生肌玉紅膏對下肢慢性潰瘍患者組織學指標影響的臨床研究
——附117例臨床資料

江虹許巖磊姚昶卞衛和

（1.南京中醫藥大學，江蘇南京 210023；2.南京中醫藥大學附屬醫院，江蘇南京 210029）

生肌玉紅膏對下肢慢性潰瘍患者組織學指標影響的臨床研究
——附117例臨床資料

江虹1許巖磊1姚昶2卞衛和2

（1.南京中醫藥大學，江蘇南京 210023；2.南京中醫藥大學附屬醫院，江蘇南京 210029）

目的：觀察生肌玉紅膏對下肢慢性潰瘍愈合的療效及對組織學指標變化的影響。方法：由第三方數據管理機構將257例下肢慢性潰瘍患者隨機分為試驗組127例和對照組130例。通過標準化臨床路徑對患者進行下肢創面臨床治療，于治療前后分別測定創面肉芽組織內微血管計數、羥脯氨酸、血紅蛋白及VEGF水平。結果：試驗組總有效率為99.15%，明顯高于對照組的71.67%；治療后，2組創面肉芽組織內微血管計數、血紅蛋白和羥脯氨酸含量均顯著升高，且試驗組較對照組升高更為顯著；試驗組創面肉芽組織內VEGF水平顯著增高。結論：生肌玉紅膏對下肢慢性潰瘍愈合療效顯著，其作用機制可能與刺激肉芽組織分泌VEGF，促進膠原合成，進而促進創面肉芽組織微血管新生，改善血流灌注有關。

下肢慢性潰瘍 生肌玉紅膏 血管新生 羥脯氨酸 血紅蛋白 VEGF

生肌玉紅膏出自《外科正宗》，具有提毒祛腐、斂瘡生肌功效，臨床多用于瘡瘍膿水將盡、肉芽生長緩慢者。長期的臨床實踐顯示其對慢性體表潰瘍具有良好療效。我們前期臨床研究顯示生肌玉紅膏具有改善創面微循環、促進肉芽生長及堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）和血管內皮生長因子（VEGF）表達而促進下肢慢性潰瘍患者創面愈合的作用[1-4]。本研究進一步采用臨床多中心、雙盲、對照方法，通過檢測創面肉芽組織中血管新生、膠原合成等客觀指標，驗證生肌玉紅膏治療慢性下肢潰瘍的療效，現報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料2010年5月至2012年5月期間，本研究共搜集完成病例257例，均來源于江蘇省中醫院等位于江蘇省的11個分中心中醫外科門診與病房。所有患者均通過各中心醫院倫理委員會批準后，由南京海泰醫療信息系統有限公司進行雙盲隨機派位確立各中心的病歷號。至研究結束統計，257例患者中，試驗組127例，脫落10例，實際完成117例：男71例，女46例；年齡20～85歲，平均年齡（63.28±14.36）歲；病程2個月～30年，平均病程（2.84±6.12）年；創面初始面積為（10.15±13.14）cm2。對照組130例，脫落10例，實際完成120例：男81例，女39例；年齡20～85歲，平均年齡（61.28± 13.67）歲；病程2個月～30年，平均病程（2.72±5.92）年；創面初始面積為（7.96±8.93）cm2。2組患者一般資料比較無顯著性差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 診斷標準參照《Guidelines for the Best Care of Chronic Wounds》[5]制定的西醫診斷標準與《中華人民共和國中醫藥行業標準·中醫病證診斷療效標準》[6]制定的中醫診斷標準擬定如下：下肢潰瘍1個月以上，未出現解剖與功能上愈合傾向者。表現為大小不等，瘡面肉色灰白、淡紅或紫暗，表面或附有黃色膿苔，瘡口凹陷，邊緣形如缸口，膿水清稀，呈灰黑或帶綠色，帶腥味。潰瘍周圍可伴有濕瘡、靜脈曲張、色素沉著。

1.3 納入標準（1）年齡18～85歲，男女不限；（2）膝關節下方下肢潰瘍創面面積≥2cm2且≤50cm2者；（3）合并糖尿病，血糖控制平穩者（空腹血糖≤10mmol/L）；（4）完成知情同意及相關告知。

1.4 排除標準孕婦或哺乳期婦女及同時進行影響組織修復治療的患者。

2 治療方法

所有患者均采用統一的治療路徑，簡述如下：簽訂知情同意書后，記錄臨床觀察病例各項資料，常規用碘伏棉球消毒創面周圍皮膚，創面以生理鹽水棉球清除膿腐壞死分泌物，首次創面清創后，上敷藥物，無菌紗布（16～24層）覆蓋固定，隔日換藥。

2.1 試驗組以生肌玉紅膏油紗布（江蘇省中醫院制藥廠，蘇藥制字Z04000396）1片外敷創面。

2.2 對照組以凡士林紗布[江蘇省中醫院制藥廠，蘇衛藥準字（1982）203201]外敷創面。

對于創面肉芽取材方法及原則規范如下：應用生理鹽水棉球輕輕擦拭創面后，再使用干棉球蘸除創面滲液，選創面中央區肉芽，用眼科剪剪除約0.3cm×0.3cm大小肉芽一塊，深至以創面出血為度。因該操作有創且取材有限，每塊肉芽組織僅可行1項組織學指標檢測，故對每組患者依次循環行肉芽組織微血管計數、血紅蛋白、羥脯氨酸及血管內皮生長因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）水平測定，治療結束后若創面愈合，則不再取材檢測。

2組患者均于治療1個月后進行療效評價。

3 療效觀察

3.1 觀察指標（1）微血管計數：照CD34免疫組織化學試劑盒說明書標記各時點組織切片內微血管，400倍光鏡下每張切片取不重疊的2個視野，采用MIAS-200彩色病理圖像分析系統，行單位肉芽組織切片面積內的微血管計數。（2）血紅蛋白含量測定：采用光度計法測定，試驗組與對照組各時點標本取出后浸入2mL蒸餾水內5min以去除表面血液，按試劑盒（南京建成生物工程研究所提供，批號20110106）指示測定410nm吸收光度值，其標準曲線由人體血紅蛋白標準品（Sigma H 2500）測量獲得（μg/mg）。（3）羥脯氨酸含量測定：采用樣本堿水解法，將創面肉芽取出稱重后，按試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號20090106）指示予以勻漿后離心，加入試劑后，以分光光度儀測定其吸收值（μg/mg）。（4）VEGF含量測定：采用ELISA法檢測組織中VEGF 165的含量。根據試劑盒（廈門慧嘉科技有限公司提供，批號：No.CSB-E13100h）操作流程進行操作，以酶標儀測定450nm處峰值，根據標準品做的標準曲線得出相應的VEGF含量（ng/mg）。

3.2 療效評定標準總體療效參照《中華人民共和國中醫藥行業標準·中醫病癥診斷療效標準》[6]制定。臨床痊愈：創面完全愈合；顯效：創面明顯縮小75%以上；有效：創面縮小25%以上；無效：創面縮小不足25%。

3.3 統計學方法病例治療結束后，由南京海泰醫療信息系統有限公司輸出數據，數據統計分析由廣州馭時醫藥有限公司采用SPSS統計學軟件進行分析，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數資料以百分率表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為有顯著性差異。

3.4 治療結果

3.4.1 總體療效比較試驗組117例中，臨床痊愈32例，顯效56例，有效28例，無效1例，總有效率99.15%；對照組120例中，臨床痊愈13例，顯效18例，有效55例，無效34例，總有效率71.67%。2組總有效率比較具有高度顯著性差異（P<0.01），說明試驗組臨床療效優于對照組。

3.4.2 微血管計數比較2組患者經治療后，肉芽組織中單位面積新生血管數量均明顯增加（P<0.01）；組間比較，試驗組新生血管數量顯著多于對照組（P<0.01），數值約為對照組的2倍。詳見表1。

表1 試驗組與對照組治療前后創面肉芽組織內微血管計數比較（±s）個/視野

表1 試驗組與對照組治療前后創面肉芽組織內微血管計數比較（±s）個/視野

注：與同組治療前比較，*P<0.01；與對照組治療后比較，▲P<0.01。

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3.4.3 血紅蛋白含量比較2組患者經治療后，肉芽組織中血紅蛋白含量均明顯升高（P<0.01）；組間比較，試驗組血紅蛋白含量顯著高于對照組（P<0.01），與血管密度增加一致，約為對照組的2倍。結果見表2。

表2 試驗組與對照組治療前后創面肉芽組織內血紅蛋白含量比較（±s）

表2 試驗組與對照組治療前后創面肉芽組織內血紅蛋白含量比較（±s）

注：與同組治療前比較，*P<0.01；與對照組治療后比較，▲P<0.01。

組別血紅蛋白含量（μg/mg）治療前（例數）治療后（例數）試驗組0.31±0.05（33）0.77±0.16（22）*▲對照組0.33±0.08（31）0.38±0.18（26）*

3.4.4 羥脯氨酸含量比較2組患者經治療后，肉芽組織中羥脯氨酸含量均明顯升高（P<0.01）；組間比較，試驗組羥脯氨酸含量顯著高于對照組（P<0.01），為對照組將近2倍。詳見表3。

表3 試驗組與對照組治療前后創面肉芽組織內羥脯氨酸含量比較（±s）

表3 試驗組與對照組治療前后創面肉芽組織內羥脯氨酸含量比較（±s）

注：與同組治療前比較，*P<0.01；與對照組治療后比較，▲P<0.01。

組別羥脯氨酸含量（μg/mg）治療前（例數）治療后（例數）試驗組0.72±0.04（31）1.32±0.14（23）*▲對照組0.71±0.06（36）0.78±0.14（33）*

3.4.5 VEGF水平比較對照組治療后肉芽組織中VEGF水平較治療前無明顯變化；試驗組治療后肉芽組織中VEGF水平較治療前顯著增高（P<0.01），且明顯高于對照組（P<0.01）。詳見表4。

表4 試驗組與對照組治療前后創面肉芽組織內VEGF水平比較

3.5 安全性分析整個臨床試驗階段，無惡性不良事件發生，僅對照組中1例患者出現創緣輕度皮疹，未予特殊處理，后隨試驗進展，皮疹自行消退。

4 討論

下肢慢性潰瘍是外科臨床的常見病和疑難病，以“腐、瘀、虛”為主要病機。生肌玉紅膏具有提毒祛腐、斂瘡生肌之功效，在臨床上已被廣泛運用于治療該類疾病[1-4，7]。然而，目前仍然缺乏多中心大樣本隨機對照的臨床研究，且關于組織學檢測評價下肢慢性潰瘍的多中心雙盲研究尚未見報道。

本研究通過免疫組化標記血管，采用MIAS-200彩色病理圖像分析系統計算單位肉芽組織切片面積內的微血管數量，使得結果更為客觀，結果顯示試驗組微血管新生效果明顯優于對照組，達到對照組的2倍左右。雖然新生血管數量增加，但血管內血流是否增加仍需通過血紅蛋白含量來評價。研究表明，血紅蛋白可以較為客觀地體現血管新生的質量，且通過改善肉芽組織中血紅蛋白水平，可以達到促進創面快速愈合的目的[8]。本研究顯示試驗組血紅蛋白含量增加結果與血管新生數量一致，提示生肌玉紅膏可以顯著提高肉芽組織新生血管的血流灌注，增加微循環，促進愈合。為此，我們進一步通過VEGF測定探討其機制。

VEGF是目前發現唯一作用于血管內皮細胞的生長因子，在血管新生中起到關鍵作用[9]，本研究結果顯示生肌玉紅膏可以顯著刺激下肢慢性潰瘍肉芽組織中VEGF分泌，促進血管新生，而對照組肉芽組織中VEGF含量無明顯升高，雖然治療后血管新生數量增加，但僅增加約10%，試驗組增加了120%，提示出生肌玉紅膏刺激VEGF分泌的療效。

創面肉芽血循環的改善，促進了肉芽生長，膠原合成，羥脯氨酸為膠原蛋白水解而來，故創面肉芽組織中羥脯氨酸的含量能在一定程度上反映創面膠原合成的狀況[10]。本研究顯示生肌玉紅膏能夠促進創面膠原蛋白合成，結果與提高血管新生、血流灌注及創面愈合相一致。

綜上所述，生肌玉紅膏治療下肢慢性創面1月，臨床未見不良反應，安全有效。本研究首次揭示了生肌玉紅膏具有促進創面肉芽組織微血管新生，改善肉芽組織血流灌注功效，其機制之一為刺激肉芽組織分泌VEGF，由此促進膠原合成，有利于下肢慢性創面的愈合，與前期癥狀學結果一致[1-4]。今后可進一步進行量效與時效研究。

[1]施裕新，姚昶，張曉清，等.生肌玉紅膏改善下肢慢性創面患者生活質量的雙盲隨機對照.中國老年學雜志，2013，33（9）：1992

[2]尹恒，應語，姚昶，等.生肌玉紅膏治療下肢慢性潰瘍祛腐生肌療效的臨床研究.南京中醫藥大學學報，2013，29（2）：121

[3]張晶，姚昶，尹恒，等.生肌玉紅膏促進下肢慢性創面愈合257例隨機對照多中心臨床研究.中醫雜志，2013，54（1）：35

[4]應語，姚昶，卞衛和，等.生肌玉紅膏干預下肢慢性潰瘍創面炎癥反應的臨床研究.西部中醫藥，2013，26（2）：7

[5]Robson MC，Barbul A.Guidelines for the best care of chronic wounds.Wound Repair Regen，2006，14（6）：647

[6]國家中醫藥管理局.中醫病證診斷療效標準.南京：南京大學出版社，1994：51

[7]姚昶，高衛衛，楊理，等.生肌玉紅膏促進慢性體表潰瘍愈合的臨床研究.上海中醫藥大學學報，2009，11（6）：29

[8]Callaghan MJ，Chang EI，Seiser N，et al.Pulsed electromagnetic fields accelerate normal and diabetic wound healing by increasing endogenous FGF-2 release.Plast Reconstr Surg，2008，121（1）：130

[9]Nakayama M，Nakayama A，van Lessen M，et al.Spatial regulation of VEGF receptor endocytosis in angiogenesis.Nat Cell Biol，2013，15（3）：249

[10]李震，李祝，房秋寒，等.中藥抗皮膚衰老劑對小鼠皮膚羥脯氨酸含量的影響.山東中醫藥大學學報，1997，21（2）：142

R632.105

：A

：1672-397X（2014）12-0029-03

江虹（1991-），女，碩士研究生，從事中醫外科學臨床研究。

姚昶，yaochang67@126.com

2014-05-27

編輯：王沁凱岐軒

“十一五”國家支撐計劃（2008BAI53B014）；康緣中醫藥科技創新基金（HZ1009KY）；江蘇省中醫藥領軍人才（LJ2009002）；江蘇高校優勢學科建設工程資助項目（012062003010）