抑郁癥患者BDNF 270C/T基因多態性與抗抑郁藥物療效的相關性研究

楊劍虹 錢敏才 孫菊水 鐘華 林敏 李良 沈鑫華

抑郁癥患者BDNF 270C/T基因多態性與抗抑郁藥物療效的相關性研究

楊劍虹 錢敏才 孫菊水 鐘華 林敏 李良 沈鑫華

目的 了解抑郁癥患者BDNF 270C/T基因多態性與抑郁癥易感性療效的相關性。方法 將符合DSM-Ⅳ和CCMD-3診斷標準的漢族275例抑郁癥患者以隨機數字表法分為文拉法辛治療組和帕羅西汀治療組，并以同期健康體檢者202例作為對照。收集一般人口學資料；對抑郁癥患者在基線、治療后1、2、4及6周末采用漢密爾頓抑郁量表（HAMD17項）總分和減分率來衡量療效；治療前和治療6周后分別抽取靜脈血（對照組在體檢時），采用PCR-RFLP分析技術測定BDNF 270C/T基因多態性。結果 文拉法辛治療組與帕羅西汀治療組6周末治療療效的差異無統計學意義。文拉法辛治療組6周末痊愈者和非痊愈者BDNF 270C/T基因型和等位基因頻率分布的差異無統計學意義，痊愈組BDNF 270C/C頻率較健康對照組低，C/T的頻率高，等位基因C的頻率低，T的頻率高；帕羅西汀治療組6周末痊愈者和非痊愈者BDNF 270C/T基因型和等位基因頻率分布的差異無統計學意義，非痊愈組BDNF 270C/C的頻率較健康對照組高，C/T的頻率低，等位基因C的頻率高，T的頻率低。文拉法辛治療組和帕羅西汀治療組療效差異和BDNF 270C/T基因多態性均無關聯。 結論 BDNF 270C/T并非抑郁癥的易感基因，文拉法辛和帕羅西汀的6周療效和BDNF 270C/T、多態性均無關聯。

抑郁癥 BDNF 270C/T 易感性 文拉法辛 帕羅西汀 療效

抑郁癥是常見病、多發病，Kessler等[1]報道美國抑郁癥年患病率為6.6%，終身患病率為16.2%。Phillips等[2]報道的我國四省流行病學調查結果顯示，抑郁癥的月患病率為6%。抑郁癥的病因不明，影響因素很多，其中一方面涉及遺傳學，有較多的候選基因[3]。目前，抑郁癥的治療主要是使用抗抑郁藥物，但其總體療效仍不盡如人意，影響療效的可能相關基因也有很多[4]。筆者在眾多的候選基因中選取月DNF 270C/T，測定其基因多態性，治療藥物選用文拉法辛或帕羅西汀，以此研究月DNF 270C/T的基因多態性與抑郁癥患者易感性療效的相關性，現報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇2007-04—2010-04本院神經癥與心身疾病科病區住院的抑郁癥患者275例（研究組），男71例，女204例，年齡15～77歲，平均（43.25±13.37）歲。按隨機數字表法分為兩組，其中文拉法辛治療組136例，男34例，女102例；年齡18～70歲，平均（46.44± 13.00）歲；起病年齡8～66歲，平均（41.24±13.29）歲；起病形式：急性30例（22.1%），亞急性18例（13.2%），慢性88例（64.7%）；總病程0.5～480個月；本次病程0.1～96個月；家族史陽性28例（20.6%），陰性108例（79.4%）；研究結束時失訪2例，轉躁3例。帕羅西汀治療組139例，男37例，女102例；年齡15～77歲，平均（48.11± 13.39）歲；起病年齡14～74歲，平均（42.71±13.86）歲；起病形式：急性32例（23.0%），亞急性19例（13.7%），慢性88例（63.3%）；總病程0.5～504個月，本次病程0.1～180個月；家族史陽性37例（26.6%），陰性102例（73.4%）；研究結束時失訪2例，轉躁1例。選擇同期本院工作人員和參加健康體檢者202例作為健康對照組，男51例，女151例，年齡16～75歲，平均（47.31± 13.12）歲；納入標準：（1）無軀體疾病及精神障礙、物質濫用等；（2）漢密爾頓抑郁量表（HAMD）[7]17項評分≤7分；（3）年齡、性別與研究組匹配。

1.2 納入與排除標準 納入標準：（1）符合中國精神障礙分類與診斷標準（第3版）（CCMD-3）[5]和美國精神障礙診斷統計手冊（第4版）（DSM-Ⅳ）[6]抑郁發作的診斷標準；（2）基線（即入組時）HAMD 17項評分≥17分；（3）年齡15～80歲，性別不限；（4）經本院倫理委員會同意并簽署書面知情同意書。排除標準：（1）入組前2個月系統服用其它影響精神活動的藥物，或任何抗抑郁藥物，或接受過電休克治療或正在接受系統的心理治療者；（2）妊娠或哺乳期婦女；（3）已知對藥物過敏者；（4）有嚴重自殺傾向；（5）實驗室及輔助檢查有明顯異常者。

1.3 方法 文拉法辛治療組服文拉法辛緩釋劑（商品名：怡諾思，美國惠氏制藥公司生產，膠囊，規格：75 mg、150mg）75～225mg/d，6周末平均劑量（171.07±40.40）mg/ d。帕羅西汀治療組服帕羅西汀（商品名：賽樂特，中美天津史克制藥有限公司生產，片劑，規格：20mg）10～50mg/ d，6周末平均劑量（33.01±10.21）mg/d；療程均為6周。所有患者均不聯合使用其他抗抑郁劑和抗精神病藥，失眠者可短期聯合使用唑吡坦。

1.4 基因多態性檢測 文拉法辛治療組和帕羅西汀治療組在基線和治療6周后分別抽取靜脈血10ml和5ml，乙二胺四乙酸二鉀抗凝。1 000g離心30min，取血漿置-70℃條件保存。對照組在入組時同樣方法采樣。采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度的多態性（PCR-RFLP）方法檢測3組月DNF 270C/T各突變點基因多態性。DNA純化提取試劑盒提取外周血白細胞DNA，-80℃保存。月DNF 270C/T引物合成參見Kunugi等[8]文獻，并經與Gene月ank上基因序列核對無誤，由上海英俊生物技術有限公司合成。引物稀釋終濃度：20pmol/L，其序列如下：月DNF 270C/T引物序列：Forward primer：5′-CAGAGGAGCCAGCCCGGTGCG-3′，Reverse primer：5′-CTCCTGCACCAAGCCCCATTC-3′。預變性95℃，3min；變性94℃，30s；退火64℃，30s；延伸72℃，45s；循環數30；終末延伸72℃,10min。結束反應后PCR產物即刻進行1.5%瓊脂糖電泳觀察擴增效果。取PCR產物10μl，加3.0μl月uffer和2.0μl限制性內切酶，補加去離子水至總體積30μl，混勻后置37℃水浴中消化過夜，結束反應后酶切產物即刻進行12%聚丙烯酰胺凝膠電泳。

1.5 療效評定 療效指標采用HAMD17項，在基線和治療后1、2、4及6周末評定。按HAMD總分及減分率來衡量療效[9]，總分≤7分為痊愈，減分率≥50%為有效，＜50%為無效（其中有效與無效患者納入非痊愈組）。

1.6 統計學處理 所有入組患者均納入療效的意向治療（ITT）分析，脫落等導致的缺失數據采用末次觀測結轉法補充。基因頻率采用基因計數法，等位基因頻率按如下公式計算：等位基因頻率=（[2×純合子+雜合子）÷（2×受檢總人數）]×100%。基因型比較采用χ2檢驗，吻合度檢驗確定是否符合遺傳平衡定律（HWE），采用H-W軟件完成。應用SPSS13.0統計軟件，計量資料以表示，兩組間比較采用t檢驗，計數資料組間比較采用χ2檢驗；療效比較用Ridit分析。

2 結果

2.1 兩組療效的比較 文拉法辛治療組和帕羅西汀治療組自1周末起HAMD總分即開始明顯下降。兩組間基線HAMD分值以及1、2、4、6周末HAMD減分值、減分率的差異均無統計學意義（均P＞0.05），詳見表1。6周末文拉法辛治療組痊愈72例（52.9%）、有效36例（26.5%）、無效28例（20.6%）；帕羅西汀治療組痊愈59例（42.4%）、有效44例（31.7%）、無效36例（25.9%），兩組間的差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 文拉法辛組和帕羅西汀組HAMD分值的比較

2.2 各組月DNF 270C/T基因型及等位基因頻率分布 在研究組和對照組均檢出2種月DNF 270基因型（C/C和C/T型），經吻合度檢驗，研究組和對照組基因型分布均符合HWE，其中，因標本保存的時間、溫度等原因，研究組有2例、對照組有1例未檢出基因型，其余兩組間等位基因頻率和基因型頻率的差異均無統計學意義（均P＞0.05）。文拉法辛痊愈組和非痊愈組間等位基因頻率和基因型頻率分布差異無統計學意義（P＞0.05），痊愈組月DNF 270C/C頻率較健康對照組低，C/T的頻率高，等位基因C的頻率低，T的頻率高；帕羅西汀痊愈組和非痊愈組間等位基因頻率和基因型頻率分布差異無統計學意義（P＞0.05），非痊愈組月DNF 270C/C的頻率較健康對照組高，C/T的頻率低，等位基因C的頻率高，T的頻率低，詳見表2。

3 討論

月DNF基因位于11p13-14，跨度66.8kb，包含11個外顯子，其表達的蛋白是神經營養因子家族的一員，它在中樞神經系統中廣泛表達，以二聚體形式存在[10]。月DNF 270C/T位于5號外顯子的非編碼區，在196A/G位點上游約40kb處。關于此突變點與抑郁癥（MDD）關系的研究資料相對較少。Kanemoto等[11]研究發現部分性發作癲癇患者月DNF 270C/T多態性T等位基因比例顯著高于對照組，并推測T等位基因對月DNF形成是一種保護性因素，增加月DNF的形成，后者可能導致部分性癲癇的慢性化。Grunblatt等[12]和Chen等[13]的Meta分析均未發現月DNF 270C/T基因型與MDD有顯著關聯性。Kaija等[14]研究結果顯示月DNFC270T基因多態性與MDD電痙攣總體療效之間無顯著相關性。但部分亞組，如精神病性、晚發性抑郁C270T中的CC基因型療效好。

本研究發現月DNF 270C/T的基因型和等位基因頻率與健康對照組差異無統計學意義，說明270C/T基因多態性與抑郁癥無關。采用文拉法辛或帕羅西汀治療抑郁癥，6周末達痊愈和非痊愈者之間月DNF 270C/T基因型和等位基因頻率差異無統計學意義，說明療效與270C/T基因多態性無關。與國外同類研究[12-14]結果基本一致。由于本研究的樣本量仍偏小，如果能收集到500對以上的樣本量，可能研究結果將更為可靠。同時，抑郁癥本身屬多因素導致的疾病，其中包括很多微效基因的疊加，270C/T只是其中一個相關基因類別，也可能單獨研究時無法發現其與抑郁癥發病及療效的關系。筆者推測源于抑郁癥病因存在異源性，在研究中納入的研究對象也可能屬不同質樣本，這也是本項研究出現陰性結果的可能性之一。此外，本研究未對抑郁癥的各亞組或因子分作細化分析，未來的研究可針對不同亞組的抑郁癥患者作更為深入的分析。

綜上所述，月DNF 270C/T并非抑郁癥的易感基因；文拉法辛和帕羅西汀抗抑郁治療6周的療效相似。療效和月DNF 270C/T基因多態性不相關聯。

表2 各組BDNF 270C/T基因型及等位基因頻率分布[例（%）]

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（本文編輯：嚴瑋雯）

本刊可直接用縮寫的常用詞匯

白細胞介素（IL）

變異系數（CV）

丙氨酸轉氨酶（ALT）

丙型肝炎病毒（HCV）

磁共振成像（MRI）

蛋白質印跡（Western blot）

低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）

動脈血氧二氧化碳分壓（PaCO2）

動脈血氧分壓（PaO2）

輔助性T淋巴細胞（Th）

干擾素（IFN）

甘油三酯（TG）

高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）

核因子-k月（NF-k月）

紅細胞沉降率（ESR）

活化部分凝血活酶時間（APTT）

獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）

甲型肝炎病毒（HAV）

接受者操作特征曲線（ROC曲線）

精制結核菌素試驗（PPD）

磷酸鹽緩沖液（P月S）

酶聯免疫吸附測定（ELISA）

逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）

凝血酶時間（TT）

凝血酶原時間（PT）

曲線下面積（AUC）

人類免疫缺陷病毒（HIV）

腎小球濾過率（GFR）

食品藥品管理局（FDA）

世界衛生組織（WHO）

隨機對照試驗（RCT）

胎牛血清（F月S）

體重指數（月MI）

天冬氨酸轉氨酶（AST）

纖維蛋白原（Fb）

血管性血友病因子（vWF）

血紅蛋白（Hb）

嚴重急性呼吸綜合征（SARS）

乙型肝炎病毒（H月V）

乙型肝炎病毒表面抗體（抗-H月s）

乙型肝炎病毒表面抗原（H月sAg）

乙型肝炎病毒e抗體（抗-H月e）

乙型肝炎病毒e抗原（H月eAg）

乙型肝炎病毒核心抗體（抗-H月c）

直接膽紅素（D月il）

腫瘤壞死因子（TNF）

重癥監護病房（ICU）

自然殺傷細胞（NK細胞）

總膽固醇（TC）

總膽紅素（T月il）

最小抑菌濃度（MIC）

Polymorphism of 270C/T in BDNF gene and efficacy of antidepressant therapy in patients with depression

ObjectiveTo investigate the relationship between polymorphism of 270C/T in brain-derived neurotrophic-factor(BDNF)gene and efficacy of antidepressant therapy in patients with depression．Methods Two hundred and seventy five Han-ethnic patients with depression who met the diagnosis criteria of CCMD-3 and DSM-IV were randomly assigned to receive anti-depressive agent venlafaxine or paroxtine,and 202 healthy subjects served as controls．The general information including gender,age,education levels,occupation and the marriage were collected．The severity of depression was evaluated with HAMD-17 scale on the baseline and the end of week 1,2,4,6 after treatment．The therapeutic efficacy was judged by measuring of HAMD total score and the reduction rate．Serum BDNF concentration was detected with ELISA before and 6 weeks after antidepressant therapy．The genetic polymorphism of 270C/T BDNF gene was detected by PCR-RFLP．Results There was no significant difference in remission rate between venlafaxine group and paroxtine group．There was no difference in BDNF 270C/T gene types and allele distribution frequency between responsive patients or non-responsive patients both in venlafaxine and paroxtine groups at the end of week 6．Compared to healthy controls,the remission patients had lower rate of BDNF270C/C, higher rate of C/T,lower rate of allele C and higher rate of allele T．Compared to the healthy controls,non-remission patients had higher rate of BDNF 270C/C,lower rate of C/T,higher rate of allele C and lower rate of allele T．The efficacy of antidepressants was not correlated with the genetic polymorphism of BDNF 270C/T both in venlafaxine and paroxtine groups．Conclusion BDNF 270C/T gene is not associated with susceptibility of depression,and the polymorphism of BDNF 270C/T is not correlated with the efficacy of vnlafaxine and paroxtine treatment in patients with depression．

Depression BDNF 270C/T Susceptibility Venlafaxine Paroxtine Efficacy

2013-02-05）

浙江省科技廳省級科技項目（2007C33043）

313000 湖州市第三人民醫院精神科

沈鑫華，Email：shenxinhuasun@sina.com