cases of colorectal carcinoma．Results The positive rates of CD151 in colonitis and colorectal carcinoma tissues were 0．0%(0/40)and 88．5%(85/96),respectively;in colorectal carcinoma with lymph node metastasis and those without lymph node metastasis were 100．0%(66/66)and 63．3%(19/30),respectively; in colorectal carcinoma with distant metastasis and those without distant metastasis were 100．0%(46/46)and 78．0%(39/50),respectively(all P＜0．05)．The positive rates of integrin α3 in colonitis and colorectal carcinoma tissue were 0．0%(0/40)and 87．5% (84/96),respectively;in colorectal carcinoma with lymph node metastasis and those without lymph node metastasis were 100．0% (66/66)and 60．0%(18/30),respectively;in colorectal carcinoma with distant metastasis and those withour distant metastasis were 100．0%(46/46)and 76．0%(38/50),respectively(all P＜0．05)．The expression of CD 151 and integrin α3 was not correlated with age,gender,tumor size,pathological types and differentiation of colorectal carcinoma(all P＞0．05),while closely correlated with lymph node metastasis and distant metastasis．Conclusion Detection of CD151 and integrin α3 may be of value in diagnosis, prognosis and treatment monitoring of colorectal carcinoma．

Colorectal carcinoma CD151 Integrin α3 Immunohistochemistry

2013-09-18）

（本文編輯：嚴瑋雯）

421001 衡陽，中國人民解放軍第169醫院病理科（周譽、戈立東）；紹興市人民醫院病理科（魏建國）

魏建國，E-mail：mickmouse88@163.com